用酶标仪检测食品及饲料中的三聚氰胺 酶标仪操作规程

第第页用酶标仪检测食品及饲料中的三聚氰胺酶标仪操作规程适用：利用酶联免疫吸附测定法用于食品及饲料中三聚氰胺的定量测定。检测原理：酶联免疫吸附测定法定量测定三聚氰胺残留。利用萃取液通过均质及振荡的方式提取样品中的三聚氰胺进行免疫测定。先将三聚氰胺酶适用：

利用酶联免疫吸附测定法用于食品及饲料中三聚氰胺的定量测定。

检测原理：

酶联免疫吸附测定法定量测定三聚氰胺残留。利用萃取液通过均质及振荡的方式提取样品中的三聚氰胺进行免疫测定。先将三聚氰胺酶标记物，样品萃取物及标准加入到已经包被有三聚氰胺抗体的微孔中开始反应。在30分钟的孵育过程中，样品萃取物中的三聚氰胺与三聚氰胺酶标记物竞争结合微孔中的三聚氰胺抗体，孵育30分钟后洗掉小孔中全部没有结合的三聚氰胺及三聚氰胺酶标记物。再用去离子水清洗结束后，每孔中加入清亮的底物溶液，结合的酶标记物将无色的底物转化为蓝色的物质。孵育30分钟后停止此反应，依据各孔颜色深浅进行数据读取。依据标准的颜色得出样品中三聚氰胺的的浓度值。

设备及材料：

1、具有450nm的酶标分析仪

2、8头或12头洗板机（选配）

3、三聚氰胺检测试剂盒

4、可吸取50ul的移液器及吸头及.吸水纸

5、蒸馏水或去离子水

6、20mMPBS：0.62gNaH2PO4—2H2O+5.73gNa2HPO4—12H2O+9gNaCl,蒸馏水定容至1000ml.

7、清洗液：0.62gNaH2PO4—2H2O+5.73gNa2HPO4—12H2O+9gNaCl,蒸馏水定容至1000ml.+0.5ml土温20样品

饲料前处理：（稀释倍数：20）

1、称1g饲料样品，加入4ml甲醇；

2、震荡1min，加入0.1g氯化钠；

3、4000转离心5min；

4、取上清液0.2ml加入到0.8ml20mMPBS中，混匀。

5、取150ul测定。

检测：

1、先将三聚氰胺酶标记物50ul，样品150ul及标准150ul加入到已经包被有三聚氰胺抗体的微孔中开始反应。

2、在30分钟的孵育过程中，样品萃取物中的三聚氰胺与三聚氰胺酶标记物竞争结合微孔中的三聚氰胺抗体；

3、孵育30分钟后用清洗液洗掉小孔中全部没有结合的三聚氰胺及三聚氰胺酶标记物。清洗四次后，放在桌上用吸水纸吸掉微孔板里多余的水份；

4、清洗结束后，每孔中加入100ul清亮的底物溶液，结合的酶标记物将无色的底物转化为蓝色的物质。

5、孵育30分钟后加入100ul停止液STOP停止此反应，依据各孔颜色深浅进行数据读取。依据标准的颜色得出样品中三聚氰胺的的浓度值

结果分析：

1、半定量的结果是由样品的吸光率与标准的吸光率的简单对比而来判定：样品的颜色比标准的颜色浅，则三聚氰胺的浓度比标准样的浓度高，样品的颜色比标准的颜色深则三聚氰胺的浓度比标准样的浓度低。

2、定量分析需要绘制以标准样的吸光率为X轴,以标准样的浓度的半对数为Y轴的曲线图。依据标准样。吸光率的点画成一直线,如此样品的光吸取率可在线上找到,与此相对应的Y轴则为样品的浓度,样品光吸取率。范围应比标准样的最底范围高,比最高范围低,即可说明此样品中三聚氰胺的含量大于500ppb或小于20ppb。

特点：

本产品为酶联免疫吸附测定法（ELISA）法，灵敏度高、检测成本低，可适用于生产及检验单位大批量快速筛查。

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酶标仪是对酶联免疫检测（EIA）试验结果进行读取和分析的专业仪器。酶联免疫反应通过偶联在抗原或抗体上的酶催化显色底物进行的，反应结果以颜色显示，通过显色的深浅即吸光度值的大小就可以判定标本中待测抗体或抗原的浓度。

酶标仪广泛地应用在临床检验、生物学讨论、农业科学、食品和环境科学中，特别在近几年中，由于大量的酶联免疫检测试剂盒的应用，使得酶标仪在生殖保健领域中应用越来越广泛，同时促进了生殖健康技术水平提高。

目前国内很多计生站系统开展了酶免检测项目，如：乙肝五项、艾滋病检测、优生优育系列检测、激素检测等。过去多数接受目测方法，报出的结果缺乏科学的依据。例如：某弓形虫检测试剂盒中，临界值规定为：阴性对比品的OD值2.5，通过目测无法判定标本孔的反应颜色是否超过临界值。肉眼进行两孔之间的颜色比较可能还行，但比较一孔的颜色是否超过另一孔颜色的2.5倍就不可能。

国内多家机构，如卫生部临床检验中心和计划生育系统等多次强调酶标仪的紧要性，并要求酶联免疫检测试剂应使用酶标仪判读，酶免试剂的质控也应使用酶标仪，并供应酶标仪测定的原始数据，而各厂家的试剂盒说明书没有是让用目测的。同时酶免检测的项目往往是一些