TFDSA 0049 2024 人源间充质干细胞外泌体制备与检验规范

准I Ⅲ 1 1 1 1 2 2 2 2 3 37.2数量、粒径、浓度 37.3标志蛋白 37.4蛋白含量 37.5颗粒蛋白比 37.6微生物 3 4 48.2放行检验 4 48.4复核检验 48.5判定规则 4 49.1包装 49.2标签 49.3储存 59.4运输 5 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14医药科技股份有限公司、青岛市妇女儿童医院、中科细胞工程（苏州）有限公司、时力生物1人源间充质干细胞外泌体制备与检验规范GB/T6682分析实验室用水规格和试验WS293艾滋病和艾滋病病毒感染诊断标准T/CSCB0001-2020干细胞T/CSCB0003-2020人间充3.1干细胞stemcell3.2人源间充质干细胞humanmesenchymalstemcell3.3外泌体exosome4缩略语HCMV——人巨细胞病毒（HumanCytomegaloviruHCV——丙型肝炎病毒（HepatitisCViruHEBV——人类疱疹病毒（HumanEpstein-BarrVHIV——人类免疫缺陷病毒（HumanImmunodeficiencyVirus）2HMSC——人源间充质干细胞（humanMesenchymalStemCell）HTLV——人类嗜T细胞病毒（HumanT-lymphotropicVirus）TP——梅毒螺旋体（TreponemaPallidGMP——药品生产质量管理规范（GoodManufacturingPracticeofMedicalProduc外泌体的制备应符合《药品生产质量管理规范》中的要求，在GMP标准的实验室进行，对所涉及的6.2关键质量属性Calnexin、histone3以及GM130任意两个真菌、细菌、支原体、HIV、HBV、HCV、HTLV、EBV、HCMV、TP、外源病37.1形态7.2数量、粒径、浓度按照纳米流式检测法、纳米颗粒跟踪分析仪或纳米库尔特粒度仪7.3标志蛋白7.4蛋白含量7.5颗粒蛋白比按照外泌体颗粒数浓度（particles/mL）与蛋白含量(μg/mL）的比值进行计算。7.6微生物按照《艾滋病和艾滋病病毒感染诊断》（WS293-2019按照《丙型病毒性肝炎诊断标准》（WS213-2008）核酸4按照《梅毒诊断标准》（WS273-200按照《中华人民共和国药典》通则“1143细菌内毒素检查8.2放行检验8.3留样8.4复核检验8.5判定规则9包装、储存和运输9.1.1直接与产品接触的包装材料，应选择低吸附、对外泌体关键质量9.2标签5）；9.3储存外泌体应在低于-80℃环境下储存，应避免反复冻9.4运输61234567B.3.5使用配备数码相机和图像分析软件的120kv冷冻电镜进8C.3.2使用200nm聚苯乙烯（PS）微球进行仪器校准，将仪器调整到最佳状C.3.5将过滤的（0.22μm）PBS作为背景信号进行分使用NFProfession软件计算待测9D.2.2200nm聚苯乙烯（PS）微球、纳米流式仪S16M-Exo粒径D.3.2使用200nm聚苯乙烯（PS）微球进行仪器校准，将仪器调整到最D.3.5将过滤的（0.22μm）PBS作为背景信号进行分析，颗粒数计数小于200的PBS才能作为空白对照使用NFProfession软件计算待测外泌体数量及粒径检测（电阻感应脉冲检测法库尔特F.3.2用磷酸盐缓冲液将浓度标准品稀释1000倍，按照仪器测试操作指南进行测试，采集标准微球颗软件上记录样本最终的稀释倍数，软件自动计算得到样本的原始粒径和通过软件Nanocoulter可以保存外泌体样本的测试报G.3.2.1按照蛋白定量试剂盒说明书配置B酶标仪测定562nm处标准品及待测样品的OD值，根据标准曲线计算出待测样品蛋H.3.5孵育一抗：封闭结束后，用1×TBST漂洗PVDF膜。使用1%BSA对一抗进行1:1000稀释，将PVDF[1]Minimalinformationforstudiesofextracellularvesicles2018(MISEV2018):apositioftheInternationalSocietyforExtracellularVesiclesa