荧光荧光第三部分

荧光荧光第三部分八、荧光标记物和标记反应和氨基反应的和巯基反应的和其他基团反应的第2页,共43页，2024年2月25日，星期天1.和氨基反应的第3页,共43页，2024年2月25日，星期天fluorescein-5-isothiocyanate(FITC'IsomerI')

MolecularFormula:C21H11NO5S

MolecularWeight:389.38CASNumber/Name:3326-32-7/Spiro(isobenzofuran-1(3H),9'-(9H)xanthen)-3-one,3',6'-dihydroxy-5-isothiocyanato-第4页,共43页，2024年2月25日，星期天fluorescein-6-isothiocyanate(FITC'IsomerII')

MolecularFormula:C21H11NO5SMolecularWeight:389.38CASNumber/Name:18861-78-4/Spiro(isobenzofuran-1(3H),9'-(9H)xanthen)-3-one,3',6'-dihydroxy-6-isothiocyanato-第5页,共43页，2024年2月25日，星期天4-dimethylaminoazobenzene-4'-sulfonylchloride(dabsylchloride)

MolecularFormula:C14H14ClN3O2SMolecularWeight:323.80CASNumber/Name:56512-49-3/Benzenesulfonylchloride,4-((4-(dimethylamino)phenyl)azo)第6页,共43页，2024年2月25日，星期天RhodamineRed™-X,succinimidylester

MolecularFormula:C37H44N4O10S2MolecularWeight:768.90CASNumber/Name:N/A第7页,共43页，2024年2月25日，星期天TexasRed®sulfonylchloride

MolecularFormular:C31H29ClN2O6S2MolecularWeight:625.15CASNumber/Name:82354-19-6/1H,5H,11H,15H-Xantheno[2,3,4-ij:5,6,7-i'j']diquinolizin-18-ium,9-[2(or4)-(chlorosulfonyl)-4(or2)-sulfophenyl]-2,3,6,7,12,13,16,17-octahydro-,innersalt第8页,共43页，2024年2月25日，星期天Spectra—TexasRed-BSAconjugate

AbsorptionandfluorescenceemissionspectraoftheTexasRedconjugateofbovineserumalbumin(A-23017)inpH7.0buffer.第9页,共43页，2024年2月25日，星期天牛肺动脉内皮细胞微丝成像用AlexaFluor430标记抗体实现微丝染色第10页,共43页，2024年2月25日，星期天斑马鱼视网膜绿色：AlexaFluor488标记蓝色：Hoechst33258染核第11页,共43页，2024年2月25日，星期天2.和巯基反应第12页,共43页，2024年2月25日，星期天AlexaFluor488C5maleimine第13页,共43页，2024年2月25日，星期天5-(bromomethyl)fluorescein第14页,共43页，2024年2月25日，星期天Tetramethylrhodamine-5-maleimide第15页,共43页，2024年2月25日，星期天AlexaFluor350,488,568：核、微管、特殊蛋白第16页,共43页，2024年2月25日，星期天3.标记其他基团羟基：蛋白质中丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸残基；糖类第17页,共43页，2024年2月25日，星期天NBD-Cl第18页,共43页，2024年2月25日，星期天第19页,共43页，2024年2月25日，星期天第20页,共43页，2024年2月25日，星期天肼和芳香胺用来标记醛、酮第21页,共43页，2024年2月25日，星期天APTSFluorescein-5-thiosemicarbazide第22页,共43页，2024年2月25日，星期天九、荧光分析方法常规荧光分析法三维荧光分析法时间分辨荧光分析法能量转移荧光分析法荧光免疫分析超灵敏技术（信号放大）第23页,共43页，2024年2月25日，星期天1、常规荧光分析法荧光生成/增敏法荧光猝灭法同步荧光分析法第24页,共43页，2024年2月25日，星期天（1）、荧光生成/增敏法

1.待测物本身有荧光，可以直接进行测定

2.待测物没有荧光或荧光较弱，则反应产生荧光衍生物进行测定第25页,共43页，2024年2月25日，星期天荧光强度与物质浓度的关系

It=AI0e-kcldI=AI0e-kcx－AI0e-kc(x+dx)

=AI0e-kcx(1－e-kcx)因dxkc很小dI=AI0kce-kcx.dxdF=KdI=KAI0kce-kcxdx液槽中溶液荧光强度

F=KAI0kc∫0le-kcxdx=KAI0[1－e-kcl]=AKI0[kcl－(kcl)2/2!+(kcl)3/3!－…]=AKI0kcl[1－kcl/2+(kcl)2/6－…]第26页,共43页，2024年2月25日，星期天当kcl≤0.05则括号内第二项开始可忽略不计F=AKI0kcl对1cm2吸光截面F=2.3φI0εclA不超过0.05第27页,共43页，2024年2月25日，星期天（2）、荧光猝灭法待测物没有荧光，但它可以通过动态猝灭或静态猝灭的过程使一荧光物的荧光猝灭进行测定。

如：O2猝灭芘丁二酸的荧光，用于测定血液中的氧

S2-猝灭荧光素汞的荧光用于测定环境中石油及天然气中的痕量硫

第28页,共43页，2024年2月25日，星期天（3）、同步荧光分析法同步荧光是在同时扫描两个单色器波长的情况下测绘的荧光光谱，根据激发和发射两个单色器在同时扫描过程中彼此间所应保持的关系，同步荧光测定可分为三个类型：1．

固定波长同步荧光，在同时扫描过程中使激发波长和发射波长彼此保持固定的波长间隔，即λem-λex=常数。2．

固定能量同步荧光，在同时扫描过程中使激发波长和发射波长之间保持一个固定的能量差（1/λex-1/λem）X107=△v=常数△v表示能量差（cm-1）即激发和发射两个单色器之间保持固定波数差进行扫描可变角（或可变波长）同步荧光：在同时扫描过程中使激发和发射两个单色器以不同的速率同时进行扫描，第29页,共43页，2024年2月25日，星期天第30页,共43页，2024年2月25日，星期天同步荧光法优点光谱简化谱带窄化减小光谱重叠减小散射光的影响第31页,共43页，2024年2月25日，星期天2、三维荧光分析法第32页,共43页，2024年2月25日，星期天3、时间分辨荧光分析法第33页,共43页，2024年2月25日，星期天4、能量转移荧光分析法第34页,共43页，2024年2月25日，星期天茶叶碱的测定第35页,共43页，2024年2月25日，星期天HIV的测定HIVprotease检测原理第36页,共43页，2024年2月25日，星期天5、荧光免疫分析

(FluorescenceImmunoassay)

BersonandYalowRIA1959

Antigen,AgAntibody,Ab

RIAELIAFIACLIA第37页,共43页，2024年2月25日，星期天6、超灵敏检测酶标荧光放大技术荧光微球第38页,共43页，2024年