组织学与胚胎学绪论 培训教学课件

组织学与胚胎学

Histology

and

Embryology第一页，共二十四页。绪论

Introduction组织学

histology第二页，共二十四页。组织学(histology)：研究机体微细结构及其相关功能的科学。组织上皮组织结缔组织肌肉组织神经组织细胞细胞间质器官系统人体细胞cell：是机体形态结构与功能的基本单位。细胞间质intracellular：由细胞分泌产生，对细胞起支持、营养、保护等作用，构成细胞生存的微环境。组织tissue：由一些形态结构相似、生理功能相近的细胞和细胞间质组成的群体结构，是构成机体器官的基本成分。分为上皮组织、结缔组织、肌组织和神经组织等4种基本组织。器官organ：由组织有机组合而成，具有一定的形态结构，并执行特定的生理功能。如心、肝、脾、肺、肾。系统system：由一些结构连续、功能相关的器官组合而成，完成连续的生理活动。一、组织学的定义和研究内容第三页，共二十四页。组织学结构观察组织学结构光镜结构：用光学显微镜观察的结构(lightmicroscope，LM，简称光镜)电镜结构：又称超微结构，电子显微镜下观察的结构(electronmicroscope,EM，简称电镜)第四页，共二十四页。二、组织学的常用研究方法问题解决方法观察对象太小显微镜放大观察对象无色，无反差染色(如HE染色)观察对象生化成分不同组织化学、免疫组织化学观察对象是活体培养组织学研究过程中存在的问题和解决方法第五页，共二十四页。组织学与胚胎学最常用的技术，最大放大倍数常为1000倍。1.切片术最常用组织切片标本制备技术基本程序：①取材：0.5cm

②固定：甲醛、乙醇③脱水：如果是冰冻切片则不需要此步骤④包埋：石蜡、火棉胶、树脂⑤切片：组织切片机、冰冻切片机⑥脱蜡：如果是石蜡包埋则需要此步骤⑦染色：最常用染色方法为HE染色⑧封片：2.非切片法：涂片法、铺片法、磨片法等。(一)光学显微镜技术第六页，共二十四页。常用染色方法：HE染色苏木精(Hematoxylin)碱性染料细胞核中的染色质细胞质中的核糖体染成蓝色(嗜碱性)染成红色

(嗜酸性)细胞质细胞间质成份伊红(Eosin)酸性染料第七页，共二十四页。嗜碱性：对碱性燃料有较强亲和力，可使细胞核内的染色质及细胞质内的核糖体等结构染成蓝紫色嗜酸性：对酸性染料有较强亲和力，可使多数细胞的细胞质染成粉红色

中性：与两种染液亲合力都不强组织结构的嗜色性嗜碱性嗜酸性第八页，共二十四页。

A嗜银性B嗜铬性C异染性其它染色方法第九页，共二十四页。普通光学显微镜

(lightmicroscope，LM)是观察组织细胞微细结构最常用的工具光学部分：起放大作用光镜的分辨率约为0.2µm可放大1500倍左右机械部分：第十页，共二十四页。⑷倒置显微镜(invertedmicrscope)⑸暗视野显微镜(darkfieldmicroscope)⑹偏光显微镜(polarizationmicroscope)几种特殊光学显微镜术⑴相差显微镜(phasecontrastmicroscope)用于观察生活细胞和末经染色细胞的形态结构神经干细胞培养⑵荧光显微镜(fluorescencemicrscope)

是用以观察细胞、组织内荧光物质的分布神经球⑶激光共聚焦扫描显微镜(confocallaserscanningmicroscope，CLSM)

由激光光源、共焦成像扫描系统、电子光学系统和微机图象分析系统四部份构成。

可对样品进行断层扫描重建三维图像，进行体视学分析；测定细胞内pH、钙浓度等；精确地检测、识别组织细胞的微细结构及其变化。又称细胞CT。CLSM第十一页，共二十四页。透射电镜(transmissionelectronmicroscope,TEM)

观察细胞内部结构；分辨率为0.1-0.2nm,可放大几万－几十万倍扫描电镜(scanningelectronmicroscope,SEM)

观察组织或细胞表面的立体结构冰冻蚀刻复型技术(freezeetchreplicamethod)观察细胞断裂表面形态结构X-射线显微分析术(X-raymicroanalysis)研究细胞、组织内元素种类分布和含量冷冻割断技术(freezecracking)扫描电镜铸型技术(scanningelectronmicroscopecasting)超高电压电镜(ultravoltageelectronmicroscope,UEM)扫描探针电镜(scanningprobemicroscope,SPM)透射电镜与照片TEM淋巴细胞扫描电镜与照片1.纤毛2.微绒毛冰冻蚀刻细胞

冷冻断裂肾小球右下线粒体冰冻蚀刻照片分析电镜X线微区分析分析电镜－X线微区分析图片(二)电子显微镜技术(electronmicroscope,EM)第十二页，共二十四页。1.糖类显示法：

过碘酸-希夫反应(periodicacidSchiffreaction，PAS反应)：

检测组织或细胞中有无多糖存在。

PAS反应阳性部位即表示多糖和蛋白多糖的存在(三)组织化学和细胞化学技术PAS阳性小肠上皮基本原理：多糖过碘酸氧化醛Schiff试剂紫红色沉淀第十三页，共二十四页。酶细胞化学神经元ACP酶阳性脂类显示法

苏丹Ⅲ

锇酸

髓鞘染色

核酸显示法：甲基绿-派若宁反应2.酶类显示法：

酸性磷酸酶(ACP)显示法3.脂类显示法：4.核酸显示法：

福尔根反应

甲基绿-派若宁反应第十四页，共二十四页。

是将免疫学原理与组织化学和细胞化学技术相结合建立的新技术.利用抗原(antigen，Ag)，抗体(antibody)特异结合的原理，用已知抗体检测未知抗原(组织细胞内某些多肽、蛋白质等大分子物质)的存在与分布的一种方法。(四)免疫组织化学和免疫细胞化学技术第十五页，共二十四页。间接法--PAP法间接法--ABC法直接法第十六页，共二十四页。(五)原位杂交术--核酸分子杂交组织化学技术原位杂交(insituhybridization)是一种敏感性高、特异性强的，能在组织细胞原位进行的核酸分子杂交技术。常用的标记物有两种：①放射性同位素，如3H、14C、32P、35S、125I；②为非放射性物质，如荧光素、生物素、地高辛等。非放射性原位杂交：海马GAP-43mRNA第十七页，共二十四页。(六)组织细胞定量技术1.显微分光光度术

应用显微分光光度计(microspectrophotometer)对组织和细胞内化学成分进行定量分析。2.形态计量术

运用数学和统计学原理对组织细胞内各种成分的数量、体积、表面积等的测量。目前多应用图像分析系统。3.流式细胞术

应用流式细胞仪进行细胞定量分析和细胞分类研究。第十八页，共二十四页。(七)放射自显影术(autoradiograph)旨在追踪某些物质在体内、组织或细胞中的分布与代谢径路。同位素注入→取材→制标本→涂感光材料(核乳胶)或贴照相底片→暗室曝光→显影、定影→染色→LM观察放射自显影

甲状腺125I第十九页，共二十四页。(八)细胞培养技术和组织工程技术组织工程技术基本方法示意图A.获取组织B.分离、培养种子细胞C.制备三维支架D.将种子细胞种植于支架E.将细胞-支架复合物植入组织缺损处细胞培养--神经干细胞培养第二十页，共二十四页。三、组织学的学习方法1.理论联系实际2.结构与功能的统一3.断面与立体的关系4.建立动态变化的概念5.善于总结，掌握规律

第二十一页，共二十四页。本单元学习要求1.掌握组织学的定义和研究内容。2.了解组织学与胚胎学常用研究方法。第二十二页，共二十四页。复习思考题1.组织学、胚胎学的定义和研究内容。2.组织学与胚胎学的基本研究方法有哪些？第二十三页，共二十四页。内容总结组织学与胚胎学

Hist