抗生素类药物分析专业知识培训专家讲座

第十一章抗生素类药品分析抗生素类药物分析专业知识培训第1页

抗生素是指由微生物所产生、极微量即含有选择性地抑制或杀灭其它微生物一类有机化合物。一、抗生素药品特点

抗生素在低微浓度下即可对一些生物生命活动有特异抑制作用化学物质总称。第一节概述1.生物合成（发酵）2.化学合成或半合成细菌放线菌真菌

抗生素药品含有选择性地抑制或杀灭其它微生物作用药品。抗生素类药物分析专业知识培训第2页控制抗生素质量复杂性*分子结构多不稳定*发酵过程不易控制生产工艺复杂稳定性差发酵液中含有各种无机盐、脂肪、蛋白质、降解产物、色素、热原、毒性物质*发酵过程易受污染*易降解疗效↓

失效

毒副作用↑抗生素类药物分析专业知识培训第3页二、抗生素药品质量分析（一）判别试验1.理化法2.生物学法（1）化学法（2）仪器法抗生素类药物分析专业知识培训第4页例青霉素钠Ch.P（）【判别】（1）取本品与已知含量青霉素适量，分别加水制成每1ml中约含50mg溶液，各取1ml，加入不少于200单位青霉素酶溶液1ml,在37℃灭活1小时后，取灭菌滤纸片，分别用上述溶液浸湿后，用滤纸吸去多出液体，置摊布金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]培养基上。在37℃培养约16小时后均无抑菌作用，而用同一方法检验未经青霉素酶灭活溶液都有抑菌作用.抗生素类药物分析专业知识培训第5页（二）检验普通杂质、特殊杂质常增加“安全性检验”【检验】异常毒性热原细菌内毒素降压物质无菌抗生素类药物分析专业知识培训第6页例盐酸四环素Ch.P（）【检验】酸度溶液澄清度相关物质干燥失重杂质吸光度热原无菌抗生素类药物分析专业知识培训第7页（三）含量测定1.生物学方法以生物学方法或生化方法测定生理活性物质，并按效价单位（IU）计算测定方法抗生素微生物检定法抗生素类药物分析专业知识培训第8页抗生素微生物检定法以抗生素抑制微生物生长或杀死微生物能力作为衡量效价标准Ch.P→管碟琼脂扩散法比浊法USP抗生素类药物分析专业知识培训第9页例磺苄西林钠Ch.P（）【含量测定】精密称取本品适量，用灭菌水制成每1ml中约含1000单位溶液，照抗生素微生物检定法（附录ⅪA）测定。1000磺苄西林单位相当于1mgC16H18N2O7S2。抗生素类药物分析专业知识培训第10页例抗生素【含量测定】Ch.P（）

抗生素微生物检定法（附录ⅪA）

红霉素、两性霉素B、杆菌肽、硫酸多黏菌素B、硫酸庆大霉素、硫酸阿米卡星、硫酸卷曲霉素、硫酸核糖霉素、硫酸链霉素、磺苄西林钠原料及制剂抗生素类药物分析专业知识培训第11页微生物检定法优点

*与临床效果一致

*灵敏度高

*干扰物质少

*可用于未知药品缺点

*操作繁琐

*耗时

*准确度、精密度差抗生素类药物分析专业知识培训第12页以理化方法测定主药含量，按有效物质质量计算测定方法优点*准确度高*简便快速缺点*不一定代表生物效价*易受杂质干扰*仅用于己知药品2.理化方法抗生素类药物分析专业知识培训第13页Ch.P（）【含量测定】青霉素类滴定法UVHPLC法微生物检定法头孢菌素类HPLC法汞量法碘量法抗生素类药物分析专业知识培训第14页细菌

枯草菌真菌

青霉素类、头孢类、

灰黄霉素放线菌

链霉素1.按产生菌分类三、抗生素分类广谱

青霉素、头孢类G+

红霉素（金葡菌）

G-

卡那霉素、庆大霉素绿脓杆菌

阿莫西林2.按抗菌谱分类3.按作用机制分类抑制转肽酶交联方式

青霉素抑制蛋白质合成过程

红霉素影响细胞膜通透性

多粘菌素4.按化学结构和性质分类β-内酰胺类多烯大环类氨基糖苷类多肽类四环素类苯烃胺类大环内酯类蒽环类等

抗生素类药物分析专业知识培训第15页第二节

-内酰胺类抗生素青霉素类青霉素钠（钾）氨苄西林（钠）阿莫西林（钠）普鲁卡因青霉素头孢菌素类头孢氨苄头孢羟氨苄头孢拉啶头孢噻吩钠抗生素类药物分析专业知识培训第16页青霉素类头孢菌素类一、结构与性质（一）结构氢化噻唑环氢化噻嗪环

-内酰胺环抗生素类药物分析专业知识培训第17页青霉素类头孢菌素类123456712346578抗生素类药物分析专业知识培训第18页青霉素类母核6-氨基青霉烷酸（6-APA）

-内酰胺环酰胺侧链酸性手性C抗生素类药物分析专业知识培训第19页青霉素G（苄青霉素）青霉素钾KNa

青霉素钠抗生素类药物分析专业知识培训第20页青霉素钾（lidocainehydrochloride）青霉素钠（Benzylpenicillinsodium）抗生素类药物分析专业知识培训第21页氨苄西林（氨苄青霉素）（ampicillin）抗生素类药物分析专业知识培训第22页阿莫西林（羟氨苄青霉素）（amoxicillin）抗生素类药物分析专业知识培训第23页·普鲁卡因青霉素（procainebenzylpenicillin）·抗生素类药物分析专业知识培训第24页磺苄西林钠（sulbenicillinsodium）S抗生素类药物分析专业知识培训第25页头孢菌素类母核7-氨基头孢烷酸（7-ACA）酰胺侧链

-内酰胺环酸性手性C抗生素类药物分析专业知识培训第26页头孢氨苄（cefalexin）抗生素类药物分析专业知识培训第27页头孢羟氨苄（cefadroxil）抗生素类药物分析专业知识培训第28页头孢拉定（cefradine）抗生素类药物分析专业知识培训第29页头孢噻吩钠（cefalotin）抗生素类药物分析专业知识培训第30页（二）性质*与碱金属成盐易溶于水pKa=2.5～2.81.酸性羧基*与有机碱成盐难溶于水抗生素类药物分析专业知识培训第31页难溶于水易溶于有机溶剂青霉素易溶于水难溶于有机溶剂K+青霉素钾青霉素钠溶解性抗生素类药物分析专业知识培训第32页2.旋光性（5%头孢唑啉钠溶液–18～–24°）手性C抗生素类药物分析专业知识培训第33页3.UV共轭体系抗生素类药物分析专业知识培训第34页抗生素类药物分析专业知识培训第35页4.不稳定性水溶液不稳定、易开环失效干燥纯净较稳定

-内酰胺环四元环张力大酰胺键易水解不稳定性原因抗生素类药物分析专业知识培训第36页温度↑氧化剂（头孢噻吩钠水溶液25℃24h失活8%）（青霉素钠水溶液30℃24h失活56%）Cu2+、Pb2+、Hg2+、Ag+抗生素类药物分析专业知识培训第37页青霉素降解反应青霉烯酸pH4pH2脱羧青霉噻唑酸H+△-CO2青霉素青霉噻唑酸OHˉHgCl2HgCl2△青霉二酸H+or醇青霉胺orHgCl2H+青霉醛＋H+△抗生素类药物分析专业知识培训第38页不一样pH条件下青霉素钠降解情况24℃0.41.4129233621812531.29.31.4半衰期(h)234567891011pH抗生素类药物分析专业知识培训第39页温度对青霉素钠稳定性影响pH2，30′温度℃52637↓%67797抗生素类药物分析专业知识培训第40页二、判别试验（一）呈色反应1.羟肟酸铁反应内酰胺OH-红、棕、褐色Fe3+/3H+抗生素类药物分析专业知识培训第41页OH-Fe3+/3H+红、棕、褐抗生素类药物分析专业知识培训第42页例磺苄西林钠Ch.P（）【判别】（1）取本品约20mg，加水15ml溶解后，加盐酸羟胺试液与氢氧化钠试液各2ml，放置5分钟后，加盐酸溶液（1→100）3ml与三氯化铁试液1ml，随即振摇，即显赤褐色。抗生素类药物分析专业知识培训第43页例头孢哌酮Ch.P（）【判别】（1）取本品约10mg，加水2ml与盐酸羟胺溶液[取34.8%盐酸羟胺1份，醋酸钠-氢氧化钠溶液（取醋酸钠10.3g与氢氧化钠86.5g，加水溶解使成1000ml）1份，乙醇4份，混匀]3ml，振摇溶解后，放置5分钟，加酸性硫酸铁铵试液1ml,摇匀，显红棕色。抗生素类药物分析专业知识培训第44页2.类似肽键反应双缩脲反应紫色开环，[H]抗生素类药物分析专业知识培训第45页例阿莫西林Ch.P（1995）【判别】（2）取本品约10mg，加水6ml溶解后，加碱性酒石酸铜试液0.5ml，即显紫色。例氨苄西林钠Ch.P（1995）【判别】（1）取本品约10mg，加水6ml溶解后，加碱性酒石酸铜试液0.5ml，即显紫色。抗生素类药物分析专业知识培训第46页茚三酮反应△蓝紫色抗生素类药物分析专业知识培训第47页例阿莫西林Ch.P（）【判别】（4）TLC法对照品法

显色剂0.3%茚三酮-乙醇溶液（90℃加热15分钟）抗生素类药物分析专业知识培训第48页3.其它呈色反应*与重氮苯磺酸盐反应*与变色酸-硫酸反应*H2SO4-HNO3反应*与铜盐反应抗生素类药物分析专业知识培训第49页1.K+、Na+火焰反应附录ⅢK+火焰→紫色+0.1%四苯硼钠+HAc→↓白（二）各种盐反应Na+火焰→鲜黄色+醋酸氧铀锌→↓抗生素类药物分析专业知识培训第50页例青霉素钠Ch.P（）【判别】（4）本品显钠盐火焰反应（附录Ⅲ）。例青霉素钾Ch.P（）【判别】（3）本品显钾盐火焰反应（附录Ⅲ）。抗生素类药物分析专业知识培训第51页2.重氮化-偶合反应芳香第一胺类反应普鲁卡因青霉素重氮化红色↓碱性β-萘酚（偶合）抗生素类药物分析专业知识培训第52页例普鲁卡因青霉素Ch.P（）【判别】（3）本品显芳香第一胺类判别反应（附录Ⅲ）。抗生素类药物分析专业知识培训第53页3.沉淀反应碱金属盐溶于过量HCl或有机溶剂抗生素类药物分析专业知识培训第54页例青霉素钠青霉素钾Ch.P（）【判别】（2）取本品约0.1g，加水5ml溶解后，加稀盐酸2滴，即生成白色沉淀；此沉淀能在乙醇、醋酸戊酯、氯仿、乙醚或过量盐酸中溶解.抗生素类药物分析专业知识培训第55页（三）光谱法1.IR法

β-内酰胺环上羰基伸缩振动增强而向高波数方向位移抗生素类药物分析专业知识培训第56页例青霉素钠Ch.P（）【判别】（2）本品红外光吸收图谱应与对照图谱（光谱集222图）一致。例青霉素钾Ch.P（）【判别】（2）本品红外光吸收图谱应与对照图谱（光谱集223图）一致。抗生素类药物分析专业知识培训第57页2.UV-Vis法样品或分解产物抗生素类药物分析专业知识培训第58页青霉素V钾268、2741.20~1.25头孢唑林钠272264~292头孢氨苄262220~245头孢噻肟钠262400~440抗生素类药物分析专业知识培训第59页Cu2+pH3.8△△Cu2+抗生素类药物分析专业知识培训第60页（四）色谱法1.TLC法2.HPLC法对照品法比较Rf和斑点颜色比较tR抗生素类药物分析专业知识培训第61页例头孢拉定Ch.P（）【判别】（1）取本品与头孢拉定对照品适量,分别加水溶解并稀释制成每1ml中约含6mg溶液.作为供试品溶液和对照品溶液，照薄层色谱法（附录ⅤB）试验，吸收上述两种溶液各5

l，分别点于同一硅胶G薄层板上，以0.1mol/L枸橼酸溶液-0.2mol/L磷酸氢二钠溶液-丙酮（60:40:1.5）为展开剂，展开，于105℃加热15分钟后，检视，供试品溶液所显主斑点颜色与位置应与对照品溶液所显主斑点颜色与位置相同。抗生素类药物分析专业知识培训第62页例头孢拉定Ch.P（）【判别】（2）在含量测定项下统计色谱图中，供试品溶液主峰保留时间应与对照品溶液主峰保留时间一致。抗生素类药物分析专业知识培训第63页例

头孢氨苄Ch.P（）【判别】（1）在含量测定项下统计色谱图中，供试品溶液主峰保留时间应与对照品溶液主峰保留时间一致。

（2）本品红外光吸收图谱应与对照图谱（光谱集1090图）一致。

抗生素类药物分析专业知识培训第64页（五）微生物检定法例青霉素钠Ch.P（）【判别】（1）取本品与已知含量青霉素适量，分别加水制成每1ml中约含50

g溶液，各取1ml，加入不少于200单位青霉素酶溶液1ml，在37℃灭活1小时后，取灭菌滤纸片，分别用上述溶液浸湿后，用滤纸吸去多余液体，置摊布金色黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]培养基上，在37℃培养约16小时后均无抑菌作用，而用同一方法检验未经青霉素酶灭活溶液都有抑菌作用。对照品对照法抗生素类药物分析专业知识培训第65页三、特殊杂质检验*高分子聚合物*吸光度杂质*相关物质*异构体抗生素类药物分析专业知识培训第66页例青霉素钠【检验】青霉素聚合物例青霉素钾【检验】青霉素聚合物例阿莫西林【检验】阿莫西林聚合物（青霉噻唑蛋白+青霉素、青霉噻唑多肽类）例头孢他啶【检验】头孢他啶聚合物例头孢曲松钠【检验】头孢曲松聚合物例头孢哌酮钠【检验】头孢哌酮聚合物抗生素类药物分析专业知识培训第67页例青霉素钠Ch.P（）【检验】青霉素聚合物照分子排阻色谱法（附录ⅤH）测定。填充剂葡聚糖凝胶G-10（40~120µm）流动相A0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.0）[0.1mol/LNa2HPO4-0.1mol/LNaH2PO4(61:39)]

流动相B水

流速1.5ml/min检测波长254nm抗生素类药物分析专业知识培训第68页例头孢他啶Ch.P（）【检验】头孢他啶聚合物照分子排阻色谱法（附录ⅤH）测定。填充剂葡聚糖凝胶G-10（40~120µm）

流动相A含3.5%硫酸铵0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.0)[0.1mol/LNa2HPO4-0.1mol/LNaH2PO4(61:39)]

流动相B水

流速0.8ml/min检测波长254nm抗生素类药物分析专业知识培训第69页例头孢呋辛酯中异构体检验抗生素类药物分析专业知识培训第70页例头孢氨苄中“相关物质”检验α-苯甘氨酸（对照品法）≤1%7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸(对照品法)≤1%其它杂质（高低浓度对比法）≤1%抗生素类药物分析专业知识培训第71页例青霉素钠Ch.P（）

【检验】吸光度取本品，加水制成每1ml中含1.80mg溶液，照紫外-可见分光光度法（附录ⅣA），在280nm波优点测定吸光度，不得大于0.10；在264nm波优点有最大吸收，吸光度应为0.80~0.88。抗生素类药物分析专业知识培训第72页*β－内酰胺类不直接与碘反应*β－内酰胺类水解产物可与碘发生定量反应1.原理（一）碘量法（剩下碘量法）四、含量测定抗生素类药物分析专业知识培训第73页例注射用普鲁卡因青霉素Ch.P（）【含量测定】取装量差异项下内容物，精密称取约0.12g，置100ml量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置碘瓶中，加1mol/L氢氧化钠溶液1ml放置20分钟，再加1mol/L盐酸溶液1ml与醋酸-醋酸钠缓冲液（pH4.5）5ml,精密加入碘滴定液（0.01mol/L）15ml，密塞，摇匀，在20~25℃暗处放置20分钟，用硫代硫酸钠滴定液（0.01mol/L）滴定，抗生素类药物分析专业知识培训第74页近终点时加淀粉指示液，继续滴定并强力振摇，至蓝色消失；另精密量取供试品溶液5ml，置碘瓶中，加醋酸-醋酸钠缓冲液（pH4.5）5ml，精密加入碘滴定液（0.01mol/L）15ml，密塞，摇匀，在暗处放置20分钟，用硫代硫酸钠滴定液（0.01mol/L）滴定，作为空白。同时用青霉素钠对照品同法测定作对照，算出供试品含量。抗生素类药物分析专业知识培训第75页2.讨论酸↑

*Na2S2O3→SO2+S↓（1）弱酸性环境pH4.5*普鲁卡因与碘在酸性条件下会产生复盐↓碱↑抗生素类药物分析专业知识培训第76页（2）温度24~26℃温度↑

未水解供试品亦消耗碘（3）氧气干扰碘瓶抗生素类药物分析专业知识培训第77页（4）反应时间*长时间放置使空气氧化作用加强20′*反应20′后，耗碘量随时间改变较小，可减小测定误差。抗生素类药物分析专业知识培训第78页（5）空白试验A.消除样品已降解产物干扰B.消除样品中其它消耗碘杂质干扰C.消除碘挥发造成误差以未经水解样品作空白测定抗生素类药物分析专业知识培训第79页（6）采取对照品平行测定A.可消除温度、pH、操作、环境等条件影响B.使本法测定结果与微生物检定法一致抗生素类药物分析专业知识培训第80页例注射用普鲁卡因青霉素Ch.P（）【含量测定】取装量差异项下内容物，精密称取约0.12g，置100ml量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置碘瓶中，加1mol/L氢氧化钠溶液1ml放置20分钟，再加1mol/L盐酸溶液1ml与醋酸-醋酸钠缓冲液（pH4.5）5ml,精密加入碘滴定液（0.01mol/L）15ml，密塞，摇匀，在20~25℃暗处放置20分钟，用硫代硫酸钠滴定液（0.01mol/L）滴定，抗生素类药物分析专业知识培训第81页近终点时加淀粉指示液，继续滴定并强力振摇，至蓝色消失；另精密量取供试品溶液5ml，置碘瓶中，加醋酸-醋酸钠缓冲液（pH4.5）5ml，精密加入碘滴定液（0.01mol/L）15ml，密塞，摇匀，在暗处放置20分钟，用硫代硫酸钠滴定液（0.01mol/L）滴定，作为空白。同时用青霉素钠对照品同法测定作对照，算出供试品含量。抗生素类药物分析专业知识培训第82页（二）电位配位滴定法——汞量法*β－内酰胺类不直接与汞盐反应*β－内酰胺类水解产物可与汞盐发生定量反应1.原理抗生素类药物分析专业知识培训第83页水解水解青霉胺络汞Ch.P（）青霉素钾青霉素钠苯唑西林钠普鲁卡因青霉素氯唑西林钠抗生素类药物分析专业知识培训第84页NaOHpH4.6脱羧Hg(NO3)2pH4.62:1突跃11:1突跃2Hg(NO3)2pH4.6青霉胺络汞抗生素类药物分析专业知识培训第85页青霉胺与硝酸汞发生络合反应。先按2分子青霉胺与1分子汞离子百分比络合，发生第一次滴定突跃，但突跃范围很小，改变比较平缓，不宜用于做终点，继续用硝酸汞滴定时，青霉胺分子与汞离子按1:1百分比络合，生成稳定络合物——青霉胺络汞，发生第二次滴定突跃。其突跃范围较大，改变较急剧，宜于确定终点。抗生素类药物分析专业知识培训第86页2.方法醋酸盐缓冲液滴定水解pH4.6pH4.6滴定抗生素类药物分析专业知识培训第87页3.讨论（1）电位法指示终点，以第二次滴定突跃为终点反应摩尔比1:1

（2）空白试验

用未降解样品测定（3）优点

不需标准品抗生素类药物分析专业知识培训第88页例青霉素钠Ch.P（）【含量测定】取本品约50mg，精密称定，加水5ml溶解后，加1mol/L氢氧化钠溶液5ml，摇匀,放置15分钟，加1mol/L硝酸溶液5ml，醋酸盐缓冲液（pH4.6）20ml及水20ml，摇匀，照电位滴定法（附录ⅦA）,用铂电极为指示电极，汞-硫酸亚汞电极为参比电极，在35~40℃，用硝酸汞滴定液（0.02mol/L）迟缓滴定，（控制滴定过程约为15分钟），不计第一个等当点，计算第二个等当点时消耗滴定液量。抗生素类药物分析专业知识培训第89页每1ml硝酸汞滴定液（0.02mol/L）相当于7.128mg总青霉素（按C16H17N2NaO4S计算）。另取本品约0.5g，精密称定，加水与上述醋酸盐缓冲液各25ml，振摇使完全溶解，在室温下,马上用硝酸汞滴定液（0.02mol/L）滴定，滴定终点判断方法同上。每1ml硝酸汞滴定液（0.02mol/L）相当于7.128mg降解物（按C16H17N2NaO4S计算）。每1mgC16H17N2NaO4S相当于1670青霉素单位。抗生素类药物分析专业知识培训第90页1.硫醇汞盐法

降解，咪唑（1）原理催化剂青霉素族（三）紫外-分光光度法抗生素类药物分析专业知识培训第91页咪唑（降解）抗生素类药物分析专业知识培训第92页2.讨论（1）咪唑催化降解率高，且硫醇汞盐稳定（≥3h）

（2）侧链有-NH2时，需加醋酐先将其乙酰化后才能发生上述反应抗生素类药物分析专业知识培训第93页pH9咪唑抗生素类药物分析专业知识培训第94页例青霉素V钾片Ch.P（）【含量测定】取本品10片（如为糖衣片则除去糖衣）,精密称定，研细，精密称取适量（约相当于青霉素V0.15g）置250ml量瓶中，加水150ml，振摇使溶解，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，再精密量取5ml，置25ml量瓶中，加咪唑溶液至刻度，摇匀，置60℃水浴中加热30分钟，取出放冷至室温，照分光光度法（附录ⅣA）,在325nm波优点测定吸收度；另取青霉素V对照品，同法测定，计算。抗生素类药物分析专业知识培训第95页青霉素V钾

C16H17N2O5SK

388.48576青霉素V

C16H18N2O5S

350.39964抗生素类药物分析专业知识培训第96页水解2.酸水解-铜盐法JP青霉素族螯合物（不稳定）λmax320~360nm（稳定剂）抗生素类药物分析专业知识培训第97页3.羟肟酸比色法USPJPβ-内酰胺类NaOH红棕色H+抗生素类药物分析专业知识培训第98页（四）RP-HPLC法特点快速高效灵敏度高专属性强重现性好一法多用(判别、检验、含测)Ch.P抗生素类药物分析专业知识培训第99页例头孢克洛Ch.P（）

【含量测定】

填充剂C18

流动相磷酸二氢钾溶液（pH3.4）-乙腈（92:8）

检测波长254nm

对照品头孢克洛、头孢克洛δ-3-异构体（二者分离度应大于1.5）抗生素类药物分析专业知识培训第100页例头孢他啶【判别】【检验】头孢他啶聚合物【含量测定】托西酸舒他西林【判别】【检验】相关物质【含量测定】阿莫西林【判别】【检验】相关物质、阿莫西林聚合物【含量测定】抗生素类药物分析专业知识培训第101页（五）生物样品中β-内酰胺类抗生素分析色谱法，微生物法，放射免疫法抗生素类药物分析专业知识培训第102页例HPLC法测定人血浆中阿莫西林

填充剂YWGC18

流动相0.033mol/L磷酸缓冲液（pH7.2）-甲醇（85:15）检测波长229nm

对照品阿莫西林内标替硝唑除蛋白HClO4抗生素类药物分析专业知识培训第103页抗生素类药物分析专业知识培训第104页第三节氨基糖苷类抗生素一、结构与性质（一）结构碱性环己多元醇抗生素类药物分析专业知识培训第105页链霉素（streptomycin）链霉胍链霉糖N-甲基葡萄糖胺（氨基糖）链霉双糖胺抗生素类药物分析专业知识培训第106页巴龙霉素（paromomycin）脱氧链霉胺D-核糖D-葡萄糖胺（氨基糖）巴龙霉糖（氨基糖）巴龙胺巴龙二糖胺抗生素类药物分析专业知识培训第107页庆大霉素（gentamycin）（C复合物）（氨基糖）绛红糖胺（氨基糖）加洛糖胺脱氧链霉胺抗生素类药物分析专业知识培训第108页庆大霉素C复合物

庆大霉素C1

R1、R2=CH3R3=H

庆大霉素C2

R1=CH3R2=R3=H

庆大霉素C1a

R1、R2、R3=H

庆大霉素C2a

R1=R2=HR3=CH3抗生素类药物分析专业知识培训第109页奈替米星（netilmicin）脱氧链霉胺（氨基糖）绛红糖胺（氨基糖）加洛糖胺抗生素类药物分析专业知识培训第110页2.性质（1）溶解性与碱性溶解性

-OH水溶性碱性

-NH2可与酸成盐临床上多用硫酸盐抗生素类药物分析专业知识培训第111页巴龙霉素链霉素抗生素类药物分析专业知识培训第112页庆大霉素奈替米星抗生素类药物分析专业知识培训第113页（2）旋光性手性C硫酸庆大霉素硫酸巴龙霉素硫酸卡那霉素50mg/ml水溶液抗生素类药物分析专业知识培训第114页（3）稳定性链霉素pH5~7.5稳定OH-N-甲基葡萄糖胺链霉糖OH-麦芽酚反应坂口反应反应抗生素类药物分析专业知识培训第115页坂口反应麦芽酚反应N-甲基葡萄糖胺反应抗生素类药物分析专业知识培训第116页（4）UV链霉素λmax=230nm抗生素类药物分析专业知识培训第117页（一）茚三酮反应α-氨基醇、羟基胺类△蓝紫色二、判别试验抗生素类药物分析专业知识培训第118页水合茚三酮α-氨基、伯胺一些羟基胺类酮式烯醇式+缩合抗生素类药物分析专业知识培训第119页例硫酸庆大霉素Ch.P（）【判别】（1）取本品约5mg，加水溶解后，加0.1%茚三酮水饱和正丁醇溶液1ml与吡啶0.5ml，在水浴中加热5分钟，即显紫蓝色。例硫酸小诺霉素Ch.P（）【判别】（1）取本品约5mg，加水溶解后，加0.1%茚三酮水饱和正丁醇溶液1ml与吡啶0.5ml，在水浴中加热5分钟，即显蓝紫色。抗生素类药物分析专业知识培训第120页（二）Molisch反应水解或蒽酮抗生素类药物分析专业知识培训第121页例硫酸卡那霉素Ch.P（）【判别】（1）取本品约1mg，加水2ml溶解后，加0.2%蒽酮硫酸溶液4ml，在水浴中加热15分钟，冷却，即显蓝紫色。例硫酸核糖霉素Ch.P（）【判别】（1）取本品约10mg，加水2ml溶解后，加0.1%蒽酮硫酸溶液3ml，即显蓝至蓝绿色。抗生素类药物分析专业知识培训第122页（三）N-甲基葡萄糖胺反应对二甲氨基苯甲醛H+樱桃红色（Elson-Morgan反应）乙酰丙酮OH-吡咯衍生物水解链霉素庆大霉素奈替米星抗生素类药物分析专业知识培训第123页N-甲基葡萄糖胺反应对二甲氨基苯甲醛H+OH-(缩合)乙酰丙酮抗生素类药物分析专业知识培训第124页例硫酸新霉素Ch.P（）【判别】（1）取本品约10mg，加水1ml溶解后，加盐酸溶液（9→100）2ml，在水浴中加热10分钟，加8%氢氧化钠溶液2ml与2%乙酰丙酮水溶液1ml，置水浴中加热5分钟，冷却后，加对二甲氨基苯甲醛试液1ml，即显樱桃红色。抗生素类药物分析专业知识培训第125页（四）麦芽酚反应链霉糖特征反应△H+紫红色（Maltol反应）抗生素类药物分析专业知识培训第126页麦芽酚反应H+

Fe3+分子重排麦芽酚抗生素类药物分析专业知识培训第127页例硫酸链霉素Ch.P（）【判别】（2）取本品约20mg，加水5ml溶解后，加氢氧化钠试液0.3ml，置水浴上加热5分钟,加硫酸铁铵溶液（取硫酸铁铵0.1g，加0.5mol/L硫酸溶液5ml使溶解）0.5ml，即显紫红色。抗生素类药物分析专业知识培训第128页（五）坂口反应链霉胍特征反应水解（Sakaguchi反应）橙红色次溴酸钠8-羟基喹啉（或α-萘酚）抗生素类药物分析专业知识培训第129页坂口反应+OH-抗生素类药物分析专业知识培训第130页例硫酸链霉素Ch.P（）【判别】（1）取本品约0.5mg，加水4ml溶解后，加氢氧化钠试液2.5ml与0.1%8-羟基喹啉乙醇溶液1ml，放冷至约15℃，加次溴酸钠试液3滴,即显橙红色。抗生素类药物分析专业知识培训第131页（六）反应例【判别】显硫酸盐判别反应Ch.P（）

硫酸新霉素硫酸链霉素硫酸核糖霉素硫酸依替米星硫酸奈替米星硫酸阿米卡星硫酸庆大霉素硫酸西索米星硫酸卡那霉素硫酸巴龙霉素硫酸小诺霉素抗生素类药物分析专业知识培训第132页（七）色谱法TLC，HPLC法例【判别】HPLC法Ch.P（）

硫酸依替米星硫酸卡那霉素硫酸小诺霉素硫酸奈替米星硫酸阿米卡星硫酸庆大霉素硫酸西索米星硫酸巴龙霉素妥布霉素抗生素类药物分析专业知识培训第133页例硫酸小诺霉素Ch.P（）

【判别】（3）HPLC法【检验】小诺霉素组分HPLC法例硫酸依替米星Ch.P（）

【判别】（2）HPLC法【含量测定】HPLC法例硫酸卡那霉素Ch.P（）

【判别】（2）HPLC法【含量测定】HPLC法抗生素类药物分析专业知识培训第134页例【判别】TLC法Ch.P（）

硫酸依替米星硫酸奈替米星硫酸阿米卡星硫酸庆大霉素硫酸西索米星硫酸巴龙霉素硫酸小诺霉素妥布霉素抗生素类药物分析专业知识培训第135页（八）光谱法IR法例【判别】红外光吸收图谱Ch.P（）

盐酸大观霉素（光谱集1007图）

硫酸新霉素（光谱集492图）硫酸链霉素（光谱集491图）硫酸阿米卡星（光谱集1079图）硫酸庆大霉素（光谱集485图）硫酸卡那霉素（光谱集484图）硫酸巴龙霉素（光谱集483图）抗生素类药物分析专业知识培训第136页三、特殊杂质检验及组分分析（一）链霉素中链霉素B检验（甘露糖链霉素）3.方法TLC1.起源发酵时菌种产生2.效价链霉素20~25%（甘露糖对照品法）抗生素类药物分析专业知识培训第137页例硫酸链霉素Ch.P（）【检验】链霉素B取本品0.25mg，精密称定，置回流瓶中，加入5ml新鲜配置硫酸-甲醇溶液（3:97）溶解，加热回流1小时,冷却，用甲醇冲洗冷凝管，合并冲洗液，并用甲醇定量稀释成每1ml中含10mg溶液，作为供试品溶液。精密称取甘露糖对照品约36mg，置回流瓶中，同法处理后定量制成每1ml中含72µg溶液，作为对照溶液。取上述两种溶液各10µl，分别点于同一硅胶G薄层板上以甲苯-醋酸-甲醇（50:25:25）为展开剂，展开，晾干，喷以新鲜配制显色剂（取0.2%1,3-萘二酚乙醇溶液与20%硫酸溶液等等体积混合，即得），在110℃加热数分钟显色，供试品溶液所显链霉素B斑点颜色与对照溶液主斑点比较，不得更深（3.0%）。抗生素类药物分析专业知识培训第138页（二）硫酸奈替米星中相关物质检验（西索米星及其它未知杂质）3.显色剂茚三酮1.起源原料引入2.标准品溶液（1）1.5mg/ml奈替米星标准品（2）3mg/ml奈替米星标准品（3）西索米星标准品≤1%≤1%≤2%抗生素类药物分析专业知识培训第139页庆大霉素C1、C2、C1a*对微生物活性无显著差异*毒副作用和耐药性不一样发酵菌种不一样工艺差异C组分百分比不一致要求各组分相对百分含量Ch.P、BPUSP、JPHPLC法（三）庆大霉素C组分测定抗生素类药物分析专业知识培训第140页庆大霉素本身无紫外吸收，可衍生化λmax=330nmpH10.4巯基醋酸抗生素类药物分析专业知识培训第141页++1-烷基硫代-2-烷基异吲哚衍生物抗生素类药物分析专业知识培训第142页例硫酸庆大霉素Ch.P（）【检验】庆大霉素C组分照高效液相色谱法（附录ⅤD）测定。

填充剂十八烷基硅烷键合硅胶

流动相0.2mol/L三氟醋酸-甲醇（92:8）

检测器蒸发光检测器检测波长330nm标准品庆大霉素、小诺霉素抗生素类药物分析专业知识培训第143页测定法取小诺霉素标准品适量，精密称定，分别用流动相制成每1ml中约含小诺霉素0.2mg、0.5mg和1.0mg溶液作为标准溶液(1)、(2)、(3)。取上述三种溶液各20ml,分别注入液相色谱仪，统计色谱图，计算标准品溶液浓度对数值与对应主峰面积对数值回归方程，相关系数（r）应大于0.99；另取本品适量，精密称定，用流动相制成每1ml中约含庆大霉素2.5mg溶液，同法测定，用回归方程计算供试品中对应各组分量（XCx），并依据所得各组分量（XCx）按下面公式计算出各组分含量。抗生素类药物分析专业知识培训第144页Ch.P（）要求C125~50%C1a15~40%C2a+C220~50%抗生素类药物分析专业知识培训第145页（四）硫酸盐测定剩下滴定法空白滴定抗生素类药物分析专业知识培训第146页例硫酸奈替米星Ch.P（）【检验】硫酸盐取本品约0.12g，精密称定，加水100ml使溶解，用浓氨溶液调整pH值至11后，精密加氯化钡滴定液（0.1mol/L）10ml、酞紫指示液5滴，用乙二胺四醋酸二钠滴定液（0.05mol/L）滴定，注意保持滴定过程中pH值为11，滴定至紫色开始消褪，加入乙醇50ml，继续滴定，至蓝紫色消失，并将滴定结果用空白试验校正。每1ml氯化钡滴定液（0.1mol/L）相当于9.606mg硫酸盐（SO4），本品含硫酸盐量按无水物计算应为31.5%~35.0%。抗生素类药物分析专业知识培训第147页微生物检定法四、含量测定微生物检定法，HPLC法例硫酸链霉素Ch.P（）

【含量测定】精密称取本品适量，加灭菌水定量制成每1ml中约含1000单位溶液，照抗生素微生物检定法（附录ⅪA）测定，1000链霉素单位相当于1mgC21H38N7O12。抗生素类药物分析专业知识培训第148页例硫酸庆大霉素Ch.P（）【含量测定】精密称取本品适量，加灭菌水定量制成每1ml中含1000单位溶液，照抗生素微生物检定法（附录ⅪA）测定，可信限率不得大于7%。1000庆大霉素单位相当于1mg庆大霉素.抗生素类药物分析专业知识培训第149页例【含量测定】

Ch.P（）

微生物检定法

盐酸大观霉素，硫酸新霉素，硫酸链霉素，硫酸核糖霉素，硫酸奈替米星，硫酸阿米卡星，硫酸庆大霉素，硫酸西索米星，硫酸巴龙霉素，硫酸小诺霉素HPLC法

硫酸依替米星，硫酸卡那霉素抗生素类药物分析专业知识培训第150页第四节四环素类抗生素一、化学结构与性质（一）结构ABCD抗生素类药物分析专业知识培训第151页碳原子编号123456789101112抗生素类药物分析专业知识培训第152页四环素（TC）

（tetracycline）抗生素类药物分析专业知识培训第153页金霉素（CTC）

（chlortetracycline）（氯四环素）抗生素类药物分析专业知识培训第154页土霉素（OTC）

（oxytetracycline）（氧四环素）抗生素类药物分析专业知识培训第155页

多西环素（DOTC）

（doxycycline）（脱氧土霉素）（强力霉素）抗生素类药物分析专业知识培训第156页美他环素（METC）

（metacycline）抗生素类药物分析专业知识培训第157页两性弱酸性、UV、FR弱碱性抗生素类药物分析专业知识培训第158页二甲胺基弱碱性酚羟基、烯醇型羟基弱酸性1.酸碱性（二）性质两性抗生素类药物分析专业知识培训第159页OH-难溶于水易溶于有机溶剂易溶于水难溶于有机溶剂游离四环素四环素盐溶解性临床上多用盐酸盐抗生素类药物分析专业知识培训第160页2.旋光性手性C3.UV共轭体系4.与金属离子生成有色配位化合物酚羟基、烯醇基Ca2+、Mg2+、Fe3+、Al3+抗生素类药物分析专业知识培训第161页pH3~7.5有强烈荧光抗生素类药物分析专业知识培训第162页（1）差向异构化5.不稳定性抗生素类药物分析专业知识培训第163页土霉素、多西环素、美他环素不易差向异构化抗生素类药物分析专业知识培训第164页（2）降解性质A.酸性下降解抗生素类药物分析专业知识培训第165页四环素脱水四环素-H2O抗生素类药物分析专业知识培训第166页四环素pH＜2脱水四环素pH＜2差向脱水四环素4-差向四环素抗生素类药物分析专业知识培训第167页B.碱性下降解（荧光）抗生素类药物分析专业知识培训第168页二、判别试验1.硫酸反应氧化、脱水例盐酸土霉素ChP（）【判别】（1）取本品约0.5mg，加硫酸2ml,即显深朱红色；再加水1ml，溶液变为黄色。抗生素类药物分析专业知识培训第169页例盐酸金霉素Ch.P（）【判别】（1）取本品约0.5mg，加硫酸2ml即显蓝色，渐变为橄榄绿色，加水1ml后，显金黄色或棕黄色。抗生素类药物分析专业知识培训第170页2.与三氯化铁反应酚羟基例盐酸四环素Ch.P（）【判别】（1）取本品约0.5mg，加硫酸2ml，即显深紫色，再加三氯化铁试液1滴，溶液变为红棕色。抗生素类药物分析专业知识培训第171页例盐酸金霉素ChP（1995）【判别】（2）取本品约5mg，加水1ml溶解后,加三氯化铁试液与乙醇混合液（1→10）2滴，即显深褐色。抗生素类药物分析专业知识培训第172页3.TLC法薄层板硅藻土pH7.0（黏合剂EDTA+甘油）稳定展开剂乙酸乙酯-三氯甲烷-丙酮（2:2:1）（含EDTA）克服痕量金属离子引发拖尾现象抗生素类药物分析专业知识培训第173页例盐酸土霉素Ch.P（）【判别】（2）取本品与土霉素、盐酸金霉素及盐酸四环素对照品，分别加甲醇制成每1ml中含1mg溶液；另取土霉素、盐酸金霉素及盐酸四环素对照品，加甲醇制成每1ml中含上述三种对照品各1mg混合溶液，照薄层色谱法（附录ⅤB）试验，吸收上述五种溶液各1

l，分别点于同一薄层板上，取4%乙二胺四醋酸二钠溶液（pH7.0）5ml，加至乙酸乙酯-三氯甲烷-丙酮（2:2:1）200ml中为展开剂，展开后，晾干，用氨蒸气熏后，置紫外光灯（365nm）下检视，混合溶液应显示三个显著斑点，供试品溶液所显斑点荧光强度及位置应与对应对照品溶液斑点相同。抗生素类药物分析专业知识培训第174页4.HPLC法例盐酸四环素Ch.P（）【判别】（2）在含量测定项下统计色谱图中，供试品溶液主峰保留时间应与对照品溶液主峰保留时间一致。盐酸土霉素，盐酸金霉素，盐酸多西环素，