洗涤用品中26种香料的测定 气相色谱-串联质谱法和液相色谱-串联质谱法

洗涤用品中26种香料的测定气相色谱-串联质谱法和液相色谱-串联质谱法本标准规定了洗涤用品中戊基肉桂醛、苯甲醇、肉桂醇、柠檬醛、丁香酚、羟基香茅醛、异丁香酚、戊基肉桂醇、水杨酸苄酯、肉桂醛、香豆素、香叶醇、羟异己基3-环己烯基甲醛、茴香醇、肉桂酸苄酯、金合欢醇、丁苯基甲基丙醛、芳樟醇、苯甲酸苄酯、香茅醇、己基肉桂醛、柠烯、2-辛炔酸甲酯、α-异甲基紫罗兰酮等二十四种香料的气相色谱-串联质谱测定方法以及橡苔提取物和树苔提取物（以β-苔黑酚酸甲酯计）的液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于洗涤用品中戊基肉桂醛、苯甲醇、肉桂醇、柠檬醛、丁香酚、羟基香茅醛、异丁香酚、戊基肉桂醇、水杨酸苄酯、肉桂醛、香豆素、香叶醇、羟异己基3-环己烯基甲醛、茴香醇、肉桂酸苄酯、金合欢醇、丁苯基甲基丙醛、芳樟醇、苯甲酸苄酯、香茅醇、己基肉桂醛、柠烯、2-辛炔酸甲酯、α-异甲基紫罗兰酮以及橡苔提取物和树苔提取物（以β-苔黑酚酸甲酯计）含量的测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法324种香料的测定（气相色谱-串联质谱法）3.1原理用乙酸乙酯-正己烷混合液（2+8，体积比）超声提取试样中的二十四种香料，经高速离心，上清液经干燥脱水后以微孔滤膜过滤，滤液用气相色谱串联四级杆质谱进行分析，内标法定量。3.2试剂除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，实验用水均为GB/T6682中规定的一级水。3.2.1乙酸乙酯：色谱纯。3.2.2正己烷：色谱纯。3.2.3氯化钠。3.2.4无水硫酸钠。3.2.5提取液：乙酸乙酯-正己烷混合液（2+8，体积比）3.2.6戊基肉桂醛、苯甲醇、肉桂醇、柠檬醛、丁香酚、羟基香茅醛、异丁香酚、戊基肉桂醇、水杨酸苄酯、肉桂醛、香豆素、香叶醇、羟异己基3-环己烯基甲醛、茴香醇、肉桂酸苄酯、金合欢醇、丁苯基甲基丙醛、芳樟醇、苯甲酸苄酯、香茅醇、己基肉桂醛、柠烯、2-辛炔酸甲酯、α-异甲基紫罗兰酮，标准品或化学试剂。3.2.7二十四种香料混合标准溶液：准确称取戊基肉桂醛、苯甲醇、肉桂醇、柠檬醛、丁香酚、羟基香茅醛、异丁香酚、戊基肉桂醇、水杨酸苄酯、肉桂醛、香豆素、香叶醇、羟异己基3-环己烯基甲醛、茴香醇、肉桂酸苄酯、金合欢醇、丁苯基甲基丙醛、芳樟醇、苯甲酸苄酯、香茅醇、己基肉桂醛、柠烯、2-辛炔酸甲酯、α-异甲基紫罗兰酮各0.1g（精确至0.1mg）置于100mL容量瓶中，用提取溶剂（3.2.5）溶解并定容至刻度，摇匀，配制成二十四种香料浓度均为1000mg/L的混合标准储备液，于4℃避光保存。3.2.8内标溶液：异佛尔酮，用提取溶剂（3.2.5）配置成1000mg/L的溶液。3.2.9氦气：纯度不小于99.999%。3.3仪器和设备3.3.1气相色谱-质谱/质谱（GC-MS/MS）仪：配有电子轰击电离源。3.3.2分析天平：感量为0.1mg。3.3.3离心机：转速不低于12000r/min。3.3.4具塞比色管：10mL。3.3.5涡旋混合器。3.3.6超声波水浴。3.3.7微孔滤膜：0.45μm，有机相。3.4分析步骤3.4.1样品处理a）普通型洗涤用品称取0.2g（精确到0.001g）试样至10mL的具塞比色管中，加入0.1mL内标溶液（3.2.8）和1mL饱和氯化钠水溶液，涡旋分散样品，加入10mL提取液（3.2.5），超声30min。取1.5mL溶液转移至的2mL具塞塑料离心管中，加入0.5g无水硫酸钠（3.2.4），以不低于12000r/min离心15min，上清液经0.45µm微孔滤膜过滤，滤液作为待测样液。b）浓缩型洗涤用品称取0.2g（精确到0.001g）试样至10mL的具塞比色管中，加入2mL饱和氯化钠水溶液后涡旋分散样品，用饱和氯化钠水溶液定容，涡旋1min，静置5min，准确移取1mL样液至新的10mL的具塞比色管中，加入0.1mL内标溶液（3.2.8），加入10mL提取液（3.2.5），超声30min。取1.5mL溶液转移至的2mL具塞塑料离心管中，加入0.5g无水硫酸钠（3.2.4以不低于12000r/min离心15min，上清液经0.45µm微孔滤膜过滤，滤液作为待测样液。3.4.2测定3.4.2.1气相色谱参考条件a)色谱柱：HP-INNOWAX石英毛细管柱，30m×0.25mm（内径）×0.25µm，或相当者。c)进样口温度：250℃。d)传输线温度：250℃。e)离子源温度：280℃。f)载气：氦气，纯度≥99.999%，流量：1.0mL/min。g)进样量：1μL。h)进样方式：不分流进样，0.5min后开阀；3.4.2.2串联质谱参考条件i)电离方式：EI；j)质量扫描范围：50amu~1000amu；k)电离能量：70eV；l)阱电流：200µAm)溶剂延迟：3minn)监测方式：多反应监测（MRM），定性离子对、定量离子对、碰撞气能量见表1。3.4.2.3标准曲线的绘制采用逐级稀释的方法，分别加入0.1mL内标溶液，用提取液（3.2.5）稀释混合标准储备溶液成适用浓度的混合标准工作溶液，按6.2的测定条件浓度由低到高进样测定，分别以目标物浓度为横坐标，以对应目标物峰面积与内标峰面积之比为纵坐标，分别绘制标准曲线。3.4.2.4定量测试按3.4.2.1和3.4.2.2的测定条件对待测样液进行测定，用内标法定量。待测样液中24种香料的响应值应在标准曲线的线性范围内，超过线性范围则应稀释后再进样分析。3.4.3定性判定以标准样品的保留时间和监测离子定性，待测样品中监测离子的丰度比与标准品的相同离子丰度比相差不大于20%。3.4.4空白试验除不称取样品外，均按上述测定条件和步骤进行。3.5结果计算结果按式（1）计算，计算结果保留两位小数，计算结果需扣除空白值。式中：负ci——c0——V——f——m——ic0Vf.........................................................................(1)样品中被测香料的含量，mg/kg；依据标准曲线获得待测样液中被测香料的浓度，mg/L；空白试样中样品中目标物的质量浓度，mg/L；样品稀释后总体积，mL；稀释倍数，不稀释时为1；样品质量，g。3.6检出限和定量限普通型洗涤用品中二十四种香料的检出限均为5mg/kg，定量限均为15mg/kg；浓缩型洗涤用品中二十四种香料的检出限均为50mg/kg，定量限均为150mg/kg。3.7精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算数平均值的10%。4β-苔黑酚酸甲酯的测定（液相色谱-串联质谱法）4.1原理样品经甲醇提取，弱阴离子固相萃取柱净化，用液相色谱-串联质谱法测定，以多反应离子监测模式进行监测，采用特征离子丰度比进行定性，峰面积定量，以标准曲线法计算含量。4.2试剂除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，实验用水均为GB/T6682中规定的一级水。4.2.1β-苔黑酚酸甲酯对照品：（CAS号：4707-47-5），纯度≥98%。4.2.2乙腈：色谱纯。4.2.3甲醇：色谱纯。4.2.4β-苔黑酚酸甲酯标准储备溶液（1000mg/L准确称取β-苔黑酚酸甲酯（4.2.1）对照品0.01g（精确至0.1mg）于10mL棕色容量瓶中，用甲醇（4.2.3）定容至刻度，混匀。4.2.5β-苔黑酚酸甲酯标准中间液1（10mg/L）：准确移取1mL称取β-苔黑酚酸甲酯标准储备溶液（4.5）于100mL棕色容量瓶中，用甲醇（4.2.3）定容至刻度，混匀。4.2.6β-苔黑酚酸甲酯标准中间液2（100µg/L）：准确移取1mL称取β-苔黑酚酸甲酯标准中间液1（4.6）于100mL棕色容量瓶中，用甲醇（4.2.3）定容至刻度，混匀。4.2.7β-苔黑酚酸甲酯标准工作溶液：准确吸取适量β-苔黑酚酸甲酯标准中间液2（4.2.6），用甲醇（4.2.3）稀释成含0，1.5，3.0，5.0，10.0，20.0，50.0µg/L的标准工作溶液，使用前配制。4.3仪器和设备4.3.1液相色谱-三重四极杆质谱联用仪：电喷雾离子源。4.3.2分析天平：感量为0.1mg。4.3.3涡旋振荡器。4.3.4超声波清洗器。4.4分析步骤4.4.1试液的制备称取0.1g样品于10mL比色管中，用甲醇（4.2.3）定容到刻度，涡旋混匀，25℃下超声萃取10min，取出后再次涡旋混匀，冷却。取上清液用甲醇（4.2.3）稀释20倍后，溶液过0.22µm滤膜后上机测试。4.4.2测定4.4.2.1液相色谱参考条件a)色谱柱：C18柱，（100mm×2.1mm，1.8µm），或等效色谱柱；b)流动相：A：乙腈，B：水；c)柱温：30℃d)流量：0.25mL/min；e)进样量：5μL。f)梯度洗脱程序见表1。表1梯度洗脱程序时间/min流动相A体积分数/%流动相B体积分数/%0202208909020204.4.2.2串联质谱参考条件g)离子源：电喷雾离子源（ESI源）；h)监测模式：负离子模式，监测离子对(m/z)：195->163，碰撞能10V（定量离子对195->119，碰撞能20V（定性离子对）；循环时间0.8sec；i)喷雾电压：1500V；j)鞘气：40Arb；k)辅助气：5Arb；l)离子源温度：300℃;m)传输管温度325℃;n)0-6.5min：不进入质谱仪分析，6.5-10min：进入质谱仪分析。4.4.2.3标准曲线的绘制将混合标准工作溶液依次注入液相色谱-串联质谱仪按照4.4.2.1和4.4.2.2测试条件进行测定。以标准工作溶液中β-苔黑酚酸甲酯浓度为横坐标，以对应的峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线。4.4.2.4试样溶液的测定将试样溶液注入液相色谱-串联质谱仪中按照4.4.2.1和4.4.2.2测试条件进行测定，得到β-苔黑酚酸甲酯的峰面积，根据标准曲线得到待测液中β-苔黑酚酸甲酯的浓度。4.4.3空白试验除不加试样外，均按上述步骤操作。4.4.4定性判定用液相色谱-串联质谱法对样品进行定性判定，在相同试验条件下，样品中应呈现定量离子对和定性离子对的色谱峰，被测组分的质量色谱峰保留时间与标准溶液中对应组分的质量色谱峰保留时间一致；样品色谱图中所选择的监测离子对的相对丰度比与相当浓度标准溶液的离子对的相对丰度比的偏差不超过表2规定范围，则可以判断样品中存在对应的被测组分。表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度（k）k>50%50%≥k>20%20%≥k>10%k≤10%允许的最大偏差±20%±25%±30%±50%4.5分析结果的表述试样中β-苔黑酚酸甲酯的含量按式（1）计算：f (2)式中：ω——试样中β-苔黑酚酸甲酯的含量，mg/kg；c——试样中β-苔黑酚酸甲酯峰面积对应的质量浓度，µg/L；c0——空白试样中β-苔黑酚酸甲酯的质量浓度，µg/L；V——试样定容体积，mL；K——稀释倍数；m——试样质量，g。4.6检出限和定量限β-苔黑酚酸甲酯的检出限为1mg/kg，定量限为3mg/kg。4.7精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算数平均值的10%。（资料性附录）二十四种香料的参考保留时间和离子对参数表A.1二十四种化合物的参考保留时间和离子对参数TableA.1Theretentiontimeandmrmparametersofthetwenty-fourcompounds序号化合物保留时间CASNo定量离子对（m/z）碰撞能定性离子对（m/z）碰撞能1柠烯6.65989-27-5136.0/121.05136.0/107.052芳樟醇78-70-6136.0/121.05136.0/107.0532-辛炔酸甲酯139.0/107.0139.0/79.04柠檬醛5392-40-5152.0/137.05137.0/43.0205香茅醇106-22-9156.0/81.0156.0/95.056香叶醇106-24-1139.0/95.05139.0/121.027α-异甲基紫罗兰酮127-51-5206.0/191.02206.0/109.0358苯甲醇100-51-6108.0/79.0108.0/107.059羟基香茅醛107-75-5139.0/121.02139.0/93.0丁苯基甲基丙醛80-54-6204.0/189.05204.0/147.05肉桂醛104-55-2131.0/77.025131.0/10