超氧化物歧化酶sod的生产

超氧化物歧化酶sod的生产超氧化物歧化酶sod的生产第1页

超氧化物歧化酶sod的生产第2页一.SOD概况二.SOD利用三.SOD生产四.SOD活力测定超氧化物歧化酶sod的生产第3页一.SOD概况1.SOD概念超氧物歧化酶（SuperoxideDismutase简称SOD）是一个新型酶制剂。它在生物界分布极广，几乎从动物到植物，甚至从人到单细胞生物，都有它存在。SOD被视为生命科技中最具神奇魔力酶、人体内垃圾清道夫。SOD是氧自由基自然天敌，是机体内氧自由基头号杀手，是生命健康之本。全球118位科学家发表联合申明：自由基是百病之源，SOD是健康之本。体内SOD活性越高，寿命就越长。

超氧化物歧化酶sod的生产第4页2、SOD分类超氧化物歧化酶sod的生产第5页3、作用原理⑴基础原理

SOD属于金属蛋白酶，按照结合金属离子种类不一样，该酶有以下三种：含铜与锌超氧化物歧化酶（Cu-ZnSOD）、含锰超氧化物歧化酶（Mn-SOD）和含铁超氧化物歧化酶（Fe-SOD）。三种SOD都催化超氧化物阴离子自由基，将之歧化为过氧化氢与氧气。超氧化物歧化酶sod的生产第6页超氧化物歧化酶sod的生产第7页⑵人体内自由基在细胞因为自由基非常活泼，化学反应性极强，参加一系列连锁反应，能引发细胞生物膜上脂质过氧化，破坏了膜结构和功效。它能引发蛋白质变性和交联，使体内许多酶及激素失去生物活性，机体免疫能力、神经反射能力、运动能力等系统活力降低，同时还能破坏核酸结构和造成整个机体代谢失常等，最终使机体发生病变。超氧化物歧化酶sod的生产第8页4.SOD理化性质

3.1SOD对氰化物和H2O2敏感性

3.2SOD吸收光谱特征3.3SOD稳定性及影响原因超氧化物歧化酶sod的生产第9页5.SOD作用它催化超氧阴离子转化为H2O2和O2反应，即催化超氧阴离子自由基O2-·发生歧化反应，从而去除O2-·，2O2-·+2H+→H2O2+O2，在生命体自我保护系统中起着极为主要作用，在免疫系统中也有主要功，因而它能防御氧毒性，增强机体抗辐射损伤能力，防衰老。超氧化物歧化酶sod的生产第10页超氧化物歧化酶sod的生产第11页6、测定超氧化物歧化酶（SOD）催化底物是O2，普通多以一定时间内产物生成量或底物消耗量作为酶活性单位。因为O2本身很不稳定，且不易制备，测定SOD方法除少数采取直接法外，普通多为间接法。常见有：⑴邻苯三酚自氧化法⑵细胞色素C还原法（McCord法）⑶化学发光法⑷免疫学方法

⑸电泳法超氧化物歧化酶sod的生产第12页3.1SOD对氰化物和H2O2敏感性长时间用过氧化氢处理可使CuZn-SOD和Fe-SOD失活，而Mn-SOD不受影响超氧化物歧化酶sod的生产第13页3.2SOD吸收光谱特征CuZn-SOD含有独特紫外吸收光谱。因为色氨酸和酪氨酸含量较低，它在280nm处并没有最大吸收峰。CuZn-SOD可见光最大吸收波长都在680nm左右，这反应了酶分子中Cu2+光学特征。超氧化物歧化酶sod的生产第14页3.3SOD稳定性及影响原因PH、热、蛋白酶影响：SOD在pH5.3～9.6间催化性能良好，在pH4.5～pH11间能稳定存在。pH3.6时，CuZn-SOD中95%Zn要脱落，在pH12.2时，SOD构象会发生不可逆转变而使酶失活。

SOD对热稳定性与溶液中离子强度相关。当离子强度很低时,即使加热到95℃,其活性损失也极少其它原因：SOD活性受饮料色泽、成份、酸碱度、乙醇含量等各种原因影响，只有在无色、近中性、无乙醇饮料中SOD活性较稳定。另外还发觉有机溶剂和Cl对SOD活性具抑制作用超氧化物歧化酶sod的生产第15页二SOD利用1.药品SOD是一个新型抗炎症药，依据SOD作用机制和毒性试验，它对治疗因O2-·引发各种疾病都有一定疗效。为此，SOD可作为抗衰老、抗炎症、本身免疫疾病患者广泛应用医药品。另外，SOD对治疗贝切特氏症、心肌梗塞等血虚性心脏病、胶原病、新生儿呼吸困难综合症、防御放射性伤害等也可望有效。

超氧化物歧化酶sod的生产第16页二SOD利用2.添加剂国外不少高级化装品都添加SOD，我国也有数家工厂或企业在开发和生产SOD化装品，如大宝SOD密，康妮SOD、SOD康舒达霜剂等。SOD作为化装品添加剂主要有3个优点：（1）有显著防晒效果（2）可防皮肤衰老，阻止紫褐质（老年斑）形成（3）有显著抗炎效果，对防治皮肤病有一定效果。国外把SOD作为食品添加剂例子是加在口香糖和饮料中。我国贵州农学院已开发出刺梨SOD饮料。SOD及修饰过SOD还可作为外用药膏、眼药及牙膏等添加剂

超氧化物歧化酶sod的生产第17页二SOD利用3.生化试剂国外已经有数家企业如Sigma企业等出售SOD试剂，我国也有厂家批量生产SOD试剂，如中科院上海生化所东风试剂厂、南京建成生物工程研究所等。另外，SOD有可能作为一些疾病探针，如郭彦等人认为脑瘤组织线粒体Mn-SOD降低是转化细胞可靠生化指标之一，并可作为评定脑瘤分化程度参考。

总而言之，伴随大家对SOD更广泛深入研究，不一样类型SOD、SOD修饰物及人工有机合成SOD模拟酶将在医疗、保健、食品、农业增产等方面发挥出更大作用。

超氧化物歧化酶sod的生产第18页三.SOD生产

1.SOD酶提取称取5克大蒜蒜瓣，加入石英砂研磨破碎细胞后，加入pH7.8,0.05mol/L磷酸缓冲液（pH7.8）15ml，继续研磨20min,使SOD酶充分溶解到缓冲液中，然后6000r/min冰冻离心15min，放弃沉淀，取上清液。

2.去除杂蛋白上清液中加入0.25倍体积氯仿——乙醇混合液搅拌15min,6000r/min离心15min，放弃沉淀，得到上清液即是粗酶液

3.SOD酶沉淀分离粗酶液在搅拌下迟缓加入固体硫酸铵至饱和浓度60%，连续搅拌15min，6000r/min离心15min，得到SOD酶沉淀超氧化物歧化酶sod的生产第19页三.SOD生产4.将沉淀溶入pH7.8，0.05mol/L磷酸缓冲液5mL中，然后6000r/min离心15min，放弃沉淀，取上清液，用凝胶sephacylS-200进行纯化，然后超滤浓缩。5.用紫外分光光度计测定浓液蛋白含量6.将浓缩冷冻干燥后即得成品。超氧化物歧化酶sod的生产第20页四、超氧化物歧化酶（SOD）测定原理连苯三酚在碱性条件下，能快速自氧化，释放出O2-,生成带色中间产物。在自氧化过程初始阶段，黄色中间产物积累在滞后30-45s后就与时间展现性关系。中间产物在325nm处有强烈光吸收，在有SOD存在时能催化生成O2和H2O2，从而阻止了中间产物积累，经过计算就能够求出SOD活力。超氧化物歧化酶sod的生产第21页仪器紫外分光光度计、pH计,离心机超氧化物歧化酶sod的生产第22页试剂⑴0.05mol/L连苯三酚溶液：称取3.15g连苯三酚用0.01mol/L盐酸溶液溶解并定容至500ml⑵pH=8.3Tris-HCl缓冲溶液①0.1mol/L三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶液:NH2C(CH2OH)3121.14取12.114g,溶解，定容至100ml②0.1mol/L盐酸:取8.6(9)ml浓盐酸，稀释至1000ml③50毫升0.1mol/L三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶液19.9_毫升0.1mol/L盐酸混匀并稀释至100毫升。(保留温度:常温密封避光保留)超氧化物歧化酶sod的生产第23页测定步骤酶液制备称取6g样品，加于现在冰箱中放置缓冲液60ml(样品10倍，视情况定)，在冰浴中研磨成匀浆，四层纱布过滤，滤液经4000r/min离心20min,取上清液用于酶活测定。超氧化物歧化酶sod的生产第24页连苯三酚自氧化速率测定取4.5ml缓冲液，在25℃水浴中保温15min,加入10连苯三酚液，快速摇匀空白：取4.5ml缓冲液，在25℃水浴中保温15min,加入10缓冲液，快速摇匀倒入光径1cm比色杯中，在325nm波长下于恒温池中每隔30s测A值一次计算线形范围内，每1minA增值，此即连苯三酚自氧化速率，要求自氧化速率控制在0.07OD/min超氧化物歧化酶sod的生产第25页酶活测定测定方法与测连苯三酚自氧化速率相同，取1.5ml缓冲液，在25℃水浴中保温15min,加入3ml酶液，加入10连苯三酚液，快速摇匀空白：取1.5ml缓冲液，在25℃水浴中保温15min,加入3ml酶液，加入10缓冲液，快速摇匀计算加酶后连苯三酚自氧化速率超氧化物歧化酶sod的生产第26页结果计算样品酶活单位表示，SOD酶活单位（U）/g鲜重样品酶活单位=式中——酶样品在325nm处每分钟光密度改变值

V——反应液体积

n——酶液稀释倍数（若酶液足够多，可不稀释即n为1）超氧化物歧化酶sod的生产第27页五.SOD使用及生产时注意事项1.SOD安全性大量试验和临床应用表明，不论何种给药方式