临床常见标本的微生物检验专家讲座

主要内容1.临床常见标本微生物检验一、血、骨髓、静脉导管标本二、痰及下呼吸道标本三、尿液标本四、大便标本五、生殖道系统标本六、化脓和创伤标本七、穿刺液标本八、眼、耳、鼻、咽拭子标本九、组织标本临床常见标本的微生物检验专家讲座第1页一、血、骨髓、静脉导管标本临床常见标本的微生物检验专家讲座第2页（一）血培养检测采血指征

临床上疑为败血症、脓毒血症或其它血液感染患者1.发烧（≥38℃）或低温（≤36℃）2.寒战3.白细胞增多（>10×109/L，尤其有“核左移”未成熟或杆状核白细胞增多）4.粒细胞降低（成熟多核白细胞<1×109/L）5.血小板降低6．皮肤粘膜出血7．昏迷，休克、多器官衰竭8CRP升高在评定可疑新生儿败血症时，除发烧或低烧外，极少培养出细菌，应该补充尿液和脑脊液培养。

对入院危重感染患者未进行系统性抗菌药品治疗之前，应及时采集血培养。骨髓炎或长久使用抗菌药品者骨髓培养阳性率高于血培养。

临床常见标本的微生物检验专家讲座第3页（二）血培养检测消毒程序

1.皮肤消毒程序：严格执行三步法（预防皮肤寄生菌污染）

（1）用75%酒精擦拭静脉穿刺部位待30s以上；

（2）然后用1%-2%碘酊作用30秒或10%碘伏作用60秒，从穿刺点向外画圈消毒，至消毒区域直径达3cm以上；（3）最终用75%酒精脱碘，待酒精挥发干燥后采血。

新生儿及对碘过敏患者，只能用75%酒精消毒60s，待穿刺部位酒精挥发干燥后穿刺采血。

2.培养瓶消毒程序：

（1）用75%酒精消毒血培养瓶橡皮塞，作用60秒。

（2）用无菌纱布或无菌棉签去除橡皮塞表面剩下酒精，然后注入血液。

临床常见标本的微生物检验专家讲座第4页。不论采取何种采血方法，血培养可接收污染率通常是≤3%。1.严格无菌操作，防止被体表或腔道正常菌群污染；2.不要和血气、血沉取血同时进行；3.穿刺点消毒不使用低效消毒剂，切勿在静滴静脉处取血；4.不宜从静脉导管或静脉留置口取血，若从该部位取血，应在申请单上注明；最好同时静脉取血，以求进行比对；5.不推荐静脉血直接入瓶，以免血量控制不好或对患者不利；6.不主张换针头入瓶，以免增加污染机会。7.采血前把血培养瓶从冰箱拿出后，待恢复至室温后采集，采集后切勿放回冰箱。临床常见标本的微生物检验专家讲座第5页（三）血培养标本采集和运输1.采集时间

患者出现寒战、体温升高前；使用抗菌药品前；患者已使用抗菌药品情况下，若出现显著发烧前期症状，可在寒战前或寒战后1h内采血；若无显著寒战阶段，应在第二次服抗菌药品前采血；对于无显著感染病灶或未找到发烧原因发烧患者，先在不一样部位采集2-3份血标本，间隔大于或等于1h，24h-36h后再次采集2份以上；疑似沙门菌感染患者在病程第1-2周采集静脉血；提议：

同时采集2-3瓶（不一样部位）；需氧菌、厌氧菌各一份，采集后同时送检；在采血后2-5天无需重复采血培养；临床常见标本的微生物检验专家讲座第6页2.采集部位要求：从两侧上肢静脉采血，“双瓶双侧”采血培养。最少做到“双侧双瓶”。必要时从下肢静脉采血做第三套血培养。

不提议采集（1）动脉血，因其诊疗价值没有比静脉血更大；（2）静脉留置导管，因其常伴有高污染率。临床常见标本的微生物检验专家讲座第7页所谓“双瓶双侧”，是指从一个部位采血接种一套培养瓶，再从另一部位采血接种另一套培养瓶。（通常是双臂）所谓“双侧双瓶”，是指从一个部位采血接种一个需氧瓶，再从另一部位采血接种另一个厌氧瓶。一次静脉采血注入到多个培养瓶中应视为单个血培养。临床常见标本的微生物检验专家讲座第8页3.采集次数要求：

对怀疑菌血症、真菌血症成人患者，推荐同时采集2~3套（不一样部位）血培养标本。（即双瓶双臂同时采集血培养标本。）婴幼儿患者，推荐同时采集2次（不一样部位）血培养标本。临床常见标本的微生物检验专家讲座第9页为何要求屡次采血？（1）菌血症有“连续性”和“暂时性”之分，屡次采血可提升阳性检出率，降低漏检；两瓶或以上血培养以上血培养结果阳性，细菌判定结果相同，判断为感染菌，作药敏并汇报临床。 送检两瓶或以上血培养，仅1瓶结果为阳性，且为潜在污染菌（如表皮葡萄球菌、微球菌、气球菌、棒状杆菌等），普通作为污染菌。出现各种细菌在排除污染可能后，可考虑“复数菌”败血症诊疗。 仅送检1瓶血培养，且培养出上述潜在污染菌。则其临床意义不能确定，需与临床医生讨论其可能临床价值。（2）血液感染有原发性和继发性之分，屡次采血培养有利于循环外感染部位诊疗；（3）菌血症患者多数为间歇性，病原菌周期性出现在血液中，在无菌时期不论临床症状经历严重程度，患者血液中病原菌浓度水平相当低，所以要求屡次采血，但24h内普通不超出3次。临床常见标本的微生物检验专家讲座第10页4.采血量要求：成年患者推荐采血量为每套不少于10ml，每瓶不少于5ml。婴幼儿患者推荐采血量为每瓶不少于2ml。说明：血标本采集量是影响检出率最主要原因。成人血培养采血量在2~30ml之间，病原菌检出率与采血量成正百分比增加。每增加1ml血液，病原菌检出率增加3.2%。儿童患者因为血液中病原菌浓度较高，血培养量无需等同于成人。对血液病患者或者血容量相对较低患者提议使用儿童瓶来降低血液采集量增加病原菌检出率。临床常见标本的微生物检验专家讲座第11页5.血培养标本运输要求：（1）采集后血培养瓶应在1小时之内送往试验室。（2）血培养瓶在接种前和接种后均不得冷藏和冷冻。临床常见标本的微生物检验专家讲座第12页血液标本处理1.自动化血培养系统：马上放入仪器内，直到仪器报警提醒阳性瓶后进行下一步操作。2.传统血培养瓶：放入35℃温箱孵育，每日观察，若有生长情况马上转种，若第7天仍无菌生长，需要进行末次接种。临床常见标本的微生物检验专家讲座第13页双相培养瓶临床常见标本的微生物检验专家讲座第14页二.导管相关性血流感染标本培养导管相关性血流感染：最常见为血管内导管相关性血流感染（CRBSI），发生率与导管种类、导管相关医疗操作频率、患者病情等原因相关。短期留置血管内导管，皮肤定值菌经过皮下隧道移植到导管尖端，随即引发感染；长久留置血管内导管，导管头被细菌污染，导管腔发生细菌定植，引发感染；血行传输细菌可定值在血管内导管中，引发新病灶。临床常见标本的微生物检验专家讲座第15页皮肤凝固酶阴性葡萄球菌定植于输液管临床常见标本的微生物检验专家讲座第16页怀疑导管相关性血流感染患者，可采取培养方法（提议同时进行）：1.用Maki半定量培养法对血管内导管尖端片段进行培养：采集：用75%酒精消毒导管周围皮肤；移动导管，无菌剪刀剪取尖端末端5cm，直接置入无菌试管中；马上送检，预防干燥，常规培养不超出15min，4℃保留不超出2h。接种：用无菌镊子将5cm导管在血琼脂平皿上交叉滚动4次，然后弃之，放入5%二氧化碳35℃温箱。处理：若24h后血琼脂平皿生长＞15个菌落，提醒有潜在导管相关性血流感染。

不推荐使用增菌肉汤培养，因为增菌扩大了污染几率，造成结果不可靠。2.采集外周静脉血培养：采集最少2份血培养，最少1份经外周静脉血穿刺采血，最少1份从导管中心或静脉留置口隔膜取血，二者之间采血时间应≤5min。临床常见标本的微生物检验专家讲座第17页Maki滚动法临床常见标本的微生物检验专家讲座第18页二、痰及下呼吸道标本临床常见标本的微生物检验专家讲座第19页咳痰途经口咽部不可防止地受到污染唾液中口咽部定植菌浓度可达108～109/ml。研究显示，国内常规痰标本中约半数存在唾液严重污染现象。临床常见标本的微生物检验专家讲座第20页（一）采集指征凡是发烧、咳嗽和咳痰，痰呈脓性、粘稠或血性，并伴有胸痛、气急，肺部闻及湿罗音，外周白细胞总数及中性粒细胞百分比显著增高，X线检验提醒肺部有炎性浸润或胸腔积液，甚至出现感染性休克和呼吸衰竭等患者，应采集痰液或下呼吸道标本。对可疑烈性呼吸道传染病（如SARS、肺炭疽、肺鼠疫等）患者采集检验标本时必须注意生物安全防护。临床常见标本的微生物检验专家讲座第21页（二）采集时间在抗生素应用前采集痰标本;标本采集后1～2h内必须马上进行试验室处理；咳痰标本应用最早且广泛，但也是最受争议标本;取标本前应摘去牙托，清洁口腔如刷牙和漱口;深咳，采集标本过程中要有专业医务人员指导;对于细菌性肺炎，痰标本送检天天1次，连续2～3天；不提议24h内屡次采集，除非痰液外观性状改变；怀疑分枝杆菌感染者，应连续搜集3天清晨痰液送检。临床常见标本的微生物检验专家讲座第22页（三）采集方法自然咳痰法

以晨痰为佳。用清水重复漱口，用力咳出呼吸道深部痰，痰液直接吐入无菌容器中，尽快送检。不然有细菌（如肺炎链球菌、流感嗜血杆菌）在外界可能死亡。不能及时送检标本，室温保留≤2h。要求采到肺深部痰液，不要唾液。临床常见标本的微生物检验专家讲座第23页2.创伤性取痰方法（均由医生操作）：经支气管镜抽吸法（支气管肺泡灌洗液、防污染样本毛刷等）直接从肺部感染病灶采集高浓度病原菌，较为安全，但不能防止咽喉部正常菌群污染。

经人工气道吸引分泌物（导管吸痰、防污染灌洗等）较为采取，但人工气道常有致病菌或定值菌存在，提议采集前先做细胞血筛查。经气管穿刺吸引物采集到下呼吸道标本不受上呼吸道污染，惯用于厌氧菌培养，但患者不易接收。

经胸壁针刺吸引物偶然用于原因不明肺炎或贴近胸壁病灶。

胃内采痰法用于结核杆菌感染婴幼儿患者

小儿取痰法用压舌板向后压舌，用棉拭子伸入咽部，小儿受刺激后咳出分泌物。雾化取痰法无痰或痰量极少时可用，使用5%NaCl雾化导痰。哮喘患者不能用该法。临床常见标本的微生物检验专家讲座第24页痰标本运输、保留1.标本采集后2小时内送至试验室；不然可造成肺炎链球菌、流感嗜血杆菌等苛养菌死亡；2.延迟送检或待处理标本应置于4℃冰箱保留（疑似肺炎链球菌、流感嗜血杆菌等苛养菌例外），但应在24小时内处理；3.对可疑烈性呼吸道传染病（SARS、炭疽、鼠疫等）标本，必须全过程注意生物安全；4.经口腔部污染标本均不能够做厌氧菌培养。临床常见标本的微生物检验专家讲座第25页痰标本处理一.痰标本革兰染色涂片检测：其目标是判定标本是否适合做细菌培养，并初步判定有否病原菌，病原菌数量级类别，有利于初步汇报、培养基选择和培养结果判定。普通认为来自下呼吸道合格标本应该是含脓细胞和支气管柱状上皮细胞较多，而受唾液污染来自于颊黏膜扁平上皮细胞较少，其判定标准以下表：临床常见标本的微生物检验专家讲座第26页A、B级痰标本适合进行培养；C、D级标本须高倍镜镜下观察区分，依据视野内白细胞或纤毛柱状上皮细胞数量，以及细菌种类及分布等结果进行判定；E级为不合格标本。分级白细胞（个）/LP鳞状上皮细胞（个）/LPA＞25＜10B＞2510-25C＞25＞25D10-25＞25E＜10＞25临床常见标本的微生物检验专家讲座第27页二.痰标本洗净：目标：尽可能排除上呼吸道正常菌群污染：方法：将痰加入含有15-20ml灭菌生理盐水试管中，猛烈振荡5-10s，然后用接种环将沉淀于管底脓痰小片沾出，再放另一个无菌试管中，将一样方法重复2次。临床常见标本的微生物检验专家讲座第28页三.痰标本均质化处理：目标：有利于痰核内部细菌暴露，以提升痰培养标本阳性培养率。方法：向痰液内加等量用无菌PH7.6磷酸盐缓冲液配制1%胰蛋白酶溶液，放置37℃温箱内消化90min即能使痰液均质化，而对细菌培养无影响。另外，还可用玻璃组织研磨器或振荡器。临床常见标本的微生物检验专家讲座第29页痰标本处理（常规）取痰液分区3区划线接种于血平板(及麦康凯平板MAC)上，若需培养嗜血杆菌，再接种于加入抗生素(每毫升巧克力琼脂内加万古霉素50mg，杆菌肽30mg，氯林可霉素1mg）嗜血杆菌选择性巧克力平板（HA）。血平板置于35℃普通温箱，巧克力平板置于5%CO2温箱内。18-24小时后观察。临床常见标本的微生物检验专家讲座第30页痰培养结果判断在培养出细菌时都面临判断该细菌是致病菌或携带菌问题，而这些标本采集极难不污染携带菌。当代感染特点是，低免疫人群大大增多，条件致病菌、非致病菌引发感染增多，这些特点给致病菌判断带来了困难。临床常见标本的微生物检验专家讲座第31页痰标本在平板上菌落量化指标未列入规范要求（参考）临床常见标本的微生物检验专家讲座第32页有意义痰培养结果合格痰标本培养优势菌中度以上生长(》+++)合格痰标本少许生长，但与涂片镜检结果一致(肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、卡他莫拉菌)屡次培养到相同细菌；临床常见标本的微生物检验专家讲座第33页无意义痰培养结果痰培养有上呼吸道正常菌群细菌(如草绿色链球菌、表皮葡萄球菌、非致病奈瑟菌、类白喉杆菌等)痰培养为各种病原菌少许(<+++)生长。临床常见标本的微生物检验专家讲座第34页三、尿培养标本

临床常见标本的微生物检验专家讲座第35页尿路感染是指尿道内有大量微生物繁殖而引发尿路炎症。尿路感染并非是一个单一疾病，而是一个临床综合征。依据感染部位可分为上尿路感染（如肾盂肾炎）及下尿路感染（如膀胱炎），男性还可出现前列腺感染，不一样部位同时感染也很常见。尿路感染是人类最常见感染之一，可发生于各个年纪段人群，好发于女性，男:女之比为1:10。临床常见标本的微生物检验专家讲座第36页经典临床表现为发烧、尿频、尿急、尿痛、排尿困难和耻骨上压痛，临床表现可因患者年纪和健康情况不一样而异。新生儿尿路感染症状往往是非特异性、模湖，可表现有厌食，呕吐，倦怠，无发烧菌血症等；婴儿期直到2岁，常有高热；2岁以后尿路感染才会有经典临床表现；老年患者尿路感染，常缺乏显著症状，更易造成菌血症和急性肾功效衰竭，应引发重视。临床常见标本的微生物检验专家讲座第37页正常人尿液是无菌，而尿液细菌培养最大问题是杂菌污染。正常人外尿道有大肠杆菌、葡萄球菌等存在。而这些细菌又是尿路感染中常见病原菌。所以要作好尿液细菌学检验，首先应注意标本搜集问题。尿液经尿道排出时会受到尿道内正常菌群污染,但定量培养时计数不会超出103CFU/ml,泌尿系感染时定量培养在104～105CFU/ml。另外,因为绝大多数泌尿系感染是由肠杆菌科细菌引发,而这类细菌硝酸盐还原试验为阳性,故可参考尿检验常规中硝酸盐还原试验来推断是否有细菌感染。临床常见标本的微生物检验专家讲座第38页（一）尿培养标本送检指征1.有经典尿路感染症状；2.有肉眼脓尿或血尿；3.尿常规检验白细胞或亚硝酸盐阳性；4.有不明原因发烧，无其它局部症状；5.留置导尿管患者出现发烧；6.膀胱排空功效受损；7.泌尿系统疾病手术前；8.有尿路感染症状者，前次培养结果阴性或抗菌治疗48h后仍连续发烧。9.抗生素停药后，感染症状再次出现。临床常见标本的微生物检验专家讲座第39页（二）尿培养标本采集方法

标本采集应在使用抗生素之前，防止消毒剂污染标本。1．清洁中段尿留取清晨清洁中段尿标本，先用肥皂水仔细清洗会阴部，再用清水冲洗尿道口周围；将前段尿排去，留取中段尿10ml左右于无菌容器内，马上加盖送检，2h内接种。该方法简单、易行，是最惯用尿标本搜集方法，不过轻易受到会阴部细菌污染。2．耻骨上膀胱穿刺使用无菌注射器直接从耻骨上经皮肤消毒穿入膀胱吸收尿液，是评定膀胱内细菌感染“金标准”方法，主要用于厌氧菌培养或留取标本困难婴儿尿标本采集。临床常见标本的微生物检验专家讲座第40页

3．直接导尿按常规方法对会阴局部进行消毒后，用导尿管直接经尿道插入膀胱，获取膀胱尿液，可降低尿液标本污染，准确地反应膀胱感染情况。但有可能下尿道细菌进入膀胱，造成继发感染，普通不提倡使用。4．小儿搜集包无自控能力小儿可用搜集包搜集尿液，这种装置因为极难防止会阴部菌群污染产生假阳性，所以只有在检验结果为阴性时才有意义。假如检验结果为阳性，应结合临床进行分析，必要时可使用膀胱上穿刺或导尿法留取标本进行复检。5．留置导尿管搜集尿液用导尿管导取10-15ml尿液置灭菌容器内送检。长久留置导尿管者，应在更换新导尿管后留取尿标本。留置导尿患者应消毒导尿管外部及尿管口，采取无菌操作方法，用注射器经过导尿管吸收尿液。注意预防混入消毒剂，不能从尿液搜集袋中采集尿液。临床常见标本的微生物检验专家讲座第41页（三）采集时间和标本运输

1.应选择在抗菌药品应用前或停用抗菌药品5天后采集尿液。2.通常采集清晨第1次尿液送检，确保尿液在膀胱内停留4h以上，使细菌有足够时间繁殖。嘱患者睡前少饮水以免尿液稀释。3.怀疑沙门菌感染时应在发病2周左右采集尿液培养。4.对无症状患者应连续采集3天晨尿送检。5.怀疑结核分枝杆菌感染时，患者应停药1-2天后采集晨尿或24h尿沉渣部分10-15ml送检。6.标本采集后应马上送检、及时接种，室温下保留时间不得超出2h（夏季保留时间应适当缩短或冷藏保留），冷藏保留标本必须在6h内进行接种，但冷藏保留标本不能用于淋病奈瑟菌培养。临床常见标本的微生物检验专家讲座第42页（四）注意事项1.因为自然排尿搜集标本极难防止会阴部及下尿道细菌污染，所以需要定量接种、合理评价才能判断培养细菌是否与尿路感染相关。尿标本菌落计数中革兰阴性杆菌数>105CFU/ml或革兰阳性球菌数>104CFU/ml时有临床诊疗意义。（不是绝正确，受多原因影响，综合判断）2.尿液标本采集和培养中问题是污染杂菌，故应严格进行无菌操作。3.尿标本采集后应马上送检，以免污染，尿液中不得加防腐剂和消毒剂。临床常见标本的微生物检验专家讲座第43页4.除非是流行病学调查，长久留置导尿管患者常规尿培养没有临床意义，大量病原菌常可在这类患者中检出，导尿管留置时间延长易造成与引发患者尿道感染不一致微生物定植生长；5.不可从集尿袋下端管口留取标本，集尿袋内尿液也不能用于培养，可能会引发污染；6.临床常让患者留取清洁中段尿，应该在医护人员监督指导下让患者正确留取清洁中段尿；7.因为种种原因，患者经常不能正确地留取清洁中段尿，试验室只是针对尿液标本培养结果进行评定，或经常因为分析前尿液标本污染了各种细菌无法正确解释结果，可能延误了临床正确诊疗和治疗。临床常见标本的微生物检验专家讲座第44页以下原因可使尿液中细菌数量降低，判断结果时应注意

①使用抗生素治疗，细菌生长受到抑制；②尿液稀释，尿比重＜1.003，营养成份降低，细菌生长迟缓；③尿PH＜5.0或＞8.5，细菌生长受阻；④尿频时，膀胱内细菌停留时间短，菌落数降低；⑤尿道口消毒液混入标本中，影响细菌繁殖，菌落数降低；⑥不一样种类细菌生长速度不一样、营养要求不一样，菌落计数有所不一样。临床常见标本的微生物检验专家讲座第45页接种方式接种于血平板；置于35℃普通温箱；18-24小时后观察。采取1ul或者10ul定量接种环。临床常见标本的微生物检验专家讲座第46页尿培养划线方式1ul接种环：菌落数*1000/ml10ul接种环：菌落数*100/ml5ul接种环：菌落计数*200/ml临床常见标本的微生物检验专家讲座第47页尿培养结果评价正常情况下从肾脏排泌至膀胱尿液是无菌，但膀胱中尿液经尿道排出体外时可受到下尿道中正常菌群污染而出现细菌。所以对不一样方法获取尿液标本培养结果需正确评价，才能有效指导临床合理治疗。普通认为，清洁中段尿标本中单种细菌菌落数＞105CFU/ml可能为感染；＜5×104CFU/ml可能为污染，在二者之间需要依据详细情况进行评定（表1）。临床常见标本的微生物检验专家讲座第48页表1不一样方法采集尿标本培养结果评价

标本起源菌落数CFU/ml 结果评价清洁中段尿＜5×104无意义，仅汇报菌落数及革兰染色特征，并注明是纯培养或是混合菌生长纯培养有意义，汇报菌落计数和菌种判定及药敏试验结果；混合菌生长无意义，仅做革兰染色镜检，并汇报镜检结果(5～10)×104纯培养或混合菌生长，其中某种细菌数≥105者有意义，需进行细菌判定及药敏试验；4种及以上细菌生长无意义，汇报标本污染＞1053种以内细菌生长都有意义，对2种主要生长菌需进行菌种判定及药敏试验；4种及以上细菌生长无意义，汇报标本污染＞103导尿都有意义，全部细菌均需做菌种判定及药敏试验任意数目耻骨上膀胱穿刺临床常见标本的微生物检验专家讲座第49页阴性培养结果汇报培养48h无菌落生长，即为阴性。接种1ul尿量者，应汇报“培养48h，菌落计数＜103CFU/ml”；接种10ul尿量者，应汇报“培养48h，菌落计数＜102CFU/ml”。

临床常见标本的微生物检验专家讲座第50页阳性培养结果汇报应汇报细菌种属名称、菌落计数和药品敏感性试验结果。如：大肠埃希菌生长，菌落计数＞105CFU/ml，药品敏感性试验结果：……临床常见标本的微生物检验专家讲座第51页菌落计数＞105CFU/ml只是诊疗尿路感染普通标准。对一个试验室而言，假如仅使用一个标准对试验结果进行解释，那么若标准制订过松，将会造成抗生素滥用和无须要资源浪费；制订过严，将有可能造成尿路感染漏诊。所以每个试验室应在与临床医生亲密合作基础上，依据不一样情况制订不一样解释标准。尿培养菌落计数可受各种原因影响，在一些患者即使菌落计数较少，也有显著临床意义，所以对菌落计数＜5×104CFU/ml，“规范”中认为无意义阳性结果，不应随意丢弃，必要时应依据患者详细情况或与临床医生联络后，决定是否需要做细菌判定和药敏试验。临床常见标本的微生物检验专家讲座第52页四、大便培养标本

临床常见标本的微生物检验专家讲座第53页最常见于感染性腹泻：1.吸收不良性腹泻；轮状病毒、腺病毒、隐孢子虫、致病性大肠埃希菌……..2.分泌性腹泻（肠毒素性腹泻）；霍乱弧菌、产肠毒素大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌…….3.侵袭性腹泻（渗出性腹泻）；沙门菌属、耶尔森菌、溶组织内阿米巴、侵袭性大肠埃希菌……4.抗生素相关性腹泻临床常见标本的微生物检验专家讲座第54页（一）采集时间腹泻患者应在急性期，并尽可能在使用抗生素之前采集新鲜粪便；伤寒患者在发病2周以后。（二）采集方法1．自然排便采集法自然排便后，挑取有脓血或黏液部位粪便2-3g，液状粪便取絮状物盛于无菌容器内或置于保留液或增菌液中送检。2．直肠拭子采集法对不易取得粪便或排便困难患者及婴幼儿，可采取直肠拭子法采集标本，其方法是将拭子前端用甘油湿润。然后插入肛门约4～5cm（幼儿约2～3cm）处，轻轻在直肠内旋转，擦取直肠表面粘液后取出，盛入无菌试管或保留液中送检。临床常见标本的微生物检验专家讲座第55页（三）试验室检验

肠道细菌大多为革兰阴性杆菌，且因粪便标本中有各种正常菌群，形态上区分困难，所以普通不做直接涂片检验。只有当临床怀疑肠道菌群失调或检验霍乱弧菌、结核分枝杆菌、疑似葡萄球菌或难辩梭菌引发伪膜性肠炎以及真菌性腹泻时，才做直接涂片检验。疑似葡萄球菌引发抗菌素相关性肠炎，可取水样便或肠黏膜样物涂片，革兰染色后镜检，见革兰阴性杆菌显著降低，革兰阳性球菌大量散在或成堆（葡萄状）排列，可提醒肠道菌群失调。临床常见标本的微生物检验专家讲座第56页（四）注意事项在腹泻发病正确时间搜集标本，病人应尽可能在急性期（3d）内和用药前采集标本，以提升检出率。大便标本中含有很多杂菌，粪便标本采集须注意预防外界脏物污染，尽可能采取无菌容器。为提升阳性检出率，要采集新鲜标本，马上送检。临床常见标本的微生物检验专家讲座第57页标本接种一细菌性痢疾、伤寒感染（沙门、志贺）取标本接种于SS琼脂平板或麦康凯平板或XLD平板，置于35℃普通温箱，18-24小时后观察。二伪膜性肠炎（难辨梭状芽孢杆菌）接种于CCFA平板和厌氧血琼脂平板，置于37℃普通温箱，48小时后观察。三霍乱感染标本接种于碱性蛋白胨水，35℃培养6-8h后转种于庆大霉素琼脂平板或SS琼脂平板，35℃普通温箱，18-24小时后观察。四其它感染真菌、小肠结肠炎耶尔森菌、空肠弯曲菌。。。。。。

临床常见标本的微生物检验专家讲座第58页接种方式四区划线，每区均换环。临床常见标本的微生物检验专家讲座第59页五、生殖道标本

临床常见标本的微生物检验专家讲座第60页（一）送检指征

1.男性泌尿系统表现尿急、尿频、尿痛尿道分泌物增多会阴部疼痛及阴囊疼痛性功效障碍泌尿生殖器畸形和缺损临床常见标本的微生物检验专家讲座第61页2.女性泌尿系统表现

分泌物增多及性状异常尿道口搔痒及脓性分泌物流畅下腹疼痛月经失调阴道出血外阴搔痒外阴或阴道疼痛性功效障碍临床常见标本的微生物检验专家讲座第62页（二）标本采集生殖器官标本包含子宫颈、阴道、前列腺；男性及女性外生殖器分泌物及经血等。应依据感染部位和可能病原体决定用于病原学诊疗标本种类、采集部位和采集方法等。阴道、子宫颈及前列腺等分泌物应由医师采集，搜集于无菌试管内送检。临床常见标本的微生物检验专家讲座第63页尿道分泌物1.女性尿道：患者排尿1小时后采集，首先拭去尿道口渗出物；再用拭子经过阴道，靠着耻骨联合，按摩尿道，采集分泌物；如未取得分泌物，清洗外尿道，用灭菌纱布或棉球擦拭，用泌尿生殖道拭子插入尿道2－4cm，旋转拭子2秒。2.男性尿道：用泌尿生殖道拭子插入尿道腔2－4cm，旋转拭子，最少停留20秒，而使之轻易吸收。临床常见标本的微生物检验专家讲座第64页阴道分泌物擦除过多分泌物和排出液，用无菌棉拭子采取阴道口内4厘米内侧壁或后穹窿处罚泌物，假如需要涂片，需再用一个拭子。男性前列腺：用前列腺按摩法采集前列腺液。清洗尿道口，冲洗尿道膀胱，从肛门用手指按摩前列腺，使前列腺液溢出，用无菌容器搜集。无肉眼可见脓液时，可用灭菌拭子轻轻伸入前尿道内，旋转拭子采集标本。临床常见标本的微生物检验专家讲座第65页（三）注意事项

1.生殖器是开放性器官，标本采集过程中应严格遵循无菌操作规程以降低杂菌污染。2.因为阴道正常菌群存在而使细菌分离判定受到干扰，所以在采集女性生殖道标本时应注意尽量降低或防止正常菌群污染。3.疑有宫腔感染，如遇产妇需行剖宫产，待胎儿娩出后取宫腔分泌物，并同时取婴儿耳拭子一同送检。4.沙眼衣原体和病毒均在宿主细胞内繁殖，取材时拭子应在病变部位（移行上皮处稍内）停留十几秒钟，并采集尽可能多上皮细胞。临床常见标本的微生物检验专家讲座第66页5.生殖道感染厌氧菌也较多见，疑有厌氧菌感染时，标本采集和运输应防止与氧气接触，最正确方法是床边采样，直接接种至厌氧装置内。6.淋病奈瑟菌检验时，取材深度一定要够，因为淋球菌好发于柱状上皮细胞而不是复层鳞状上皮细胞。不论男女尿道及子宫颈均需用拭子插入尿道及子宫颈3cm深转动并停留10-30s取样送检。7.淋病奈瑟菌抵抗力低，对外环境改变颇为敏感，对严寒和干燥抵抗力很弱。所以，为了确保培养有足够成功率，取材后要尽快送检，马上接种，标本离体时间越短越好。临床常见标本的微生物检验专家讲座第67页直接接种于巧克力培养基，置于5%CO2温箱内，18-24小时后观察。临床常见标本的微生物检验专家讲座第68页六、化脓和创伤标本临床常见标本的微生物检验专家讲座第69页组织或器官化脓性感染，其病原菌起源可分为两类：①内源性：感染源是炎症局部周围器官中正常菌群，因为损伤等原因进入无菌状态组织内，发生感染。②外源性：感染源是存在于人体外部自然界微生物，因为外伤和直接接触经过人体表面进入人体，造成感染。脓液细菌学检验对于确定感染种类（结核性或非结核性等）、提供药品敏感结果和指导临床治疗有主要意义。临床常见标本的微生物检验专家讲座第70页（一）标本采集1．开放性感染和已溃破化脓灶标本采集前先用灭菌生理盐水拭去表面渗出物，尽可能用抽吸或将拭子深入伤口，紧贴伤口前沿取样，从脓肿底部或脓肿壁取样，效果最好。慢性感染，污染严重，极难分离到致病菌，可取感染部位下组织，研磨成组织匀浆接种于适宜培养基。2．封闭性脓肿局部消毒后用针及注射器抽吸脓肿壁，将全部物质置于无菌试管内送检，疑为厌氧菌感染时马上作床边接种或置于厌氧转运装置送检（针头插一橡皮塞隔绝空气）。但取样时，可能会带入与感染过程无关定植细菌。3．大面积创伤感染：可取感染组织块或沾有脓汁内层敷料送检。临床常见标本的微生物检验专家讲座第71页（二）注意事项细菌对干燥敏感或只能采集少许标本时，用棉拭子采集标本后马上放入液体培养基内，或采标本前先将棉拭子沾少许肉汤以保持标本湿度。对于不能马上送检标本，应放4℃保留，培养淋病奈瑟菌和脑膜炎奈瑟菌标本除外。尽可能在用药前采集标本。采样前病灶局部应防止用抗菌药品或消毒剂。革兰染色对标本进行评定。涂片中如出现上皮细胞提醒标本已被污染。没有上皮细胞而有白细胞说明标本采集正确。有创伤均可有细菌污染，但不一定发生感染，所以对分离到细菌要依据创伤情况、菌量和种数，搜集标本处理过程、机体免疫力及抗生素使用情况等各种原因来分析判断。临床常见标本的微生物检验专家讲座第72页标本处理直接涂片，做出初步判断；接种于血平板，置于35℃普通温箱；18-24小时后观察。临床常见标本的微生物检验专家讲座第73页七、穿刺液标本

临床常见标本的微生物检验专家讲座第74页穿刺液主要包含:

脑脊液胆汁胸水腹水心包液关节液鞘膜液在正常人体中，上述体液均是无菌。有感染情况下检出细菌，在排除污染后应视为病原菌，及时给予正确治疗，使病人早日恢复健康。临床常见标本的微生物检验专家讲座第75页送检指征脑脊液：症状指征：发烧等感染性全身症状、颅内压升高、脑膜刺激症状、神经麻痹症状、脑脊液常规及生化改变；怀疑脑膜炎时。胸水：多伴有胸痛、发烧、胸腔积液；疑似胸膜炎、胸腔积水；腹水：有积液伴腹痛、呕吐、肌担心、肠鸣音弱或消失等。疑似原发或继发性腹膜炎；胆汁：腹痛、黄疸、右上腹压痛、肌担心、胆囊区深吸气时有触痛；疑似胆石症、胆囊炎、肝胆系统感染等。心包液：发冷、发烧、心悸、出汗、乏力及精神症状；心前区疼痛、心包摩擦音、心音显著减弱、心电图改变等。疑似心包炎；5关节液：关节肿胀，关节周围肌肉发生保护性痉挛；疑似化脓性关节炎。临床常见标本的微生物检验专家讲座第76页（一）脑脊液1.采集时间：怀疑为脑膜炎病人，应马上采集脑脊液，最好在使用抗菌药品以前采集标本。2.采集方法：用腰穿方法采集脑脊液3～5ml，分装到3个无菌试管中，每个试管1～2ml。第一管用于细菌培养!

也可将抽取液直接注入血培养瓶,用血培养仪培养。临床常见标本的微生物检验专家讲座第77页3.标本运输和保留：脑膜炎奈瑟菌离体后会快速自溶,肺炎链球菌和流感嗜血杆菌也很轻易死亡,所以,标本应马上送检,并注意保温、防干燥。切不可置冰箱保留,不然会影响检出率。脑脊液标本送检理想时间为15分钟内，半小时送检是可接收，假如送检时间超出1小时，则会影响结果。如不能及时送检，可使用血培养瓶（怀疑脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌感染时，请勿使用血培养瓶）临床常见标本的微生物检验专家讲座第78页

（二）胆汁及其它穿刺液（胸水、腹水、心包液、关节液及鞘膜液等）

1.采集时间

怀疑感染存在，应尽早采集标本，普通在患者使用抗菌药品之前或停顿用药后2-3天采集。2.采集方法①无菌操作穿刺抽取标本或外科手术采集标本。②标本采集量应＞1ml;胸腔积液、腹水可抽取10ml;心包液、关节液等可抽取2～5ml。③标本采集后注入无菌小瓶或无菌试管中送检也可将抽取液直接注入血培养瓶，用血培养仪培养。为预防穿刺液凝固，应在无菌试管中预先加入灭菌肝素，再注入穿刺液。临床常见标本的微生物检验专家讲座第79页标本处理脑脊液：1.若脑脊液标本显著红色或浑浊，直接接种；若脑脊液清楚透明，应以3000r/min离心10-15分钟后，取沉淀物进行接种。2.普通选择血琼脂平皿、巧克力平皿、麦康凯或中国蓝平皿、沙保罗平皿、硫羟乙酸盐肉汤。3.接种前将平板置于温箱中预温30min，保留平皿表面干燥。4.采取10ul定量环接种进行4区划线。接种后37℃、5%CO2温箱培养24h，若不见生长，继续培养。临床常见标本的微生物检验专家讲座第80页注意：1.脑脊液标本不推荐接种与增菌肉汤，其营养条件较弱，不易苛养菌生长：2.脑脊液标本不能使用血培养瓶培养，因为培养瓶中含有聚茴香胺硫酸钠（SPS）对脑膜炎奈瑟菌有毒性。临床常见标本的微生物检验专家讲座第81页胸腹水、胆汁、心包液、关节液等标本接种标本处理：将标本取10ul直接接种于血琼脂平皿、巧克力平皿、麦康凯或中国蓝平皿、沙保罗平皿上，除巧克力平皿放入37℃、5%CO2温箱外，其余平板均放入35℃普通温箱。备注：因为该方法检出率低，当前国内使用新接种方法：无菌操作将标本与肉汤按1∶1---1∶2百分比加入到已配置血液增菌肉汤管中，轻轻摇匀。置于35℃普通温箱，24h后转种到血琼脂平皿上，再次培养24h观察。临床常见标本的微生物检验专家讲座第82页八、眼、耳、鼻、咽拭子标本

临床常见标本的微生物检验专家讲座第83页正常眼部、中耳及鼻窦内是无菌，而咽峡部有口腔常在菌丛。耳、鼻、咽部细菌感染病原菌多源于口腔，口腔中现有需氧菌也有厌氧菌，所以，其周围组织器官感染不但考虑是需氧菌，也须检验厌氧菌。临床常见标本的微生物检验专家讲座第84页（一）标本采集1.眼结膜：分别用（无菌盐水预湿）