牛羊繁殖技术（牛羊生产课件）

雌性动物的发情课时教学计划教学目标：使学生了解雌性动物的性成熟、适配年龄等概念，卵子发生、成熟及排卵的规律。掌握主要家畜的排卵类型特点。教学内容：1）雌性动物生殖机能的发育；2）卵泡发育和卵子的发生。教学重点：雌性性成熟概念、卵子结构；卵泡发育及排卵的规律。教学难点：卵母细胞的成熟；卵泡发生波。教学方法：讲授与讨论带着问题学后备母畜是不是一旦发情即可配种？为什么？动物初情期的发情有何特点？卵原细胞的增殖在什么时候停止？牛出生时大约有多少个卵母细胞？母牛一生排卵大约多少个？为什么可以进行超数排卵？一个卵母细胞最后生成卵子多少个？卵子的结构是怎样的？大小约有多大？卵巢上的卵泡发育形态分哪几个阶段？兔子是不是要交配才能排卵？发情母牛不交配能不能排卵？4.1雌性动物生殖机能的发育雌性动物性发育的概念性发育指动物出生后与性发育开始至性成熟、性衰老有关的一系列生理过程，包括性行为及其调节。雌性动物性发育过程包括：初情期、性成熟期、体成熟期及繁殖机能停止期。初情期初情期概念：雌性动物第一次出现发情表现并排卵的时期，称为初情期。机理：雌性动物在初情期前卵泡发育，但会中途闭锁，达到初情期时，在激素的作用下，卵泡才能发育成熟直至排卵。此时生殖道和身体在雌激素、孕激素等作用下，急剧发育并出现第二性征。初情期特点：第一次发情有时为安静发情，因没有孕酮分泌，所以只出现排卵而不表现发情征象。初情期发情排卵不够规律。主要动物雌性的初情期：牛6~12月龄、马12月龄、羊4~6月龄、猪3~6月龄、兔4月龄。初情期出现迟早的影响因素：品种、温度、出生季节及饲养水平、管理方式等。性成熟期性成熟概念：雌性动物在初情期后经过一段时间，生殖器官发育成熟、发情和排卵正常并具有正常的生殖能力，则称为达到性成熟。性成熟特征：生殖器官发育成熟、性周期规律、性行为模式完全、身体其他器官还在继续发育。主要动物的雌性性成熟期：牛10~14月龄、马15~18月龄、羊6~10月龄、猪5~8月龄、兔5~6月龄。适配年龄也叫配种适龄。即适宜配种的年龄。一般以体重达到成年母性体重的70%时为宜。主要动物雌性的适配年龄：牛18~20月龄、马30~36月龄、羊12~18月龄、猪8~10月龄、兔6~7月龄。体成熟动物达到成年体重的年龄。雌性动物在产下2－3胎以后，才能达到成年体重。繁殖能力停止期雌性动物繁殖能力消失的时期。在繁殖能力消失之前有一个衰退期，虽能生殖但饲养价值已下降。因此要适时淘汰。4.2卵泡发育和卵子的发生卵子的发生雌性生殖细胞分化和成熟的过程称为卵子发生。卵子的发生过程包括卵原细胞的增殖、卵母细胞的生长和卵母细胞的成熟三个阶段。1）卵原细胞的增殖：动物在胚胎期，性别分化后，雌性胎儿原始生殖细胞分化为卵原细胞，通过有丝分裂，数量增多。这就是增殖期。通常动物在出生前或出生后不久即停止。牛、羊在胚胎前半期结束。猪出生后7天。兔出生后10天才结束。增殖时间长短与卵原细胞产生数量有关。最后一次分裂后，发育成为初级卵母细胞，并进入成熟分裂前期，并被卵泡细胞包围形成原始卵泡。许多卵母细胞此后闲锁、退化。最终排卵、成熟的是极少数。因此有很大潜力，超数排卵和胚胎移植就是发掘优良母畜的排卵潜力。2）卵母细胞的生长：指卵母细胞发育成初级卵母细胞并形成卵泡后，初级卵母细胞的继续生长。特点：①卵黄颗粒增多，体积增大②透明带形成（卵泡细胞分泌液）③卵泡的颗粒细胞增殖（单层→多层）生长卵泡生长卵泡原始卵泡生长卵泡3）卵母细胞的成熟：主指经过两次成熟分裂：第一次在排卵前不久开始进行，第二次在排卵之后，受精过程中。第一次成熟分裂：（排卵前进行至排卵后）分裂前期：细线、偶（合）线、粗线、双线及终变期，多数动物到双线期即进入持续很久的静止期。持续到排卵后不久才结束，第一次成熟分裂继续进行（复始）。分裂中、后、末期：卵母细胞核仍移向卵黄膜，核仁膜，消失，染色体聚集成致密状态，然后中心小体分成两个中心小粒，并在周围出现星体，这些星体，分开形成纺垂体，成对的染色体排在赤道板上，在第一次成熟分裂末期，纺垂体旋转，排出含一半染色质及少量细胞质的极体，称为第一极体。而含大部分细胞质的为次级卵母细胞，每个子细胞所含染色体数目仅为初级卵母细胞的一半。第二次成熟分裂在精子入透明带后，才激活卵母细胞，放出第二极体。次级卵母细胞→卵细胞和第二极体，透明带中可能1~3个极体。卵子的形态和结构1）卵子的形态和大小哺乳动物的卵子为圆球形。椭圆、扁圆、有大型极体或卵黄内有大空泡的、特别大或特别小的属于畸形卵子。卵子较一般细胞含有多量的细胞质，细胞质中含有卵黄，所以卵子比一般细胞大得多。不含透明带的卵子直径大约为70~140μm。2）卵子的结构:卵子结构由以下几部分组成：放射冠透明带卵黄膜卵黄核核仁（1）放射冠：刚排出的卵被数层放射冠细胞及卵泡液基质包围，在输卵管液的作用下，细胞的突起收缩、退化，接着引起坏死，使卵泡细胞剥落，卵子裸露。牛、绵羊运行至输卵管膨大部完成以上过程；马排卵时卵子周围已没有放射冠细胞，但有一层不整齐的胶状物，约排卵2天内分离掉；猪、兔、鼠卵子在精子进入后才脱落。（2）透明带：是卵母细胞周围均质而明显的半透膜。主要由糖蛋白组成。（3）卵黄膜：与体细胞的质膜基本相同结构和性质。透明带与卵黄膜是卵子明显的两层被膜，它们具有保护卵子完成正常的受精过程，使卵子有选择吸收无机离子和代谢产物，对精子具有选择作用。（4）卵黄：因卵黄膜内的卵黄和脂肪小滴的含量，各动物不一致，因而颜色不同。马、猪含卵黄多于牛和绵羊，马卵子还充满折光性强的脂肪小滴，所以，马卵黄颜色稍黑，猪深灰，牛和绵羊呈灰色，山羊、虎卵黄颗粒细，分布均匀，核清晰，易观察分裂。（5）核和核仁：核有明显的核膜，核内有一个或多个核仁。卵泡的发育卵泡是位于卵巢上皮、包裹卵母细胞或卵子的特殊结构。1）卵泡的发育过程和形态特征卵泡发育是卵泡由原始卵泡发育成为成熟卵泡的生理过程。卵泡发育从形态上依次为原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡、三级卵泡和成熟卵泡。初级卵泡、次级卵泡和三级卵泡阶段，统称为生长卵泡。根据卵泡出现泡腔与否，分为无腔卵泡和有腔卵泡。三级卵泡以前的卵泡尚未出现泡腔，统称为无腔卵泡。三级卵泡和成熟卵泡因为存在卵泡腔，所以又称为有腔卵泡。（1）原始卵泡排列在卵巢皮质外周，其核心为一卵母细胞，周围为一层扁平状的卵泡上皮细胞，没有卵泡膜，没有卵泡腔。（2）初级卵泡排列在卵巢皮质外周，由一卵母细胞和周围的一层立方形卵泡细胞组成，卵泡膜尚未形成，也无卵泡腔。（3）次级卵泡移向卵巢皮质的中央，有多层圆柱状、体积较小的颗粒细胞，形成透明带、放射冠，无泡腔。（4）三级卵泡形成卵泡腔、卵丘和二层卵胞膜。（5）成熟卵泡卵泡腔很大，突出于卵巢表面。在发情时，能发育成熟的卵泡数：牛、马1个；猪：10-25个；绵羊1-3个；小鼠8个。成熟卵泡的直径：牛12-19mm；猪8-12mm；绵羊5-10mm；山羊7-10mm。2）卵泡的发生波卵泡发育是动态过程，即在任何时期检查动物的卵巢，均可发现处于两种或两种以上不同发育阶段的卵泡。每个发情周期，卵泡通过征集、选择和优势化三个阶段发育成熟。这种反映从原始卵泡发育至初级、次级、三级以至成熟卵泡动态变化过程所组成的图形，即为卵泡发生波。相对于其他卵泡具有发育优势性的卵泡为优势卵泡。其他卵泡则称为劣势卵泡或从属卵泡。优势卵泡对劣势卵泡的生长发育具有抑制作用。原始卵泡库启动卵泡生长形成卵泡腔促性腺激素反应性促性腺激素依赖性排卵卵泡排卵闭锁闭锁单排卵动物多排卵动物卵泡的闭锁和退化动物出生前，卵巢上就有很多原始卵泡，但只有少数卵泡能够发育成熟和排卵，绝大多数卵泡不破裂、排卵，而发生闭锁和退化。卵泡的闭锁和退化包括颗粒细胞和卵母细胞的一系列形态学变化。闭锁卵泡之所以发生闭锁，可能是由于垂体分泌FSH数量不够，或者是卵泡细胞对于FSH的反应性差所致。排卵和黄体形成1）排卵类型根据卵巢排卵特点和黄体的功能分为自发排卵和诱发排卵。自发排卵：卵泡发育成熟后自行破裂排卵并自动形成黄体。（大鼠、小鼠和仓鼠等如不交配，所形成的黄体是没有功能的。）诱发性排卵：必须通过交配或其他途径使子宫颈受到机械性刺激后才能排卵，并形成功能性黄体。骆驼、兔、猫等。诱发排卵的动物可通过注射促排卵的LH或hCG，或类似交配的机械性刺激子宫颈的方法诱发排卵。2）排卵的过程排卵前，卵泡经历着三大变化:①即卵母细胞细胞质和细胞核成熟;②卵丘细胞聚合力松懈，颗粒细胞各自分离;③卵泡膜变薄、破裂。所有这些变化都是由于LH和FSH的释放量骤增并达到一定比例时引起的。3）排卵时间和排卵数：排卵是成熟卵泡在LH峰作用下产生的，从排卵前LH峰至排卵的间隔时间，因动物种类而异，但在同种动物几乎是一定的。见下表。动物种类排卵前LH峰至排卵的间隔时间（h）排卵数动物种类排卵前LH峰至排卵的间隔时间（h）排卵数牛28~321大鼠12~1510猪40~4210~25小鼠12~258马1山羊1~3绵羊24~261~3犬3~12兔9~115猫2~104）排卵部位除卵巢门外，在卵巢表面的任何部位都可发生排卵，马属动物的排卵仅限于卵巢中央的排卵窝。在牛、马和绵羊，不管卵巢上有无黄体，排卵在两个卵巢可随机发生。很多哺乳动物一般都是两个卵巢交替排卵，但排卵率并不完全相同。牛右侧卵巢排卵率为60％。产后第一次排卵多发生在孕角对侧的卵巢上。5）黄体形成与退化（1）黄体形成成熟卵泡破裂、排卵后，卵泡液排出，卵泡壁塌陷皱缩，从破裂的卵泡壁血管流出血液和淋巴液，聚积于卵泡腔内形成血凝块，称为红体。颗粒细胞在LH作用下增生肥大，并吸收类脂质黄素而变成黄体细胞，构成黄体主体部分。同时，卵泡内膜分生出血管，布满于发育中的黄体，随着这些血管的分布，卵泡内膜细胞也移入黄体细胞之间，参与黄体的形成，此为卵泡内膜细胞来源的黄体细胞。黄体是一种暂时性的分泌器官。（2）黄体类型周期黄体：雌性动物如果没有妊娠，所形成的黄体在黄体期末退化。周期黄体通常在排卵后维持一定时间才退化。退化时间:牛为第14－15d，羊为第12－14d，猪为第13d，马为第17d。妊娠黄体：如果雌性动物妊娠，则转化为妊娠黄体，此时黄体的体积稍大。大多数动物妊娠黄体一直维持到妊娠结束才退化。而马例外，妊娠黄体一般维持到妊娠期第160d左右退化，然后依靠胎盘分泌的孕酮来维持妊娠。（3）黄体退化黄体退化时，由颗粒细胞转化的黄体细胞退化很快，表现在细胞质空泡化及核萎缩。随着微血管退化，供血减少，黄体体积逐渐变小，黄体细胞的数量也显著减少，颗粒层细胞逐渐被纤维细胞所代替，黄体细胞间结缔组织侵入、增殖，最后整个黄体细胞被结缔组织所代替，形成一个斑痂，颜色变白，称为白体，残留在卵巢上。复习思考题卵子的形状、卵子的结构。卵泡发育的阶段划分。卵子形成与精子形成相比有哪些特点？什么是自发排卵和诱发排卵？哪些动物是自发排卵的、哪些是诱发排卵的？雌性动物的发情课时教学计划教学目标：使学生了解主要家畜的发情表现、周期特点，初步掌握发情鉴定的方法要领。教学内容：1）发情与发情周期；2）发情鉴定。教学重点：发情与发情周期；发情鉴定。教学难点：直肠检查法进行牛的发情鉴定；外部观察法、试情法进行猪的发情鉴。教学方法：讲授与讨论带着问题学母畜的卵子产生及排卵是内在变化，母畜发情还有一定的外在表现，发情有哪些表现？为什么羊的发情持续期很短？为什么狗、猫的发情持续期很长，发情征状会很明显？为什么初情期、繁殖季节开始时、出现环境应激时，雌性动物常出现异常发情？生产中进行发情鉴定可以从哪些方面去鉴定？不同种类的动物发情鉴定的方法有什么不同？4.3发情与发情周期发情的概念及征状1）发情的概念雌性动物生长到一定年龄后，在垂体促性腺激素的作用下，卵巢上的卵泡发育并分泌雌激素，引起生殖器官和性行为的一系列变化，并产生性欲，雌性动物所处的这种生理状态称为发情。2）发情征状发情征状包括三个方面：卵泡发育及排卵、外生殖器充血粘液增多、性欲明显。（1）卵巢变化：发情开始前3-4d卵泡开始生长;发情前2-3d卵泡迅速发育。发情征象消失时卵泡发育成熟，在激素作用下排卵。（2）性行为变化：在雌激素和少量孕酮作用下，刺激神经中枢，引起性兴奋。常表现兴奋不安、十分敏感，鸣叫，举尾拱背，频频排尿，食欲减退，泌乳量减少，放牧时常离群独自行走。（3）生殖道变化：主要表现为外阴部充血、水肿、松软，阴蒂充血且有勃起；阴道黏膜充血、潮红；子宫和输卵管平滑肌蠕动加强，子宫颈松弛，子宫黏膜上皮细胞和子宫颈黏膜上皮杯状细胞增生，腺体增大，分泌机能增强，有黏液分泌。发情前期，黏液量少；发情盛期粘液量多而稀薄透明；发情末期，黏液量少而浓稠。发情周期概念：指雌性动物在繁殖季节及未怀孕时发情现象呈现出周期性变化，此周期性的性活动叫发情周期。计算法:从一次发情开始到下一次发情开始的间隔时间；或从一次发情期结束到下次发情期结束。牛、水牛、猪、山羊、马、驴平均为21d，绵羊为16－17d。1）发情周期的类型（1）季节性发情周期：某此动物只在一定时期才表现发情，这个时期称发情季节。①季节性多次发情：在一个发情季节有多次发情（马、驴、绵羊、骆驼）。马、绵羊均在春季产仔，而马春季发情、绵羊秋季发情。可通过人为措施（控光和激素）改变繁殖季节。②季节性单次发情：一个发情季节只有一次发情周期（狗、猫、狐狸、貂）。狗有春、秋两个发情季节。（2）无季节性发情周期：有些动物（牛、猪、兔、湖羊等），全年均可发情，当然季节也产生一定的影响。2）发情周期的阶段划分（1）四期方法：①发情前期：发情前的准备期。黄体退化萎缩；新的卵泡开始生长发育;阴道和阴门黏膜轻度充血、肿胀;子宫颈略为松弛，子宫腺体略有生长，腺体分泌活动逐渐增加，分泌少量稀薄黏液，阴道黏膜上皮细胞增生；但尚无性欲表现。②发情期（发情持续期）:母畜性欲达到高潮时期，是发情征状集中表现时期。卵巢上的卵泡迅速发育；阴道及阴门黏膜充血肿胀明显，子宫黏膜显著增生，子宫颈充血，子宫颈口开张，子宫肌层蠕动加强，腺体分泌增多，有大量透明稀薄黏液排出；性欲达到高潮的时愿意接受雄性动物交配。牛1~2d，猪2~3d，羊1~1.5d，马4~7d，犬13~14d。③发情后期:是指排卵后，黄体开始形成时期，发情表现恢复期。卵泡破裂排卵后，黄体开始形成并分泌孕酮；动物由性欲激动逐渐转入安静状态；生殖道充血肿胀逐渐消退，子宫肌层蠕动逐渐减弱，腺体活动减少，黏液量少而稠;子宫颈管逐渐封闭，子宫内膜逐渐增厚。④休情期(间情期):黄体活动期,从黄体形成到黄体萎缩。性欲已完全停止，精神状态恢复正常。间情期的前期子宫粘膜增厚，子宫腺体高度发育及分泌增强，分泌子宫乳供胚胎发育。（2）二期方法：①卵泡期：卵泡开始发育并逐渐成熟，分泌雌激素，刺激生殖道变化并产生性欲，最后卵泡破裂排卵。包括发情前期与发情期。②黄体期：卵泡破裂后形成黄体，直到黄体萎缩退化为止。它包括发情后期和休情期。发情周期的内分泌调节雌性动物发情周期的循环，是通过下丘脑-垂体-卵巢轴所分泌的激素，相互调节的结果。下丘脑分泌GnRH，促性垂体分泌FSH，经血液循环运送到卵巢，刺激卵泡生长发育，垂体分泌的LH与FSH协同作用，促进卵泡进一步生长并分泌雌激素，刺激生殖道发育。雌激素及少量孕酮刺激雌性动物性中枢，引起雌性动物发情。当雌激素分泌到一定数量时，作用于丘脑下部或垂体前叶，抑制FSH分泌，同时刺激LH释放。出现排卵前LH峰，引起卵泡进一步成熟、破裂、排卵。排卵后，卵泡颗粒层细胞在少量LH的作用下形成黄体并分泌孕酮。当孕酮分泌达到一定量时，对下丘脑和垂体产生负反馈作用，抑制FSH的分泌，卵泡不再发育，抑制中枢神经系统的性中枢，使雌性动物不再表现发情。若排出的卵子未受精，则黄体维持一段时间后，在子宫内膜产生的PGF2α的作用下，黄体逐渐萎缩退化，于是，孕酮分泌量急剧下降，下丘脑逐渐脱离孕酮的抑制作用。垂体前叶又释放FSH，使卵巢上新的卵泡又开始生长发育。发情周期中的生殖激素变化发情周期中的生殖激素变化发情周期中的生殖激素变化异常发情、乏情和产后发情1）异常发情异常发情指：由于内外因素的影响,引起生殖激素调节失调,而打乱母畜正常的发情规律,而表现出种种不规律或不明显的发情现象。①初情期后，性成熟前，易发生。②繁殖季节刚开始时,接近结束时,易出现。③繁殖季节中，外界因素的突然刺激易发生（条件变化，劳役过度，营养不良）。（1）安静发情（隐性发情或安静排卵）发情时缺乏外表征象，但卵巢上有卵泡发育、成熟并排卵。（2）短促发情动物发情持续时间短，如不注意观察，往往错过配种时机。（3）断续发情发情延续很长，且发情时断时续，多见于早春或营养不良的母马。（4）持续发情慕雄狂的症状之一，常见于牛和猪，马也可能发生，表现为持续强烈的发情行为。发情周期不正常，发情期长短不一。（5）孕后发情(妊娠发情或假发情)是指在怀孕期仍有发情表现。2）乏情指长期不发情，卵巢处于相对静止状态，无周期性的功能活动。乏情有生理性乏情与病理性乏情之分。（1）季节性乏情在非繁殖季节，卵巢上的卵泡无周期性活动，生殖道无周期性变化。（2）泌乳性乏情有些动物在产后泌乳期间，由于卵巢周期性活动机能受到抑制而不发情。（3）营养性乏情日粮营养水平对卵巢机能活动有明显影响。（4）应激性乏情如气候恶劣、畜群密集、使役过度、栏舍卫生不良、长途运输等都可抑制发情。（5）衰老性乏情动物因衰老使下丘-垂体-性腺轴的功能减退，导致垂体GTH分泌减少，或卵巢对激素的反应性降低，不能激发卵巢机能活动而不表现发情。3）产后发情是指动物分娩后的第一次发情。（1）母猪一般在分娩后3－6d内出现发情，但不排卵;在仔猪断乳后1周之内出现第一次正常发情。（2）母马往往在产驹后6－12d发情，一般发情表现不太明显，甚至无发情表现，有卵泡发育且可排卵，因此可配种，俗称“配血驹”。（3）母牛一般可在产后40－50d发情。（4）母羊大多在产后2－3月发情，不哺乳产后20天左右发情。（5）母兔在产后1－2d就有发情，卵泡发育成熟并排卵。（6）实验动物大鼠和小鼠一般在产后2－3周左右表现第一次发情。4.4发情鉴定发情鉴定的意义发情鉴定是动物繁殖工作中一项重要的技术环节。其意义主要有两方面：①通过发情鉴定，可以判断动物的发情阶段，预测排卵时间，以确定适宜配种期，及时进行配种或人工授精，从而达到提高受胎率的目的。减少输精次数，防止产生精子免疫。②还可以发现动物发情是否正常，以便发现问题（如产后发情），发现生殖道疾病（如子宫炎、卵巢襄炎），予以及时解决。外部观察法主要以外表的精神、性欲表现程度，外生殖器的变化来判断。发情动物常表现为精神不安、鸣叫、食欲减退、外阴部充血肿胀、湿润，有黏液流出，对周围环境和雄性动物的反应敏感。不同动物往往还有特殊的表现，如母牛爬跨；母猪闹圈、压背时出现静立反射；母马扬头嘶叫，阴唇不断外翻，露出阴蒂等。这些特征表现随发情进程由弱到强，再由强到弱，发情结束后消失。试情法试情方法：①用结扎输精管的公畜放群试情。②牵引试情。③对母猪，可采用气味，叫声等来刺激。发情时，通常表现为愿意接近雄性，弓腰举尾，后肢开张，频频排尿，有求配种动作等。而不发情或发情结束后则表现为远离雄性，当强行牵引接近时，往往会出现躲避，甚至踢、咬等抗拒行为：拒绝交配。阴道检查法将阴道开张器或阴道扩张筒插入并扩张阴道，借用光源观察阴道黏膜颜色、充血程度，子宫颈松弛状态、外口颜色、充血肿胀程度及开口大小，分泌液的颜色、黏稠度及量的多少、有无黏液流出。检查时要将开膣器消毒，防感染；插入时要慢，不要损伤阴道。直肠检查法主要应用于牛、马等大家畜。将手臂伸入母畜直肠内，隔着直肠壁用手指触摸卵巢及卵泡发育情况，如卵巢的大小、形状、质也卵泡发育的部位、大小、弹性、卵泡壁厚薄以及卵泡是否破裂，有无黄体等。在间情期，卵巢上有大小不等的黄体突出于表面；在发情期，卵巢上则有发育的卵泡，卵泡由小变大，由硬变软，由无弹性变为有弹性。牛直肠检查寻找卵巢卵泡的方法:将手掌伸进直肠狭窄部之后，手指并拢，手心向下，轻轻下压并左右抚摸，在骨盆底上方摸到子宫颈，然后沿子宫颈向前移动，便可摸到子宫体、子宫角间沟和子宫角，再向前伸至角间沟分叉处。将手移到一侧子宫角上，手指向前并向下，在子宫角弯曲处即可摸到卵巢。此时可用手指仔细触诊感觉卵巢大小、形状、质地和卵泡的发育情况。触摸完一侧后，按同样的顺序触摸另一侧子宫角及卵巢。生殖激素检测法应用激素测定技术，通过测定体液(血浆、血清、乳汁、尿液等)中生殖激素(FSH、LH、雌激素、孕酮等)水平，依据发情周期中生殖激素的变化规律来判断发情的方法。已有多种激素ELISA检测试剂盒用于发情鉴定。仿生学法模拟公畜的声音（放录音磁带）和气味（天然或人工合成的气雾制剂）刺激母畜的听觉和嗅觉器官，观察其受到刺激后的反应情况，判断母畜是否发情的方法。电测法应用电阻表测定雌性动物阴道黏液的电阻值来进行发情鉴定的方法。黏液和黏膜的总电阻变化与卵泡发育程度以及黏液中的盐类、糖、酶等含量有关。一般地说，在发情期电阻值降低，而在周期其他阶段则趋升高。生殖道黏液pH测定法生殖道黏液pH一般在发情盛期为中性或偏碱性，黄体期偏酸性。母牛子宫颈液pH在6.0－7.8之间，当经产母牛pH在6.7－6.8时输精受胎率最高，处女牛的pH在6.7时输精受胎率最高。其他方法：颜色标记法、子宫颈黏液透析法、离子选择性电极法、宫颈黏液结晶法和阴道上皮细胞抹片法等。复习思考题猪、牛、羊的发情周期、发情持续期。猪的发情外部表现有哪些？牛的发情鉴定直肠检查法的操作及判别要点。牛的发情鉴定

一、母牛发情的特点1、发情持续时间短（18h）、2、发情结束后排卵（性欲结束后的5～16h）3、子宫颈开张度小、生殖道排出的黏液量大4、发情结束后生殖道出血5、发情时接受其它牛爬跨、安静发情率高二、母牛的发情鉴定1、外部观察法观察母牛的神态、采食情况、外阴部变化以及黏液的数量和粘稠度等。根据母牛发情表现将发情期分为三期：发情初期：爬跨其它母牛，黏膜粉红，清水样黏液发情中期：愿意接受其它牛爬跨，鸣叫，黏膜充血潮红，透明黏液黏性强，不易拉断发情后期：不爬跨也不接受爬跨，不再鸣叫，黏膜淡红色，半透明黏液，黏性减退二、母牛的发情鉴定A、发情母牛被它牛嗅闻B、发情母牛接受爬跨C、发情母牛被爬不动

发情母牛爬跨过程二、母牛的发情鉴定二、母牛的发情鉴定2、阴道检查法3、直肠检查法4、计步器发情鉴定法比未发情母牛高2-4倍牛的配种和妊娠鉴定

三、牛的配种技术1、适宜的配种时间性欲结束后第一次输精，间隔8～12h第二次输精；早爬跨，下午配种，第二天上午复配，下午爬跨，次日早晨配种，下午复配2、配种方法-直肠把握输精法（视频）三、牛的配种技术四、牛的妊娠诊断1、早期妊娠诊断阴道检查法：阴道黏膜干燥、苍白无光，有子宫颈塞直肠检查法：子宫角不对称、增粗、有液体波动感、卵巢增大有黄体激素诊断法：乙烯雌酚注射，妊娠母牛无发情表现，未妊娠母牛有发情表现巩膜血管诊断法：巩膜表面有明显纵向血管1～2条，细而清晰，颜色鲜红7%碘酒法：在母牛鲜尿中滴入2ml7%碘酒溶液，混合5～6分钟，暗紫色为妊娠，不变色为未妊娠四、牛的妊娠诊断B超、血液孕检血检操作简便，在血样送检4小时后可以检测出结果避免人员孕检技术水平的限制导致误检，并造成系统信息的更改；降低早期胚胎因外力死亡的几率；缩短牛只空怀天数：直肠检查40天开始，B超检查35天开始，血液检测28天开始四、牛的妊娠诊断五、接产、助产1、妊娠期与预产期推算黄牛妊娠期275～285天水牛妊娠期300～328天牦牛妊娠期226～289天黄牛预产期推算：月减3，日加6五、接产、助产2、临产征状乳房增大、外阴部肿胀、骨盆韧带松弛、产前1周体温升高0.5～1℃，分娩前12h又下降0.4～1.2℃，行为发生改变，不安、频频排尿、头向腹部回顾等3、分娩过程开口期、胎儿产出期、胎衣排出期产前漏乳产前坐骨韧带松弛产前乳房水肿产前阴户水肿母牛努责羊膜破裂，羊水流出胎儿头和前肢露出初生犊牛胎衣排出恶露五、接产、助产4、接产、助产方法（视频）5、母牛产后护理休息、喂给温热麸皮盐水汤、防止吃胎衣、胎衣不下的处理6、初生犊牛处理擦净黏液、假死现象处理、处理脐带、剥软蹄、称重、编号、吃初乳胚胎工程

胚胎移植

胚胎移植概述1）胚胎移植的概念胚胎移植就是采用一定的方法将良种母畜的多枚早期胚胎从体内取出，移植到相同生理状态的另一头母畜（受体）的子宫内或输卵管内的过程，也叫借腹怀胎。提供胚胎的个体为供体。接受胚胎的个体为受体。胚胎移植实际上是产生胚胎的供体和养育胚胎的受体分工合作共同繁殖后代的过程。供体决定着后代的遗传特性（基因型），受体只影响它的体质发育。胚胎移植2）胚胎移植的意义（1）充分发挥优良母畜的繁殖潜力，加快品种改良和育种的进程。（2）加快某一特定品种扩群速度。（3）有利于濒危动物的保护与利用。保存动物的品种资源。（4）诱发肉畜怀双胎，提高生产效率。胚胎移植（5）通过胚胎的运输代替种畜进出口。（6）培育无特异病原体（SPF）畜群，向封闭群引进新的个体时，作为控制疾病的一种措施，采用胚胎移植技术则可以代替剖腹取仔的方法。（7）克服不孕。对于能正常发情排卵但不能妊娠的雌性，可以用胚胎移植生育后代。（8）作为发育生物学和其他胚胎生物技术的研究手段。胚胎移植

胚胎移植的原理1）胚胎移植的生理基础（1）母畜发情后生殖器官的孕向性变化（2）胚胎在发育的早期阶段处于游离状态（3）移植的胚胎具有免疫耐受作用（4）胚胎的遗传特性不受受体母畜的影响胚胎移植2）胚胎移植的操作原则（1）胚胎移植前后所处环境的同一性。①供体和受体须属于同一物种。②受体和供体在发情时间上的同期性，一般要求相差24h以内。③移植后的胚胎与移植前，所处的空间环境相似性。（2）胚胎移植的时限应在周期性黄体退化之前。通常在供体发情配种后3～8d收集胚胎，受体同时接受移植。（3）避免不良因素对胚胎的损害，保证胚胎的质量。必须经过鉴定确认为发育正常者。（4）供体的生产性能、经济价值均须大于受体，受体数量要多；两者均须健康无病；移植对供、受体以后生殖不造成损害。胚胎移植

胚胎移植的程序胚胎移植技术主要包括胚胎的收集、检查、培养保存和移植等几个步骤。由于进行胚胎移植时希望一次从供体母畜得到多个胚胎，所以要对其进行超数排卵处理。同时，胚胎移植成功的先决条件是供体和受体必须同时发情，故需对其进行发情同期化处理。胚胎移植1）供体与受体的选择（1）供体的选择①应选择生产性能高，经济价值大的优良品种的母畜作为供体。②具有良好的繁殖能力，既往繁殖史正常，易配易孕，没有遗传缺陷，分娩顺利正常无难产。最好为第二胎以上的成年母畜。③健康无病，特别是无繁殖疾病和传染性疾病。产后60d以上。④营养良好，体质健壮。胚胎移植（2）受体的选择①受体母畜数量多，一般为非优良品种的个体。②具有良好的繁殖性能和健康体况。③体型中等偏上。以经产母畜为好。④如选择自然发情的母畜为受体，与供体发情同步差不超过±24小时。一般进行发情同期化处理。胚胎移植2）供体和受体发情同期化、供体的超数排卵处理（1）供、受体的发情同期化只有当供、受体的生殖器官处于相同的生理状态，移植的胚胎才能正常发育。若不同期，胚胎处于不同生理环境，受体母畜不能产生促黄体作用，不能分泌足量的孕酮，胚胎就不能附植。一般供受体同期化发情时间不得超过一天。同期发情药物通常使用前列腺素及其类似物，其用量根据药物的种类和用法而有不同。在注射PGF2α后24小时，配合注射促进卵泡发育的PMSG或FSH，可明显提高同期发情效果。（2）供体超数排卵处理并配种或人工授精胚胎移植3）胚胎采集采胚是指借助工具利用冲胚液将胚胎由生殖道（输卵管或子宫角）中冲出，并收集在器皿中。胚胎采集有手术法和非手术法两种方法，手术法适用于各种动物，非手术法仅适用于牛、马等大动物，且只能在胚胎进入子宫后进行。胚胎移植（1）胚胎采集前的准备①冲胚液、培养液的配制为了保证胚胎在离体条件下不受损伤，冲胚液必须符合一定的渗透压和PH值。现在多采用杜氏磷酸缓冲液（PBS）、布林斯特氏液、合成输卵管液（SOF）以及199培养液（TCM199）等，它们除含各种盐类外，还含有多种有机成分，不但可用于冲洗、采胚，还可用于体外培养、冷冻保存和解冻胚胎等。冲胚液和培养液在使用前都要加入血清白蛋白，含量一般为0.3~1%，也可用犊牛血清代替，犊牛血清需加热（56℃水浴30分钟）灭活，使血清中的补体失去活性，以利胚胎存活。冲胚血清含量一般为3%（1~5%），培养血清含量为20%（1~50%）。胚胎移植②采胚时间的确定采胚时间的确定应根据配种时间、发生排卵的大致时间、胚胎的运行速度、胚胎的发育阶段、畜种、胚胎所处部位、采胚方法等因素来确定。胚胎移植排卵时间发育速度（排卵后天数）2C4C8C16C进入子宫胚泡形成脱离透明带附植开始牛结束后10~11h1~1.52~3343~47~89~1122绵羊开始后24~30h1.51.5~22.532~46~77~815猪开始后35~45h1~21~32~33.5~52~2.55~6613马结束前1~2d11.534~4.54~66837兔交配后10~11h11~1.51.5~222.5~43~4胚胎移植（2）采胚方法①手术法采胚：羊多用手术法采胚，仰卧保定，术部乳房前腹中线旁，两条乳静脉间。术前停食24~48h，肌注静松灵0.5ml，局麻用0.5%普卡。也可2%普卡2~3ml或多卡因2ml尾荐硬膜外麻醉。羊在排卵后2~3d输卵管采胚或4~7d子宫角手术法采胚。胚胎移植输卵管法：按照外科手术要求在腹中线作一切口，找到输卵管和子宫，引出切口外，观察卵巢上的排卵情况与数量，再用注射器把冲胚液20~30ml注入子宫角前端，在输卵管伞部插入一根玻璃管或塑料导管，把冲洗液接入器皿内，等待检胚。子宫角法：在子宫角基部插入二路式冲胚管，并充气固定，再用冲卵针头从子宫角尖端插入，推入冲卵液（50~60ml），回收胚胎。胚胎移植②非手术法采胚：目前牛的采胚多在配种后6~8d桑椹胚晚期或胚泡早期用非手术法采集。母牛在采胚前要禁水禁食一天；采胚前10min进行麻醉（如注射静松灵1~1.5ml）。胚胎移植操作者按直把输精法将采胚管插入一侧子宫角小弯附近，由助手抽出不锈钢导杆，从进气口注入18~20ml空气，堵住子宫角；再由助手用注射器从进水口注入事先准备好加温至37℃的冲胚液，反复冲冼5~6次，将回收的冲胚液收入集胚器内，置于37℃恒温箱或无菌室内等待检查。一侧子宫角冲洗完后，按上法再冲另一侧子宫角。结束后向子宫内注入抗生素以防感染。胚胎移植4）胚胎检查（1）检胚将收集的冲卵液于37℃温箱内静置10一15分钟。胚胎沉底后，移去上层液。取底部少量液体移至平皿内，静置后，在实体显微镜下先在低倍（10一20倍）下检查胚胎数量，然后在较大倍数（50—100倍）下观察胚胎质量。（2）洗胚将胚胎在洗液中转移清洗、处理胚胎。吸卵可用1毫升的注射器装上特别的吸头进行，也可使用自制的吸卵管。胚胎移植（3）胚胎质量鉴定：正常发育的胚胎，其中细胞（卵裂球）外形整齐，大小一致，分布均匀，外膜完整。无卵裂现象（未受精）和异常卵（外膜破裂、卵裂球破裂等）都不能用于移植。胚胎鉴定的方法有以下几种：①形态学法在30—60倍的实体显微镜下或120—160倍的生物显微镜下对胚胎进行评定，评定的内容包括：a.卵子是否受精。b.透明带的形状、厚度、有无破损。c.卵裂球的致密程度，卵黄周隙内是否有游离的细胞或细胞碎片，细胞大小是否有差异。d.以及胚胎的结构和发育程度等。根据胚胎的形态特征可将胚胎分为A（优）、B（良）、C（中）、D（差）。胚胎移植胚胎移植②荧光活体染色法将二醋酸荧光素（FAD）加入待鉴定的胚胎中，培养3—6分钟，活胚胎显示荧光，死胚胎无荧光。③测定代谢活性法将待鉴定的胚胎放入含有葡萄糖的培养液中，培养1小时后，测定葡萄糖的消耗量，每培养1小时消耗葡萄糖2—5ug以上者为活胚胎。应注意的是在捡胚及进行胚胎分类时，胚胎均应保持在不低于25。C的温度下。胚胎移植5）胚胎的培养与保存培养是在体温的条件下，于培养液中使胚胎继续发育。在体外发育的同时，当然也延长了体外存活的时间，间接地达到了保存的目的，但时间一般只能持续数日。保存是使胚胎在体外一定条件下（降温）停止发育，延长其在体外的生存时间，当需要时升温后进行移植。胚胎的保存方法目前有三种：常温保存、低温保存和冷冻保存。胚胎移植（1）常温保存：是指胚胎在常温（15~25℃）下保存。通常采用含20%犊牛血清的PPS保存液，可保存胚胎4~8小时。（2）低温保存：是指在0~10℃的较低温度下保存胚胎的方法。在此温度下，胚胎细胞分裂暂停，新陈代谢速度减慢。但细胞的一些成分特别是酶处于不稳定状态，因此在此温度下保存胚胎也只能维持有限的时间。各种哺乳动物低温保存胚胎的合适温度是：小鼠5~10℃，兔10℃，山羊5~10℃，牛0~6℃。胚胎移植（3）冷冻保存：冷冻保存一般是指在干冰和液氮中保存胚胎。其最大的优点是胚胎可以长期保存，而对其活力无影响。胚胎冷冻的方法很多，可以归纳为缓慢降温法、快速冷冻法和一步冷冻法（直接冷冻法）三种：①缓慢降温法：为最早采用的方法。加入保护剂后，以0.2~0.8℃/分的速率降至-196℃后投入液氮。同样解冻也需要缓慢升温。此法冷冻解冻过程耗时太长，现已淘汰。胚胎移植②快速冷冻法：为目前最成熟的方法。与一步法相比，虽然操作比较繁杂，需要专门的冷冻仪，但胚胎解冻后存活率及移植成功率较高，为目前生产中最常用的方法。其具体操作步骤为：A．胚胎采集和洗涤B．加入冷冻液C．装管和标记D．冷冻和诱发结晶（植冰）E．解冻和脱除保护剂胚胎移植③玻璃化法：采用25%的甘油、丙二醇、乙二醇中的任何两种保护剂组成高浓度的玻璃化液。胚胎分两步移入低、高浓度的保护剂中，装入细管并在4℃平衡10分钟，然后直接或在液氮中放置1~2分钟投入液氮。解冻后可分两步法脱去保护剂。此法操作简单，不需要专门的冷冻仪，为将来发展的方向，但成功率还有待提高。胚胎移植6）胚胎的移植为保证胚胎输入输卵管或子宫角时，防止胚胎粘到吸管内丢失，因此用吸管吸取胚胎的程序为：先吸入一段保存液，一段空气，然后再吸一段含有胚胎的保存液，一段空气，最后吸少量保存液，吸管的尖端再留一段空隙。胚胎移植（1）手术法移植：在进行采胚和检查的同时或之后，立即在受体腹部作一切口，找到排卵一侧的卵巢，用注射器或移植器将胚胎注入同侧的子宫角或输卵管内。（2）非手术法移植：适用于牛马等大动物。移植前将可移植的胚胎吸入0.25ml塑料细管内，隔着细管在实体显微镜下检查，确定胚胎已吸入细管内，然后将细管装入移植器中移植。如果向一头受体移植两个或两个以上胚胎时，应按胚胎数均等地分别注入到两个子宫角或输卵管内。胚胎生物工程技术简介

体外受精技术体外受精技术是动物胚胎工程的一项重要技术，是指通过人为操作使精子和卵在体外环境中完成受精过程。其操作步骤如下：1）精子采集与获能处理2）卵母细胞采集与成熟培养3）精卵体外受精4）受精的判定5）体外受精卵（早期胚胎）的培养发育胚胎生物工程技术简介胚胎生物工程技术简介胚胎性别控制及性别鉴定技术1）胚胎性别控制技术（1）X、Y精子的分离精于分离主要依据是X、Y精子在DNA含量、大小、比重、活力、膜电荷、酶类、细胞表面、移动速度、抵抗力上等均有差异，但差异甚小。其主要分离方法有沉降法、离心沉降法、密度梯度离心法、过滤法、层析法、电泳法及免疫学方法等。但目前均没有取得稳定可靠的结果。从研究现状看，分离X、Y精子还存在相当大的困难，与生产应用尚有一定距离。胚胎生物工程技术简介流式细胞器分离仪器XY种畜(天津)有限公司由新疆生物股份有限公司和美国亚达出口公司合资组建，主要引进美国XY公司的精子细胞分类仪和技术。2004年7月一期引进40台。分离X精子速度4000个/秒以上，解冻后活力达到0.4以上，每台分离仪每月生产4500支（含X精子200万个），分离准确率93%。利用高产奶牛种公牛的性控精液，使母牛的出生率达到90％以上。胚胎生物工程技术简介（2）改变受精环境雄性动物产生X或Y精子，有支配性别的决定权；而雌性动物有支配性别的选择权，改变母畜受精的环境，有可能改变性比例。利用5％精氨酸（生母液）1mL输精前15min子宫颈灌注，然后输精，使牛的母犊控制率达80％。北京三牛兴业科技发展有限责任公司生产奶牛性控胶囊，用0.9%生理盐水2ml稀释一粒胶囊，在人工输精前40min输入母牛子宫，母犊率稳定在70%-75%。cm处，产雌率76%左右。胚胎生物工程技术简介2）胚胎的性别鉴定对胚胎的性别进行鉴定，选择（淘汰）某一性别的胚胎，仍不失为一种控制后代性别较为理想的方法。（1）组织学方法通过取胚胎细胞