实验一上 普通光学显微镜下的细胞和细胞器

实验一普通复式光学显微镜下的细胞和细胞器一实验目的1熟悉普通复式光学显微镜的主要结构和基本性能。2观察各种细胞和细胞器的结构特点。

二实验原理普通光学显微镜从构造上可分为光学、机械和电子三大系统。由物镜、目镜、聚光镜、光源、载物台和支架等组成。利用光线照明，标本中各点依其光吸收的不同而在明亮的背景中成像。显微镜的能力是质量和性能的标志。能力包括分辨率、放大率、焦点深度和视场宽度等，其中最重要的是分辨率。普通复式光学显微镜技术分辨率是指区分开两个质点间的最小距离。数值孔径（NA，镜口率）：光线投射到物镜上的最大开口角度一半的正弦乘上标本与物镜间介质的折射率的乘积。

NA=n•sinα/2n为介质的折射率，α为镜口角。分辨率：能分辨被检物体细微结构最小间隔的能力。D=0.61λ/NA

λ为波长。数值孔径越高，分辨率越高。放大率：最终成像大小与原物体大小的比值。总放大倍数＝物镜的放大倍数×目镜的放大倍数物镜的镜口角=AOB光学显微镜成像原理机械部分光学部分普通光学显微镜结构机械部分主要结构镜座、镜柱粗调节螺旋和细调节螺旋载物台、推进器和玻片夹物镜转换器光学部分主要构件光学部分包括照明系统和成像系统光学部分主要构件物镜低倍镜（1×~6×，常用的4×、10×）高倍镜（25×~63×，常用的40×）油镜（90×、95×、100×

）目镜（5×、6×、8×、10×

、12×、15×）物镜侧面符号的含义10/0.30表示放大10倍，数值口径为0.3040/0.65表示放大40倍，数值口径为0.65100/1.25oil表示放大100倍，数值口径为1.25，为油镜160/0.17表示镜筒长度和所需盖玻片的厚度（mm）WD表示工作距离不同物镜的数值孔径与工作距离（10倍目镜）物镜放大倍数（×）总放大倍数（×）数值口径工作距离（mm）4400.1025101000.255.6404000.650.610010001.250.14光学显微镜成像原理

光学显微镜是利用目镜和物镜两组透镜系统来放大成像的。A″B″和眼睛的距离为显微镜的明视距离，标本AB的向经过物镜（L1）后到A′B′处称谓一个放大倒立的实像，F1为L1的后焦点，当光线传到目镜（L2）时，在A″B″处A′B′被放大成一个直立的虚像，然后传递到视网膜上，标本AB就被放大了。人眼看到的是AB被放大后的虚像，其与原样品的方向相反。观察的物体AB观察点目镜L2中间所成的实像A′B′物镜L1放大的虚像A″B″光学显微镜的使用规程一、实验时要把显微镜放在座前桌面上稍偏左的位置，镜座应距桌沿5cm左右。二、打开光源开关，调节光强到合适大小。三、转动物镜转换器，使低倍镜头正对载物台上的通光孔。先把镜头调节至距载物台1～2cm左右处，然后用左眼注视目镜内，接着调节聚光器的高度，把孔径光阑调至最大，使光线通过聚光器入射到镜筒内，这时视野内呈明亮的状态。四、将所要观察的玻片放在载物台上，使玻片中被观察的部分位于通光孔的正中央，然后用标本夹夹好载玻片。光学显微镜的使用规程五、先用低倍镜观察（物镜4X、10X、目镜10x）。观察之前，先转动粗动调焦手轮，使载物台上升，物镜逐渐接近玻片。需要注意，不能使物镜触及玻片，以防镜头将玻片压碎。然后，左眼注视目镜内，同时右眼不要闭合（要养成睁开双眼用显微镜进行观察的习惯，以便在观察的同时能用右眼看着绘图），并转动粗动调焦手轮，使载物台慢慢下降，不久即可看到玻片中材料的放大物像。六、如果在视野内看到的物像不符合实验要求（物像偏离视野），可慢慢调节载物台移动手柄。调节时应注意玻片移动的方向与视野中看到的物像移动的方向正好相反。如果物像不甚清晰，可以调节微动调焦手轮，直至物像清晰为止。光学显微镜的使用规程七、如果进一步使用高倍物镜观察，应在转换高倍物镜之前，把物像中需要放大观察的部分移至视野中央（将低倍物镜转换成高倍物镜观察时，视野中的物像范围缩小了很多）。八、在转换高倍物镜并且看清物像之后，可以根据需要调节孔径光阑的大小或聚光器的高低，使光线符合要求（一般将低倍物镜换成高倍物镜观察时，视野要稍变暗一些，所以需要调节光线强弱）。九、观察完毕，应先将物镜镜头从通光孔处移开，然后将孔径光阑调至最大，再将载物台缓缓落下，并检查零件有无损伤（特别要注意检查物镜是否沾水沾油，如沾了水或油要用镜头纸擦净），检查处理完毕后即可装箱。油镜的使用

100×物镜是油浸物镜。使用前必需在镜头与盖玻片间加浸油。

油镜的透镜很小，光线通过玻片与油镜头之间的空气时，因介质密度不同，发生折射或全反射，使射入透镜的光线减少，物象显现不清。若在油镜与载玻片之间加入和玻璃折射率（n=1.52）相近的香柏油（n=1.515），则可减少光线折射，使进入透镜的光线增多，视野亮度增强，提高分辨率，使物象明亮清晰。

在油镜观察结束后，切记将镜头和其他沾有油污的部件清擦净。光学显微镜的维护一、必须熟练掌握并严格执行使用规程。二、取送显微镜时一定要一手握住弯臂，另一手托住底座。显微镜不能倾斜，以免目镜从镜筒上端滑出。取送显微镜时要轻拿轻放。三、观察时，不能随便移动显微镜的位置。四、凡是显微镜的光学部分，只能用特殊的擦镜头纸擦拭，不能乱用他物擦拭，更不能用手指触摸透镜，以免汗液玷污透镜。五、保持显微镜的干燥、清洁，避免灰尘、水及化学试剂的玷污。六、转换物镜镜头时，不要搬动物镜镜头，只能转动转换器。光学显微镜的维护七、切勿随意转动调焦手轮。使用微动调焦旋钮时，用力要轻，转动要慢，转不动时不要硬转。八、不得任意拆卸显微镜上的零件，严禁随意拆卸物镜镜头，以免损伤转换器螺口，或螺口松动后使低高倍物镜转换时不齐焦。九、使用高倍物镜时，勿用粗动调焦手轮调节焦距，以免移动距离过大，损伤物镜和玻片。十、用毕送还前，必须检查物镜镜头上是否沾有水或试剂，如有则要擦拭干净，并且要把载物台擦拭干净。三实验仪器、材料和试剂1仪器、用具：普通复式光学显微镜等2材料：各种组织、细胞和细胞器的装片四实验内容与方法1普通复式光学显微镜的基本构造2普通复式光学显微镜的性能和质量3普通复式光学显微镜的使用方法4各种组织、细胞和细胞器的观察和比较动物细胞形态结构观察鸡血细胞动物神经细胞动物平滑肌细胞鸡血细胞

重点在高倍镜下和油镜下观察红细胞、嗜中性白细胞和血栓细胞（血小板）的形态结构特点。

红细胞——为卵圆形细胞，有胞核，呈椭圆形，内有染色质块，胞质染成淡红色。

嗜中性白细胞——由于颗粒具有多种嗜色性，故又称为异嗜性粒细胞，细胞较大，胞质内含棒状或纺锤形的红色颗粒。胞质色淡，胞核分叶情况因成熟程度而有不同，有的不分叶，有的分叶，染成淡紫色。

血栓细胞——是鸡血液内最小的细胞，成纺锤形。两端钝圆，常集聚成群，胞质染成浅蓝色，核呈卵圆形。注意血栓细胞与红细胞的区别，主要是体积较小，核较大，染成玫瑰紫色。鸡血细胞鸡血细胞低倍镜下观察鸡血细胞高倍镜下观察鸡血细胞油镜下观察血细胞涂片(示核形态差异)

正常血象1.淋巴细胞2.中性杆状核粒细胞3.中性分叶核粒细胞动物神经细胞脊髓涂片

先用低倍镜观察,再用高倍镜和油镜观察脊髓涂片中的神经元（即神经细胞），可找到染色深且具有多个突起的脊髓前角运动神经元。在其胞体内有染色较浅的圆形的细胞核，核的中央有一个染成深色的核仁。神经细胞动物平滑肌细胞分离片

先用低倍镜再用高倍镜和油镜下观察平滑肌分离片，可见染成紫红色呈纺锤形的肌细胞，细胞核为椭圆形，位于细胞的中央，着色很深，在细胞质中有淡红的肌原纤维。略旋动细调焦螺旋，仔细观察。平滑肌与组织块横纹肌细胞（示多核现象）细胞器观察1.线粒体的观察线粒体有双层膜结构，蛋白、磷脂含量很高，有大量羧基和磷酸基等阴离子基团，含阳离子的铁苏木精易与其结合，使线粒体显示兰色反应。观察方法1）低倍镜观察：可见许多被染成深兰色的细胞，选择颜色清晰，密集程度较低的区域；2）转换高倍镜：细胞核为1～2圆形的不着色的区域（有深兰色的核仁），核周围分布有许多深兰色颗粒或杆状小体，即线粒体。

（示线粒体）线粒体油镜下观察到的线粒体（深蓝色颗粒状或杆状）线粒体（红色）2.高尔基复合体的观察

高尔基复合体具有还原能力，与硝酸银作用后，使硝酸银还原，并呈现棕黑色沉淀反应。因而可显示高尔基复合体的形态和位置。观察方法1）低倍镜观察：寻找圆形或椭圆形的被染成黄色或淡黄色的细胞；2）转换高倍镜：中央透亮区为核所在位置，核周围棕褐色扭曲呈线状、颗粒状结构即为高尔基复合体。棕褐色或黑褐色、扭曲线状或颗粒状（低倍镜）高尔基体棕褐色或黑褐色、扭曲线状或颗粒状（高倍镜）高尔基体（绿色）肝细胞石蜡切片（示多核和多核仁）蛙卵巢细胞马蛔虫卵巢石蜡切片（示中心体）五作业

绘出动、