前列腺特异抗原

1998年8月17日克林顿承认和莱温斯基有不正当关系1998年1月23日，琼斯性骚扰案中证人、白宫前实习员莫妮卡·莱温斯基被指控与克林顿有染。克林顿(美国第42任总统1993年-2000年)NieShengjie,Assoc.ProfSectionofForensicBiology2010.09.20IdentificationofSeminalstainoutlineBiologicalfeatureObjective&procedureVisualexaminationPreliminarytestsConfirmatorytestsIndividualidentificationBiologicalfeatureTypicalejaculation2-5millilitersofsemenSperm:107/ml~108/ml3pgDNA/sperm480,000ngDNA/ejaculateOnly1ngDNAneededforSTRtyping!男性生殖系统结构内生殖器生殖腺——睾丸输精管——附睾、输精管、射精管、尿道附属腺体——精囊腺、前列腺、尿道球腺外生殖器阴茎阴囊男性生殖器Semen精液Semen精液Spermcells（Spermatozoa，精子）Seminalplasma精浆Seminalvesiclefluid精囊液

60%

Prostaticfluidsecretions前列腺液

30%Epididymis

附睾

5%bulbourethralglands尿道球腺液

5%semen含蛋白质、各种酶及果糖等多种成分的碱性乳白色胶状液体成分：细胞：精子、睾丸细胞、脱落柱状上皮细胞、白细胞非细胞：前列腺卵磷脂小体、玻璃小体、精胺结晶、色素颗粒、脂肪球弱碱性pH7.2~8.6多种蛋白质（凝固酶等）含黄素高浓度酸性磷酸酶前列腺特异抗原精胺产生精子，分泌雄性激素促使精子成熟，贮存精子蛋白水解酶、纤维蛋白酶精液的体外变化乳白色半透明粘稠液体，有特殊气味凝固酶（精囊腺）胶冻状5min中性蛋白酶、纤溶酶20min稀薄半流动状精子的发生睾丸曲细精管Threedistinctregions:Head(

acrosomeandnucleuswithhaploidDNA)MiddlePiece(mitochondria)Tail(flagella;mobility)Sperm精子头尾部颈中主段末顶体末段主段中间段颈头尾精子侧面观顶体蛋白酶，透明质酸酶，酸性磷酸酶细胞核线粒体鞘Vasectomy-blockspermatozoa输精管结扎StillproducesejaculatewithseminalvesiclefluidandprostaticfluidWillnothaveenoughspermforDNAtypingOligospermia-lowspermcount少精症MayormaynothaveenoughspermforDNAtypingAspermia-nosperm无精症WillnothaveenoughspermforDNAtyping14Notallsemenstainscontainsperm受精过程中只有精子的头部进入卵子内！母系遗传Seminalstain精液斑多为淡黄色或灰白色不规则斑痕，触之较硬，有时有特殊气味。浓厚精斑呈灰白色浆糊状，稀薄精斑浸润于布纤维间，不易察见；在浅色布料上，精斑多呈黄白色地图状，边沿色较深精斑检验目的与要求预试验个体识别确证试验肉眼观察发现可疑精斑是否精斑种属试验是否人精斑个体来源紫外线照射Visualexamination肉眼观察简便无损非特异目的：发现可疑精斑，确定其位置与分布，以便准确取材Preliminarytest预试验目的:筛选可疑精斑特点：方法简单，灵敏度高方法：酸性磷酸酶检验结晶试验其它：锌检出法，马铃薯凝集试验酸性磷酸酶（Acidphosphatase，AP）特点：1.精液中含量高，是其它体液、分泌液、脏器的100倍以上；2.稳定，对腐败、高热有较强抵抗力；3.来自前列腺，无精子精液也适用；4.非特异：部分水果、蔬菜，避孕药…磷酸苯二钠AP萘酚铁氰化钾氨基安替比林醌类磷酸苯二钠试验(Kind-King

test)酸性磷酸酶缓冲液：磷酸苯二钠，4-氨基安替比林，柠檬酸，

氢氧化钠，氯仿显色液：铁氰化钾，氢氧化钠，碳酸氢钠磷酸苯二钠试验(Kind-King

test)阳性：立即出现红色，深浅与浓度有关阴性：橙黄色（不是精斑或酶已破坏）灵敏度：1：20000倍稀释，血液不影响非特异：脏器组织或其它分泌物、排泄物（稀释/加热）碘化碘钾结晶试验（Florencecrystaltest）卵磷脂（精液）碘胆碱灵敏度：1：400干扰：血液或大小便会干扰结晶生成太新鲜/陈旧，水洗，细菌污染均可呈阴性非特异：凡含胆碱的分泌物，昆虫/植物汁液等褐色结晶碘-碘化钾试剂分解碘化碘钾结晶精斑预试验目的:筛选可疑精斑特点：方法简单，灵敏度高方法：仅酸性磷酸酶检验灵敏度较高

实践中可以不经过预实验，直接进行确证；预实验阴性，有时也需进行确证。精斑确证试验检测精液特有成分阳性结果可确认精斑方法：精子检出法免疫学实验（抗人精血清沉淀反应、前列腺特异抗原检测）最简便、最可靠具有典型而稳定的形态典型精子（精子头）存在，即可肯定精斑未检出精子不能否定精斑精子检出法精斑检材处理上清：抗人精/PSA；中和试验沉渣：涂片找精子DNA染色方法精子染色单染法复染法藻红亚甲蓝苏木素精子和基质染成相同的颜色HE染色酸性品红亚甲蓝胭脂红精子头、尾和基质染成不同的颜色藻红染色（头和尾均为红色）酸性品红亚甲蓝染色（头部红色，尾部蓝色）一个完整精子/几个典型精子头即可确证精斑精子检出时限活精子：阴道3~8h；宫颈2—5d；子宫、输卵管1~10d死精子：阴道3~9d；宫颈17d与被害人体位、活动情况及月经周期有关取材部位：活体阴道拭子1.5~2d；尸体3w

（阴道后穹窿及宫颈刮片）免疫学试验——抗人精血清BlankcontrolHumancontrolSheepcontrolQ1Q2Q3Humanantiserumagargeldiffusiontest醌是对含有环己二烯二酮构造的一类化合物的总称。

前列腺特异抗原

（prostatespecificantigen，PSA）γ－精浆蛋白，由人类前列腺上皮细胞分泌，是精浆特有糖蛋白，分子量30000，故名p30性质稳定，是确证精斑的理想标记。抗－p30有高度种属特异性和前列腺器官特异性。灵敏、特异，不受阴道液、唾液及有无精子影响。加样区反应区吸附区检测线鼠抗人p30质控线羊抗鼠IgG玻璃纤维免疫胶体金鼠抗人p30硬质塑料底板玻璃纤维胶体金p30抗原检测试纸条——PSA试纸条精斑的个人识别传统的遗传标记：ABO血型、酶型、血清型等DNA多态性标记抗体凝集能力下降或消失不凝集具有相应的抗原精斑ABO血型测定——中和试验设置已知对照；注意假阴性，抗血清必须标化！精斑浸液(可溶性抗原)抗A抗B抗H30分钟A-cellB-cellO-cell凝集不凝集不凝集无A原理：可溶性血型抗原与相应抗体结合，使其凝集红细胞能力下降或消失有B有HB精斑DNA分析精子DNA提取精子细胞核膜是富含二硫键的交联蛋白组成的网状结构，必须在DTT等试剂作用下使－S-S－还原成－SH，核蛋白才能被SDS、蛋白酶K分解，释放出DNAY-STR在性犯罪案件中的意义不受女性成分干扰轮奸案父系遗传，可利用家系排查案例1李某某，女性，20岁，被杀害在户外，尸检提取阴道内、外拭子。结果PSA试剂条检测均为阴性。问题：怀疑性侵犯的案件，尸体上如何提取精斑？答案：该案件法医又行尸体解剖，在死者会厌处取擦拭物送检，结果PSA试剂条检测阳性。Sexualassault:wheretofindseminalstain?②现场纸巾、被褥、毛巾、地面…①受害人：阴道拭子（后穹窿）宫颈刮片会阴大腿内侧腹壁臀部，直肠口腔（会厌）内裤及衣物……紫外辅助光源！SexualassaultCollectionofotherbiologicalevidence分点提取，阴凉干燥，纸袋包装！ControlsamplesVictim，spouse，suspectSalivastain

唾液斑Tracetissue

指甲缝微量组织

案例2某年某月某日，某市一四岁女孩被强奸。由于阴道严重损伤，大量出血，回家后女孩的母亲将其粘有大量血迹的裤子换下放入一大盆内放水浸泡准备清洗问题：检材已被大量稀释，如何获取精子？答案：精子在水中不会裂解，多次离心取沉渣案例3杨某某，女性，14岁，父母到派出所报称该女孩已失踪3周。后派出所组织人员到后山上进行搜索，在一山洞发现一高度腐败尸体。问题：高腐尸体如何提取精斑？答案：尸体阴道内的精子数目多且保存时间长，检出率的高低与阴道提取部位有关（宫颈刮片和阴道后穹隆部拭子较高）。在本案中，虽尸体已