实验二 细胞中核酸染色和两类核酸定位

实验二细胞中核酸染色和两类核酸定位一、实验原理：细胞中，DNA主要分布在细胞核内；RNA主要分布在细胞质中，碱性染料甲基绿和派洛宁对酸性的核酸均有亲和力，但是这两种染料对DNA和RNA却有很强的选择性：DNA可以被甲基绿染成绿色，RNA却被派洛宁染成红色。二、实验目的：观察细胞中的DNA、RNA的分布三、实验用具：载玻片，盖玻片，牙签，微量可调移液器，显微镜。四、试剂配制：甲基绿-派洛宁混合染料：称取甲基绿0.1g，吡咯红0.0835g，乙酸钠0.39g，加入蒸馏水90ml,再加入乙酸192μL,混匀后定容至100ml。卡诺氏固定液:：取无水乙醇60ml,再加入冰乙酸20ml。95%酒精：量取95ml酒精，加入5ml蒸馏水。70%酒精：量取70ml酒精，加入30ml蒸馏水。五、实验前准备：主要仪器：普通光学显微镜（12个/班，共用）计时器（25个/班，1个/组）微量移液器（25套/班，1套/组）辅助仪器：载、盖玻片（各50个/班，2个/组）镊子（各50个/班，2个/组）耗材：黄、蓝吸头（各25盒/班，1盒/组）材料：洋葱（25个/班，1个/组）试剂：甲基绿-派洛宁混合染料(12.5ml/班，500μl/组)卡诺氏固定液(250mL/班，10ml/组)95%酒精(250ml/班，10ml/组)70%酒精(250ml/班，10ml/组)备注：甲基绿-派洛宁混合染料（100ml）：称取甲基绿0.1g，吡咯红0.0835g，乙酸钠0.39g，加入蒸馏水90ml,再加入乙酸192μL,混匀后定容至100ml。卡诺氏固定液（320ml）：取无水乙醇240ml,再加入冰乙酸80ml。95%酒精（300ml）：量取285ml酒精，加入15ml蒸馏水。70%酒精（300ml）：量取210ml酒精，加入90ml蒸馏水。六、实验步骤：1.取洋葱内表皮细胞，放入卡诺氏固定液固定15min。然后再放入95%酒精10min，接着再转入70%酒精10min?；2.将洋葱内表皮放在洁净的载玻片上，滴上1~2滴甲基绿-派洛宁混合染料，染色5-10min，用蒸馏水冲去多余染液，盖上盖玻片，用吸水纸吸去多余染液；3.在普通光学显微镜下观察。七、实验结果与分析：从实验结果可以看出，洋葱内表皮细胞经甲基绿哌洛宁(吡咯红)染液染色后，细胞核被染成蓝绿色，细胞质部位呈粉红色，如图1所示图1.400×洋葱内表皮经甲基绿哌洛宁染液染色八、注意事项及改进：1.洋葱内表皮细胞进行经吡咯红甲基绿染色，实验效果好，建议用洋葱内表皮细胞代替洋葱根尖细胞；2.卡诺固定15min便能达到较好的实验效果，建议固定细胞时时间为15min；3.甲基绿吡咯红染色5-10min就能达到很好的染色效果，建议将染色时间从20-30min改为5-10min。九、建议课时安排：建议用1个课时十、问题提问：1.甲基绿哌洛宁染色的原理是什么？答：甲基绿易与聚合程度高的DNA结合呈现绿色。而派洛宁则与聚合程度较低的RNA结合呈现红色（但解聚的DNA也能和派洛宁结合呈现红色），即RNA对派洛宁亲和力大，被染成红色，而DNA对甲基绿亲和力大，被染成绿色。2.卡诺试剂固定的原理是什么？答：卡诺固定液能够迅速穿透细胞，溶解脂肪及类脂体，使蛋白质变性凝固，维持细胞的稳定性，达到优良染色效果。3.DNA仅存在于细胞核中，这句话对吗？为什么？答：不对，DNA除存在于细胞