精液品质检查

娄底职业技术学院李继仁精液品质检查课时教学计划教学目标：使学生了解精液外观检查；初步掌握精子活力、密度、畸形率检查的方法。教学内容：精液品质检查，包括外观品质检查、活力检查、密度检查；畸形率检查；精子存活时间及指数等。教学重点：精子活力检查教学难点：精子密度的计算教学方法：讲授与讨论、播放视频带着问题学采出的精液，如何颜色出现红色、黄色、绿色，是不是正常？为什么？猪的采精量怎样测定？牛的采精量怎样测定？牛羊的精液为什么有云雾状？精子活率检查时，温度为什么要在37~38℃，怎么控制温度？检查精子活率时，显微镜操作要注意哪些事项？精子密度检查时，为什么用3%NaCl稀释精液？检查精子畸形率时，怎样涂片？染色时前为什么要固定？染色时为什么不能让染色液被风干？水洗时为什么水流速度要缓？5.3精液品质检查精液品质检查的目的鉴定精液品质的优劣，以便决定精液能否使用、稀释倍数和分装份数。评价雄性种畜的饲养管理、人工授精各环节技术措施是否正常，以便改进。精液品质检查的项目常规检查：射精量、色泽、气味、PH值、精子活力、精子密度等。定期检查：精子计数、精子形态、精子存活时间及指数、精子抗力等。精液检查基本操作原则：（1）采得精液立即于30℃左右恒温容器中，标记来源。（2）作好检查准备工作，检查时应快捷，及时作处理。（3）操作时，避免损害精液品质，接触精子的玻棒等应洗净。（4）取样应有代表性（摇匀）。（5）项目较多，不应每次都面面俱到，应常规和全面检查相结合。（6）评定质量等级，应对各项结果作全面综合分析，可重复某个项目。精液外观检查1）采精量：一次射精数量。牛羊精液可用带有刻度的集精瓶（管）直接测出，猪马精液用天平称量射精量。牛5~8ml、马60~100ml、

猪200~300ml、羊0.8~1.2ml。2）色泽：乳白或乳黄。肉眼观察。乳白色程度越大表示精子密度越高。若呈淡绿色，表示混有脓汁；呈淡红色，表示混有血液；呈黄色，表示混有尿液。3）气味：精液一般无味。鼻子嗅闻。有的带有动物本身固有的气味，如牛、羊精液略有膻味和微汗脂味，猪精液有腥味。若有异味则不正常。4）PH值：一般为7.0左右。用试纸测定。牛羊精液因精清比例较小呈弱酸性，故PH值为6.5-6.9；猪精液因精清比例较大，故PH值为7.4-7.5。5）云雾状：牛、羊精子密度大,混浊不透明,如翻腾滚滚的云雾。马、猪的精子少，混浊度也较小，云雾状不显著。假如采取猪的浓份精液，其云雾状也与牛羊相似。猪精液的外观检查颜色乳白色或浅灰色呈云雾状绿色、黄色浅红色、红褐色气味略带腥味恶臭等异常气味pH值正常精液pH值为7.0~7.8pH值越低,精子密度越大采精量电子天平称量法按1g=1ml计射精量为200~500ml

正常正常异常异常精子活力检查是指在精液中呈直线前进运动的精子数占总精子数的百分率。制片方法有压片法和悬滴法，载玻片要预热到37℃，放在400倍显微镜下观察，浓度大的精液先用生理盐水或等渗稀释液稀释后检查。目测评定精子活率，通常采用十级评定法，即按视野中呈直线前进运动的精子数占总精子数的估计百分比评定，100%直线前进运动者评为1.0。现在可用计算机辅助（CASA）检测精子运动能力。各种家畜的新鲜精液，精子活率一般在0.7~0.8，用以输精的精液活率，液态保存精液应在0.6以上，冷冻精液在0.3以上。冷冻精液冷冻前应在0.7以上。猪精液目测估测法检测活率按0.1~1.0的十级评分法进行评估目测估测法活率要求

鲜精活率＞0.7才可进行稀释配制

保存精液活率＞0.6才可以使用牛精子活力检查的程序载玻片预温精液稀释取样检查镜检活力估测活力记录将恒温加热板放在载物台上，打开电源并调整控制温度至37℃，然后放在载玻片

将生理盐水与精液等温后，按1:10稀释取10ul放在预温后载玻片中间，盖上盖玻片用100倍和400倍观察判断视野中前进运动精子占的百分率

按10级制评分和记录精子密度检查精子密度也称精子浓度，是指每毫升精液中含有的精子数目。目前测定精子密度的方法常采用估测法、血细胞计计算法和光电比色测定法等。各种动物的精子密度（亿个/ml）：牛10（2.5~20）；猪2.5（1~3）；马1.2（0.3~8）；羊30（20~50）。1）估测法：在显微镜下根据精子分布的稀稠程度，将精子密度粗略地分为“密、中、稀”。密：精子间隔距离不到一个精子，约10亿/ml；中：精子与精子的间隔为1-2个精子，约2~10亿/ml；稀：精子与精子的间距为2个以上精子，2亿/ml以下。2）血细胞计计算法：通过计算每毫升精液中所含精子数多少来衡量精子的密度。一般采用血细胞计进行。对牛、羊等精子密度高的精液使用红细胞吸管，而对马、猪精子密度低的精液则使用白细胞吸管。原精液200μL，3%NaCl稀释（猪精液一般稀释10倍、牛精液一般稀释100倍），计数板上放盖玻片，滴上1滴稀释精液，计数5个中方格精子。1ml原精液内的精子数＝5个中方个数的精子数×5×10×1000×稀释倍数（如为原精液则不×稀释倍数）以图示次序计数，精子的头部为准，依数上不数下，数左不数右的原则进行计数格线上的精子。3）光电比色计测定法：是目前评定精子密度一种较准确的方法，适用于牛、羊精液，如果除去精液胶块，也可测定猪、马精液。此法是根据精子越多，精液越浓，其透光率越低的特性，使用光电比色计通过反射光和透光程度来测定精子的密度。现有精子密度仪专用于测定精子密度，快速而准确。猪精子密度检测方法估测法精子密度仪法和CASA法血细胞计数法主观性强，误差大＜一个精子为“密”＝一个精子为“中”＞一个精子为“稀”最准确，但速度慢滴上1滴稀释精液原精液200μL3%NaCl稀释10倍计数板上放盖玻片计数5个中方格精子将该数乘以50万

方便、时间短、重复性好猪精子密度一般为2~3亿/ml生产上主要以精子密度仪法检测牛精子密度测定程序放计数板于载物台上取样稀释精液精液注入计数室镜检精子计数密度计算计数板和盖玻片一定要清洁取500ul3%氯化钠于小试管中,加入5ul原精液,混合均匀取25ul小心地从计数板与盖玻片的接缝中加入,使其自行吸入计数室中用100倍和400倍观察计数五个中方格的总精子数,计数以头部为准,在格线上的数上不数下,数左不数右精子密度=5个中方格总精子数5×10×1000×100精子形态检查精子形态正常与否对受精率有着密切关系。如果精液中含有大量畸形精子和顶体异常精子，则受精能力就会降低。1）精子畸形率：精液中形态不正常的精子称为畸形精子，精子畸形率是指精液中畸形精子数占总精子数的百分比。在各种动物的正常精液，精子畸形率一般不超过20%，牛不得超过18%，水牛不超过15%，羊不超过14%，猪不超过18%，否则不能用于输精。一般检查方法是做成抹片、固定，伊红或姬姆萨等染色后普通显微镜观察计数。畸形精子各种各样，一般可分为四类：①头部畸形：头部瘦小、细长、缺损、双头等。②颈部畸形：膨大、纤细、带有原生滴、双劲等。③中段畸形：膨大、纤细、弯曲、屈折、带有原生滴等。④主段畸形：弯曲、屈折、缺损、带有原生滴等。猪精子畸形率检测取中层精液抹片固定液固定20minGiemsa染色90min水洗并风干置1000倍油镜下观察精子＞300个畸形率检查方法相差显微镜直接观察伊红或姬姆萨等染色后普通显微镜观察畸形率要求染色后显微镜观查影响：畸形率过高会减少精液的受精能力要求：一般要求不超过18%为宜改善：增加精液的用量可以提高其受精效果2）精子顶体异常率：精子的正常顶体内含有多种与受精有关的酶类，在受精过程中起着重要的作用，因此，精子顶体正常与否和精子存活、受精能力有密切的关系。顶体异常有顶体膨胀、缺损、部分脱落、全部脱落等。在正常情况下，牛的顶体异常率不超过5.9%，猪不超过2.3%，如顶体异常率显著增加，牛超过14%，猪超过4.3%,会直接影响受精率。新鲜精液经过保存或低温打击，精子的顶体异常率显著增加，牛为14.1%，猪为4.3%，精液经过冷冻后变化更大，牛40%，猪45%。精子的其他检查1）精子生存时间和生存指数精子生存时间：指精子在体外一定条件下（稀释液、稀释倍数、保存温度和方法等）的总生存时间。具体算法：所有间隔时间累加后减去最后两次间隔时间的一半即为精子的存活时间。精子生存指数：相邻两次检查的间隔时间与平均活力的积之和。是精子存活时间与精子活率下降变化的一项综合指标。精子生存时间越长，则生存指数越大，说明精子生活力越强，品质越好。检查时间间隔时间(h)活率2次检查平均活率h×平均活率日/月时间6/4600.8—1480.60.75.62280.50.554.47/4680.30.43.21480.20.252.02280.10.151.28/468摆动0.050.4∑=48∑=16.8生存指数：∑（h×平均活率）=16.8

生存时间：48-8/2=44h2）精子耗氧量测定精子呼吸时消耗氧气多少与精子活力和密度有密切关系。耗氧量是指1亿精子在37温箱中孵育1h所消耗的氧气量，可用瓦氏呼吸器测定其耗氧量，计算出精子的耗氧量。

3）精液果糖分解测定精