pcr基因扩增专业知识讲座

pcr基因扩增专业知识讲座pcr基因扩增专业知识讲座第1页试验目标经过本试验学习PCR反应基础原理与试验技术。pcr基因扩增专业知识讲座第2页试验原理聚合酶链式反应(polymerasechainreaction,PCR)，是一个在体外快速扩增特定基因或DNA序列方法，故又称为基因体外扩增法。在待扩增DNA片断两侧和与其两侧互补两个寡核苷酸引物，经变性、退火和延伸若干个循环后，DNA扩增2n倍。pcr基因扩增专业知识讲座第3页PCR技术原理1.变性：在加热或碱性条件下可使DNA双螺旋氢键断裂，形成单链DNA，称之为变性。2.退火：是模板与引物复性。引物是与模板某区序列互补一小段DNA片段。3.延伸：从结合在特定DNA模板上引物为出发点，将四种脱氧核苷酸以碱基配对形式按5’→3’方向沿着模板次序合成新DNA链。pcr基因扩增专业知识讲座第4页(c)(b)引物25’3’3’3’5’5’(d)新引物5’3’靶DNA扩增(a)5’3’引物13’5’3’5’引物2互补链引物1互补链单位长度链不一样长度链5’3’3’5’引物1互补链引物2互补链目标片段（不一样长度链未示出）聚合酶链式反应示意图(e)(f)(g)pcr基因扩增专业知识讲座第5页pcr基因扩增专业知识讲座第6页pcr基因扩增专业知识讲座第7页pcr基因扩增专业知识讲座第8页pcr基因扩增专业知识讲座第9页pcr基因扩增专业知识讲座第10页温度（℃）时间（min）94726094℃变性（1min）60℃退火（1min）72℃延伸（1.5min）循环1循环2循环3PCR反应温度循环周期PCR反应每一个温度循环周期都是由DNA变性、引物退火和反应延伸三个步骤完成。图中设定反应参数是94℃变性1min，60℃退火1min，72℃延伸1.5min。如此周而复始，重复进行，直至扩增产物数量满足试验需求为止。pcr基因扩增专业知识讲座第11页普通PCR反应条件pcr基因扩增专业知识讲座第12页试验仪器电泳仪pcr基因扩增专业知识讲座第13页琼脂糖凝胶电泳槽pcr基因扩增专业知识讲座第14页PCR仪pcr基因扩增专业知识讲座第15页凝胶成像系统pcr基因扩增专业知识讲座第16页移液器pcr基因扩增专业知识讲座第17页试验材料1、DNA模板2、4种dNTP3、引物1、引物24、Taq酶5、琼脂糖6、DNA相对分子质量标准物7、吸头、50ulPCR管pcr基因扩增专业知识讲座第18页试剂10×PCR缓冲液(含Mg2＋)4×dNTP(每种1mmol)Tag酶1U/ulDNA模板引物1:5`-

GGGGAATTCATGGTGAGCAAGGGC-3`引物2:5`-GACCTGCAGGCATGCAAGCTTGGC-3`

引物溶液浓度10pmol/ulpcr基因扩增专业知识讲座第19页试验步骤1在0.5mlRCR管内配置20ul反应体系：

CK(ul)1#(ul)模板01引物10.40.4引物20.40.410×PCRBuffer22Taq酶0.50.5dNTPs0.40.4ddH2O14.315.3Total2020pcr基因扩增专业知识讲座第20页PCR反应程序(1)94℃变性5min，(2)94℃变性1min，

(3)52℃退火1min，

(4)72℃延伸1min。(5)重复(2)-(4)30次（6）72℃延伸1min。pcr基因扩增专业知识讲座第21页试验汇报要求：1、写出本试验目标、原理；2、试验器材及试验步骤；3、列出试验结果示意图并