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文档简介

《动物微生物专项技能训练》

涂片制备革兰氏染色镜检

以巴氏杆菌为例实验目的能利用所给材料进行细菌标本片的制备，会进行革兰氏染色并认识细菌的不同染色特性。实验器材接种环、酒精灯、革兰氏染液、显微镜、吸水纸、洗瓶、擦镜纸、细菌培养物、生理盐水等。试验方法与步骤取载玻片，向玻片中央滴加一滴生理盐水；用接种环挑取一环单菌落，于生理盐水中涂抹均匀至无细菌团块。于酒精灯上烘干固定，但不可长时间炙烤，以不烫手背为宜。涂片用火焰固定后进行革兰氏染色，第一步初染，滴加草酸铵结晶紫染液一滴一分钟后用水清洗至无紫色。第二步媒染，滴加碘液冲去残水，并覆盖，一分钟后水洗。第三步脱色是关键的一步，将载玻片上面的水甩净，滴加95％酒精脱色约20-30秒，立即用水冲净酒精。最后复染，用番红液染色一分钟，水洗后用吸水纸吸干净。将染色后的玻片，置油镜下观察．革兰氏阴性菌呈红色，革兰氏阳性菌呈紫色。以分散开的细菌的革兰氏染色反应为准，过于密集的细菌，常常呈假阳性。涂片干燥固定染色水洗、吸干镜检革兰氏染色法涂片结晶紫染色1min，水洗碘液媒染1min，水洗酒精脱色30s，水洗复红复染30s，水洗革兰阳性菌G＋

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