两面针5种成分含量测定 高效液相色谱一测多评法（征求意见稿）

4T/XXXXXXX—XXXX两面针5种成分含量测定高效液相色谱一测多评法本标准规定了一测多评法测定两面针中木兰花碱、橙皮苷、盐酸血根碱、氯化两面针碱、白屈菜红碱等5种化学成分的含量的原理、试剂、仪器、色谱条件、测定步骤、结果计算和精密度。本文件适用于两面针药材中木兰花碱、橙皮苷、盐酸血根碱、氯化两面针碱、白屈菜红碱含量的测2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。3术语和定义下列术语和文件适用于本文件。3.1一测多评法Quantitativeanalysisofmulti-componentsbysingle-marker通过中药有效成分间存在的内在函数关系和比例关系,通过测定中药中某个代表性成分的含量，依据相对校正因子可计算出该中药中其他多种待测成分的含量，使其计算值与实测值符合定量方法学要求的一种多指标同步质量控制方法。3.2相对校正因子Relativecorrectionfactor是一种修正因子，它的主要作用是修正测量值，以获得更准确的实验数据，提高研究质量，它的计算公式为某组分的绝对校正因子与标准物质的绝对校正因子之比。4原理在同时测定两面针多个指标质量成分的含量时，以两面针中典型成分氯化两面针碱做内参物，分别求出内参物与木兰花碱、橙皮苷、盐酸血根碱、白屈菜红碱等其它4个待测成分间的相对校正因子，并把相对校正因子作为一个常数用于相应成分的含量测定。5试剂5.1氯化两面针碱：分析标准品，HPLC≥98%，化学式C21H18ClNO4，分子量383.83。5.2甲醇：色谱纯。5.3乙腈：色谱纯。6仪器6.1高效液相色谱仪：含四元泵、自动进样器、二极管阵列检测器、柱温箱和程序升温控制系统。6.2分析天平：精度0.1mg。5T/XXXXXXX—XXXX6.3超声波清洗仪：功率≥500W。7色谱条件AgilentEclipseC18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相20%乙腈-0.1%甲酸（三乙胺调节pH至4.5）；体积流量1.0mL/min；柱温30℃;检测波长273、284nm；进样量10μL。8测定步骤8.1制备样品溶液精密称定两面针药材粉末（粒径≤0.5mm）1.0g，置于具塞锥形瓶中，加6mL的70%甲醇置于超声波清洗仪中超声提取30min，重复3次，合并提取液，用70%甲醇定容至50mL量瓶中，用0.45μm微孔滤膜过滤，即得供试样品溶液。8.2制备标准品溶液用分析天平精密称取氯化两面针碱标准品适量，用70%甲醇溶解并定容至25mL，制备成0.05mg/mL的对照品贮备液，置于4℃冰箱中保存备用。然后从贮备液中分别精确量取5、2、1、0.4mL，用70%甲醇定容至10mL，即得0.025、0.01、0.005、0.002mg/mL的标准品溶液。8.3绘制标准曲线分别吸取10μL浓度为0.05、0.025、0.01、0.005、0.002mg/mL的氯化两面针碱标准品溶液依次注入高效液相色谱仪，按“7”的色谱条件，测定氯化两面针碱、木兰花碱、橙皮苷、盐酸血根碱、白屈菜红碱的峰面积As、A1、A2、A3和A4，以氯化两面针碱峰面积（As）为纵坐标，对照品浓度（Cs）为横坐标，绘制标准曲线。9结果计算9.1测定氯化两面针碱含量吸取10μL样品溶液注入高效液相色谱仪，按第“7”点的色谱条件，测定氯化两面针碱的峰面积（As根据标准曲线计算出氯化两面针碱浓度（Cs）。9.2计算木兰花碱、橙皮苷、盐酸血根碱、白屈菜红碱的含量9.2.1根据一测多评法确定木兰花碱、橙皮苷、盐酸血根碱、白屈菜红碱的相对校正因子f1、f2、f3、f4分别为0.376、0.210、0.825、1.301。9.2.2根据公式计算木兰花碱浓度（C1）：C1=f1×Cs×A1/As。9.2.3根据公式计算橙皮苷浓度（C2）：C2=f2×Cs×A2/As。9.2.4根据公式计算盐酸血根碱浓度（C3