金属铱配合物Ir(bzq)2(DIPPA)PF6合成及其抗肿瘤活性研究

金属铱配合物[Ir(bzq)2(DIPPA)]PF6合成及其抗肿瘤活性研究【摘要】目的：设计合成金属铱配合物[Ir(bzq)2(DIPPA)]PF6及研究其抗肿瘤活性。方法：以DIPPA为配体，设计并合成了金属铱配合物[Ir(bzq)2(DIPPA)]PF6，采用HR-MS、1HNMR，等方法对其进行表征，选取HCT116、LO2、B16、BEL-7402、A549、HepG2、Hela这七种细胞，用MTT法测定铱配合物对这7种细胞的毒性作用，通过细胞内吞和细胞周期阻滞实验，初步探索铱配合物对HCT116细胞的抗癌活性。结果：MTT体外毒性筛选实验表明铱配合物对所选的肿瘤细胞具有明显毒性，其中对HCT116细胞的毒性最强，因此将HCT116细胞作为后续实验的研究对象。细胞内吞实验表明铱配合物能够被HCT116细胞摄取，细胞周期实验表明铱配合物将HCT116细胞的周期阻滞在S期。结论：铱配合物[Ir(bzq)2(DIPPA)]PF6具有抑制HCT116细胞增殖的作用，并将HCT116细胞生长阻滞于S期。【关键词】铱配合物；细胞毒性；线粒体定位；抗癌活性SynthesisofMetalIridiumComplex[Ir(bzq)2(DIPPA)]PF6AntitumorActivityStudy[Abstract]Objective:Todesignandsynthesizethemetaliridiumcomplex[Ir(bzq)2(DIPPA)]PF6andtostudyitsantitumoractivity.Methods:UsingDIPPAasaligand,Designedandsynthesizedthemetaliridiumcomplex[Ir(bzq)2(DIPPA)]PF6,ByusingtheHR-MS,1HNMR,Andothermethodstocharacterthem.Subsequently,HCT116,LO2,B16,BEL-7402,A549,HepG2,Helawereselected,ThetoxiceffectsofiridiumcomplexesontheabovesevencellsweredeterminedbyMTTassay,Bythecellendocytosisandcellcyclearrestassay,InitiallyexploretheanticanceractivityofiridiumcomplexesinHCT116cells.Results:MTTinvitrotoxicityscreeningexperimentshowedthatiridiumcomplexesshowedobvioustoxicitytotheselectedtumorcells,whichwasthemosttoxictoHCT116cells,soHCT116cellswereusedasthefollowingexperiments.CellendocytosisexperimentsshowedthattheiridiumcomplexisefficientlyuptakenbyHCT116cells,andcellcycleexperimentsshowedthatiridiumcomplexesarrestthecycleofHCT116cellsinSphase.Conclusion:Iridiumcomplex[Ir(bzq)2(DIPPA)]PF6suppressesHCT116cellproliferationandblocksHCT116cellgrowthinSphase.[Keywords]IridiumComplexescytotoxicmitochondrial-localizedanticanceractivity目录TOC\o"1-3"\h\u1前言 12实验材料 前言随着现代生活质量的不断提高，人们生活水平也随之不断改善，对健康问题也更加有所关注。虽然如今科学技术和医疗水平与从前相比已经有了非常大的跃升，针对许多疑难杂症的研究也已经取得了较多突破，但由疾病给人们生活所带来的影响仍然如悬挂在人们头上的利刃一般挥之不去。迄今为止，癌症仍然是全球难以解决的疾病难题之一。据相关数据表明，到2025年，每年将有约2000万例新确诊的癌症患者[1]。癌症，又称为恶性肿瘤，是一类极具复杂性和多样性的疾病，恶性肿瘤的产生受多方面因素的影响，如遗传因素、环境污染、不良的生活习惯等都和癌症发病率不断升高有着密切的关系，癌症已经严重威胁着人们的生命健康[2]。全球的癌症病例数仍然在上升，一直以来，癌症的治疗一直是医学界关注的焦点，抗肿瘤药物研究与开发也一直是癌症治疗的重中之重，针对各种肿瘤的药物研发是迫在眉睫的任务。当下，治疗癌症常用的手段主要包括手术切除、放射治疗、化学药物治疗及分子靶向治疗等方法。迄今为止，临床上最常见的治疗手段仍然以高效的化学药物治疗为主，因为它具有疗效高等特点。传统化疗药物能够杀死肿瘤细胞，减缓癌细胞的生长扩散，使患者的生存期得到了延长的同时能够减轻患者的痛苦。分子靶向药物是一种针对特定分子靶点的抗癌药物，具有应用范围广泛、治疗效果好的优点。然而，对于一些没有明确靶点的肿瘤类型及患者，仍需依赖传统化疗药物的治疗方法。迄今为止，因化学治疗药物具有疗效高等特点，已有150多种化学治疗药物应用于临床[3]。随传统化学治疗药物使用的增多，传统化疗药物的缺陷也逐渐不断显现，如在治疗初期具有较好的治疗效果，而在治疗持续时间较长后导致产生耐药性，使得癌细胞无法彻底清除等。顺铂具有一些副作用，这促使人们去开发出更好的铂类药物[4]。卡铂和奥沙利铂虽然改善了顺铂本身的一些缺点，应用也变得更加广泛，但仍然无法完全克服组织毒性和肿瘤细胞耐药性等特点。研究者们便又致力于研究具有低毒性、靶向性高、溶解度好的抗恶性肿瘤的金属药物，期望弥补铂类金属药物的缺陷。在寻找新药物的过程中，研究者们发现金属铱化合物具有与铂类药物类似的功效，且毒性更低。由此，近年来，金属铱化合物走进了广大研究者们的视野中，国内外许多科学家们纷纷投入到对金属铱配合物的研究当中。典型的铱配合物主要是由铱为核心和配体形成的配合物，发光性能与常见的有机荧光团相比有更长发光寿命，可通过改变配体来调控铱配合物的性能。由此它们得到人们的关注，被广泛用于生物、医药等领域[5]。虽然铱配合物作用机制比较复杂且仍无法准确说明，但这并不妨碍广大医学工作者们将其视为一种极具抗肿瘤潜力的药物来研究与开发。铱(Ⅲ)配合物能靶向多种细胞组织并影响其结构和功能，表现出独特的抗肿瘤活性，是目前金属抗肿瘤药物特别是PDT光敏剂方向的研究热点[6]。虽然目前金属铱配合物的抗肿瘤机制还不能被完全阐明，但这并不妨碍广大研究者们将其作为一种潜在的抗肿瘤药物而对其进行更加深入的研究。多联吡啶环金属铱(III)配合物具有优异的发光和抗肿瘤性能。设计合成了一种多联吡啶配体PhbpyOH，利用该配体制备了铱(III)配合物Ir-NNC，紫外滴定实验和分子对接模拟结果表明，配合物Ir-NNC能进入DNA的小沟区，配合物可与BSA的ⅠB亚结构域内的谷氨酸和天冬氨酸发生氢键结合[7]。以乙基香兰素、1,10-菲罗啉、2-苯基吡啶和三氯化铱为原料，设计合成了一种新型的基于阳离子型铱配合物的荧光探针(LIr)，用荧光光谱法研究了探针LIr对黏度的响应性质，结果表明探针LIr识别黏度具有专一性，其荧光强度可增强约140倍，由于探针LIr对细胞的毒性较低，可将其应用于细胞成像研究[8]。Ma等人将铱化合物与两性聚合物PS-PEG-COOH结合，制备出了纳米铱化合物，经进一步的研究发现，该化合物能作用于癌细胞的线粒体内使ROS含量升高，从而诱导细胞凋亡[9]。Kuang等报道了以蒽醌三联吡啶衍生物作为主配体的铱配合物，该配合物在双光子PDT治疗厌氧肿瘤方面具有良好的应用前景[10]。以上均说明了金属铱配合物具有良好的应用前景，越来越多的作用靶点和作用机制被阐明也为铱及其配合物的抗肿瘤活性研究带来了众多可能，虽然铱配合物在抗癌领域的研究还处在初级阶段，但其在未来的应用前景非常广阔。综上所述，铂类生物抗癌活性的研究发现以及临床应用给了我们研究金属化合物抗癌带来了启示，同时在治疗基础上为了解决铂类药物的不足，研发设计了多种金属配合物铱配合物在抗肿瘤领域领域的应用前景可谓是非常广阔。本文正是基于铱配合物的广阔应用前景下，合成铱配合物[Ir(bzq)2(DIPPA)]PF6，通过对一系列细胞的体外毒性筛选，并通过进一步的实验探究其抗癌作用。与此同时，期待未来可得到疗效更好、副作用更小的抗肿瘤药物。实验材料2.1实验试剂生物化学试剂购买厂商实验细胞株AmericantypeculturecollectionDMEM培养基美国Gibco公司新生牛血清广州瑞舒生物有限公司胎牛血清美国Gibco公司胰蛋白酶广州瑞舒生物有限公司MTTBeyotime公司Ttiyon-100美国MP公司RNaseABeyotime公司JC-1试剂盒Beyotime公司ROS试剂盒Beyotime公司DHE试剂盒Beyotime公司NO试剂盒Beyotime公司PI广州康龙生物科技有限公司PVDF膜广州康龙生物科技有限公司AnnexinV-FITC/PI试剂盒Beyotime公司BCA工作液北京索莱宝科技有限公司WB一抗CellSignalingTechnology公司WB二抗广州瑞舒生物有限公司超敏型ECL试剂盒AffinityBiosciences结晶紫珠海嘉亿生物科技有限公司IrCl3·H2O昆明铂锐金属材料有限公司二氯甲烷广州化学试剂厂甲醇广州化学试剂厂丙酮广州化学试剂厂DMSO广州化学试剂厂六氟磷酸胺上海笛柏生物科技有限公司浓硫酸广州化学试剂厂浓硝酸广州化学试剂厂注：没有额外的说明，所有购买的试剂均为分析纯，可直接使用。2.2实验仪器实验仪器仪器型号生产厂家超净工作台SJ-CJ-2FD苏洁医疗器械有限公司二氧化碳培养箱371美国热电赛默飞光学生物显微镜CKX31-A11RC奥林巴斯公司低温高速离心机TGL-16M上海卢湘仪仪器有限公司高内涵细胞成像系统ImageXpressMcroXLSMOLECULARDEVICES磁力搅拌器RCTIKA仪器设备有限公司流式细胞仪A00-1-1102贝克曼库尔特生物有限公司电热鼓风干燥箱DHG-9140A上海朗仪器设备厂移液枪F2赛默飞世尔科技有限公司多功能酶标仪SpectraMaxM5e美国MolecularDevices公司显微镜CKX31-A11RC奥林巴斯公司旋转蒸发仪RV10digitalV德国IKA公司实验方法3.1配体及配合物的合成3.1.1配体及配合物合成路线配体DIPPA及金属铱配合物合成路线见图1图SEQ图\*ARABIC1配体DIPPA及金属铱配合物合成路线3.1.2配体DIPPA的合成称取0.198g（1mmol）的原料2-氨基-4，6-二氯嘧啶-5-甲醛和5，6-二氨基-1,10-邻二氮菲0.210g（1mmol），将原料于电子天平精确称量好后置于三颈烧瓶中，加入10ml乙醇充分搅拌，加热回流反应24h，并在反应过程中要根据反映情况进行补液，每次加入5-10ml乙醇溶液，待反应结束并冷却至室温，通过真空旋蒸干燥后得到深棕色粉末。3.1.3[Ir(bzq)2(DIPPA)]PF6的合成氩气保护状态下，取原料cis-[Ir(bzq)2Cl]20.234g(0.2mmol)和配体DIPPA0.152g(0.4mmol)，溶解在30ml二氯甲烷和15ml甲醇溶液，加热回流反应6h，待反应冷却至室温，向三颈烧瓶加入六氟磷酸铵（过量），充分搅拌30min，反应完全后对反应溶液进行抽滤得颜色较深的棕色溶液，将该溶液收集到烧杯中去除液体后得到棕色粉末。对所得产物进行进一步的纯化，用中性氧化铝柱层析（二氯甲烷/丙酮，6:1开始梯度洗脱，v/v），收集其中的黄带溶液，浓缩得到纯的产物。Yield:77%.C43H25Cl2IrN9PF6HRMS(CH3CN):m/z=930.1227([M-PF6]+).1HNMR(DMSO-d6,500MHz):9.13(q,1H),9.07(d,1H,J=8.25Hz),8.51(d,2H,J=8.85Hz),8.11-8.09(m,3H),8.02-7.97(m,6H),7.88(d,2H,J=8.85Hz),7.58(d,3H,J=7.90Hz),7.44-7.41(m,2H),7.22(t,2H,J=7.55Hz),6.28(d,2H,J=7.00Hz).3.2金属配合物体外抗肿瘤机制研究方法3.2.1细胞培养本实验所需细胞株包括HCT116、LO2、B16、BEL-7402、A549、HepG2、Hela。培养箱环境条件为37oC、95%相对湿度，二氧化碳浓度恒定为5%。采用DMEM培养基（含10%胎牛血清（FBS）,细胞密度生长至约80%时说明进入传代状态，取生长良好的对数期细胞进行后续实验。（上述均为贴壁细胞，传代时可先用胰酶消化，待细胞可从培养瓶壁大块脱落后，再用等量培养液终止消化，吹打细胞使其完全离壁即可。）3.2.2体外细胞毒性试验体外活性检测是筛选抗肿瘤药物的重要方法[11]。抗肿瘤药物体外筛选方法有许多，最常见的包括流式细胞仪法、同位素渗入法、MTT比色法、ATP荧光法和SRB法[12]。MTT比色法可快速、准确地检测活细胞的数量，且操作简单、重复性强，因此，它已经被广泛应用于细胞毒性、细菌活力检测和抗癌药物活性筛选等领域，取得了良好的效果[13]。MTT比色法是利用活细胞线粒体产生的琥珀酸脱氢酶将噻唑蓝还原为水不溶性蓝紫色甲臜晶体并沉积在细胞中，用二甲亚砜溶解甲臜，测量溶液在一定波长下的光吸收值，光吸收值与活细胞数量成正比，而死细胞则无此功能[14]。可根据公式计算出金属铱配合物的半数抑制浓度（IC50）。操作步骤：操作前所有实验仪器都要灭菌消毒。在无菌工作台上，选取具有良好生长状态的细胞接种到96孔板，于培养箱中培养24h。待细胞汇合度约70%，更换培养液。将铱配合物原液稀释成6个梯度浓度，每组设6个平行孔，将配制好的样液分别加入到6组中，使每个孔板浓度达到，用DMSO作对照，排除其它外界因素对本实验造成的干扰。将96孔板置于培养箱中培育48h。弃旧液，各孔中倒入90μL培养液和10μLMTT染色液(5mg/mL)，充分混合后在培养箱中孵育4h。倒掉旧液后在各孔中放100μLDMSO。为确保甲臜全部溶解，本实验使用了微量振荡器，时间约10分钟，至甲臜晶体完全溶解，最后再用酶联免疫检测仪测定在490nm波长下每孔的光吸收值，用下面公式中进行细胞存活率计算：以金属铱配合物的浓度和细胞存活率分别为横、纵坐标，绘制标准曲线。计算细胞存活率为50%时所对应的金属铱配合物浓度（IC50）。3.2.3细胞内吞本实验通过ImageXpressMcroXLS定性检测分析细胞对金属铱配合物的摄取程度。操作步骤：操作前所有实验仪器均需要灭菌消毒。取生长状态良好的HCT116细胞接种到12孔板，细胞贴壁后加入浓度为IC50的金属铱配合物放置于37℃培养箱中培养过夜。然后弃去培养液，用PBS润洗2-3遍，加入75%乙醇(300μL/孔)固定约20min。缓冲液洗涤2遍，用Hoechst染液在36oC下避光染色30min。缓冲液洗涤2遍，避光上机拍照检测。3.2.4细胞凋亡检测原理：采用AnnexinV-FITC-PI染液双染法对正常生长的细胞进行染色，然后利用流式细胞仪检测[15]即可得到早凋细胞（LR)，晚凋细胞（UR），坏死细胞(UL)及正常细胞(LL)之间的比例关系。操作步骤：操作前所有实验仪器均需要灭菌消毒。在无菌工作台上，将生长状态良好的HCT116细胞接种于6孔板中，每孔细胞数目约3×106，培养箱中培育24h,待孔板中的细胞生长至80%汇合的理想状态。实验组加入IC50的铱配合物，设置空白对照组，培养箱培养24h。缓冲液洗涤两次，胰液消化，收集细胞悬液，离心机离心5min(转速1000)，弃上清液，缓冲液洗涤细胞两遍。避光环境下依次向样品中加入195μL膜联结合液，8μLAnnexinV-FITC及11μLPI，混悬均匀，避光培养15min。混合均匀后倒入流式管中，用流式细胞仪进行检测。3.2.5线粒体定位原理：线粒体是一种具有半自主性的细胞器。许多研究结果表明一些药物能够将线粒体作为治疗疾病的靶点，进行研发新的治疗药物，从而取得较为良好的治疗效果。如原阿片碱能利用线粒体凋亡途径来抑制肝癌细胞[16]。可见线粒体可作为治疗癌症的一个关键靶点，可对其进行更加深入的研究，研发潜在抗癌药物。许多小分子荧光染料，如JC-1、Mito-TrackerRed（MTR）等商用染料，已用于细胞成像[17]。操作步骤：操作前所有实验仪器均需要灭菌消毒。取生长良好的细胞接种于12孔板，培养箱培养24h。加入IC50的铱配合物作用4h。接着PBS洗涤2遍，每孔加入200μL稀释后的MitoTrackerRed染液，于37oC条件下避光染色30min。PBS洗涤2遍，避光上机拍照。3.2.6线粒体膜电位变化检测原理：JC-1是一种应用于检测高等动物细胞线粒体膜电位变化的染料，在细胞内以红色聚合物和绿色单体这两种形式存在。可通过荧光颜色的变化情况检测线粒体膜电位变化[18]。操作步骤:操作前所有实验仪器均需要灭菌消毒。选取具有良好生长状态的细胞接种于12孔板，培养箱培养24h。然后加入IC50的铱配合物作用24h。缓冲液洗涤2遍，向阳性孔提前30min加入250μL稀释后的cccp(细胞凋亡诱导剂)染色半小时，洗涤两次，再每孔加入200μL稀释后的JC-1染液(双蒸水：5×缓冲液：JC-1＝160：40：1)，避光上机拍照。3.2.7细胞周期检测通常将细胞周期分为G0、G1、S、G2、M共计五个子周期。分裂间期由G1、S和G2期组成，分裂期由G0、M期组成。某些细胞受到来自体内或外界环境的刺激时，会出现细胞周期阻滞现象[19]。利用75%乙醇的高渗透性，可迅速透过细胞膜进入细胞内部，再用碘化丙啶（PI）染色。通过流式细胞仪测定，即得出细胞处于各生长周期的占比。PI可透过破损的细胞膜进入细胞内与DNA结合后发出红色荧光，荧光强度与DNA含量正相关[20]。操作步骤：操作前所有实验仪器均需要灭菌消毒。在无菌工作台上，选取具有良好生长状态的HCT116细胞接种于6孔板中，置于培养箱中培养至细胞生长密度约80%。将金属铱配合物加入实验组，培养箱培养24h。将细胞用缓冲液洗5次，然后用胰蛋白酶消化，最后离心。收集细胞，用PI染色，避光上机拍照。实验结果4.1MTT法体外细胞毒性试验本实验采用MTT比色法，用合成的金属铱配合物对上述7种细胞进行金属铱配合物的体外毒性筛选实验，筛选结果见表1。表1铱配合物的IC50(μM）筛选结果由表1可知，金属铱配合物对A549、B16、HCT116三种癌细胞的IC50值较小，说明该金属铱配合物对这些细胞均有一定的抑制作用。IC50值越小，说明金属铱配合物的抗癌作用越好。此外，该金属铱配合物对LO2细胞的IC50值较大，说明金属铱配合物对人正常肝脏细胞影响较小。由于该金属铱配合物对HCT116细胞较敏感，所以选用此细胞作为后续抗癌活性研究的细胞培养对象。4.2细胞内吞试验图2细胞内吞荧光由图2可知，Hoechst染料进入细胞后可发出蓝色荧光，HCT116细胞经过金属铱配合物处理后可发出明显的绿色荧光，并且能够与Hoechst染料发出的蓝色荧光相叠加。此实验结果表明，本实验所研究的金属铱配合物能被细胞有效摄取，从而能够在细胞内发挥活性抑制作用。4.3流式细胞仪检测细胞凋亡图3铱配合物作用24h后HCT116细胞凋亡百分比由图3可知，空白对照组中正常细胞占95.3%、早凋细胞占2.43%、晚凋细胞占2.13%。加入金属铱配合物作用24h后，正常细胞下降至84.4%，早凋细胞和晚凋细胞分别上升至12.3%和3.17%。由实验结果表明，与空白组相比，实验组的细胞凋亡率都有了较明显的提高，这说明本实验的金属铱配合物可诱导HCT116细胞发生凋亡。4.4线粒体定位为了探究该金属铱配合物是否作用于HCT116细胞的线粒体，本实验对其在细胞内线粒体的定位进行了定性分析。图4线粒体定位荧光如图4所示，红色荧光为线粒体定位探针标记的荧光，绿色荧光为金属铱配合物本身自发的荧光，二者荧光重叠表明该金属铱配合物能够定位于细胞线粒体，并以线粒体为靶点从而诱导肿瘤细胞凋亡，发挥其抗癌活性作用。4.5线粒体膜电位变化检测当细胞活性下降时，线粒体通透性增加。JC-1是一种能够特异性标记去极化线粒体的染料。通过红、绿荧光的比值来衡量线粒体去极化的比例，从而确定该金属铱配合物是否可使线粒体的膜电位发生变化而导致细胞凋亡。图5金属铱配合物作用24h后的线粒体膜电位变化图如图5所示，空白组红色荧光较强，而金属铱配合物的实验组的绿色荧光显著增强，实验结果表明，该金属铱配合物能作用于细胞线粒体，使线粒体膜电位下降，破坏线粒体的正常功能，从而导致HCT116细胞发生凋亡。4.6流式细胞仪检测细胞周期阻滞为了探究该金属铱配合物在诱导细胞凋亡的同时能否抑制肿瘤细胞的增殖，对该金属铱配合物作用HCT116细胞后的细胞周期进行检测。图6细胞周期阻滞观察图6可知，在空白组中S期中的细胞百分比为17.17%，G0/G1期的细胞百分比为71.67%，G2/M期的细胞百分比为11.16%；用IC50浓度的金属铱配合物作用24h后，G0/G1期的细胞百分比为67.0%，G2/M期的细胞百分比为7.64%，S期细胞百分比为25.29%，增长量为8.12%。由以上结果可知，该金属铱配合物主要将细胞生长周期阻滞在S期，从而抑制癌细胞生长。结论本实验中，以5，6-二氨基-1,10-邻二氮菲为原料合成的配体DIPPA，通过与前体化合物进行反应，最终合成了该金属铱配合物，对其进行纯化，采用HR-MS、1HNMR等方法对其进行表征。为了检测金属铱配合物在体外抑制癌细胞的活性效果，对所选取的7种细胞进行了MTT比色法体外细胞毒性试验，根据数据显示，金属铱配合物对所选取的几种癌细胞均有一定的抑制作用，其中，HCT116细胞的IC50最小，说明金属铱配合物对该细胞抑制活性最强，故选择HCT116细胞作为后续进行抗肿瘤活性检测实验。在细胞内吞实验中，由于细胞核染料Hoechst及金属铱配合物自身所发出荧光的不同，可发现金属铱配合物能够被细胞摄取从而在细胞内发挥作用。线粒体定位实验表明，该金属铱配合物可定位于线粒体，使线粒体膜电位降低，从而使细胞发生凋亡；此外，铱配合物作用于癌细胞后，早凋细胞和晚凋细胞百分比明显升高，表明金属铱配合物能够诱导癌细胞凋亡；细胞周期实验表明铱配合物将细胞分裂周期阻滞在S期，从而有效抑制癌细胞的生长。通过一系列的实验结果证明，金属铱配合物具有较好的抗肿瘤活性，可作为HCT116癌细胞的潜在抗癌药物被进一步研究。参考文献FerlayJacques,SoerjomataramIsabelle,DikshitRajesh,etal.CancerIncidenceandMortalityWorldwide:Sources,methodsandmajorpatternsinGLOBOCAN2012.[J].Internationaljournalofcancer,2015,136(5).秦静波，李竹青，孟翔鹤，等.大健康背景下中医体质学在恶性肿瘤防治中应用的思考[J].北京中医药大学学报，2021,44(09):818-823.徐焦，蒙凌华，卿晨.传统抗肿瘤药物的临床应用现状与发展[J].药学学报，2021,56(06):1551-1561.王冬博，聂晶，武慧娜，等.铂类抗肿瘤药物耐药机制的研究进展和应对策略[J].药学实践杂志，2022,40(04):302-308.田甜.基于金属铱(Ⅲ)配合物荧光探针的应用及研究进展[J].江西化工，2022,38(02):64-70.顾顺心，姜琴，施鹏飞.发光铱(Ⅲ)配合物抗肿瘤活性研究及应用[J].化学进展，2022,34(09):1957-1971.顾顺心，姜琴，施鹏飞.多联吡啶铱(Ⅲ)配合物的合成､发光及DNA/BSA结合活性[J].江苏海洋大学学报(自然科学版)，2022,31(01):70-78.祝梓琳，范中贤，缪梦昭，等.铱(Ⅲ)配合物乏氧肿瘤光动力治疗[J].化学进展，2021,33(0