细菌典型生理生化鉴定技术

关于细菌典型生理生化鉴定技术第一节细菌的生化试验第2页,共147页，2024年2月25日，星期天一、概述（一）、什么是生化试验?

指通过利用生物化学的方法来测定微生物的代谢产物、代谢方式和条件等来鉴别细菌的类别、属种的试验。第3页,共147页，2024年2月25日，星期天（二）检验细菌的生化试验范围1、糖（醇）类代谢试验2、氨基酸和蛋白质代谢试验3、有机酸盐和铵盐的利用试验4、呼吸酶类试验5、毒性酶类试验第4页,共147页，2024年2月25日，星期天（三）生化试验的方法在培养物中加入某种底物与指示剂,经接种、培养后,观察培养基的pH值变化。在培养物中加入试剂，观察它们同细菌代谢产物所生成的颜色反应。根据酶作用的反应特性，测定酶的存在。根据细菌对理化条件和药品的敏感性，观察细菌的生长情况。第5页,共147页，2024年2月25日，星期天（四）生化试验的注意事项1、待检菌应是新鲜培养物。培养18~24h。2、待检菌应是纯种培养物。3、遵守观察反应的时间。观察结果的时间，多为24或48小时。4、应做必要的对照试验。5、提高阳性检出率，至少挑取2~3待检的疑似菌落分别进行试验。第6页,共147页，2024年2月25日，星期天二、糖醇类代谢试验（一）糖醇类发酵试验（二）葡萄糖氧化发酵（O/F）试验（三）V-P试验（四）甲基红（MethylRed）试验MR（五）七叶苷水解试验（六）甘油品红试验第7页,共147页，2024年2月25日，星期天（一）糖醇类发酵试验

原理：不同的细菌对各种糖醇的分解能力及所产生的代谢产物各不同，有的能分解多种糖醇，有的只能分解1~2种糖醇，有的分解糖醇能产酸产气，有的分解糖醇只产酸不产气，根据这些特点，可鉴别细菌。第8页,共147页，2024年2月25日，星期天1、常用的糖醇单糖：葡萄糖、甘露糖醇、木糖、半乳糖鼠李糖双糖：乳糖、蔗糖、麦芽糖三糖：棉子糖多糖：菊糖、肝糖、淀粉醇类：甘露醇、山梨醇、肌醇、卫茅醇第9页,共147页，2024年2月25日，星期天2、试验方法：

用接种针或环移取纯培养物少许，接种于糖发酵管中，若为半固体培养基，则用接种针作穿刺接种。置36±1.0℃

培养1~3天，每天观察结果。第10页,共147页，2024年2月25日，星期天3、结果观察和记录记录：产酸不产气，阳性，以“+”表示产酸产气，阳性，以“⊕”表示不产酸产气，阴性，以“-”表示第11页,共147页，2024年2月25日，星期天气泡导管气泡气泡阳性阳性阴性培养基变为黄色培养基未变色、无气泡产生第12页,共147页，2024年2月25日，星期天（二）葡萄糖氧化发酵（O/F）试验

1、原理：细菌对葡萄糖的分解，分为氧化型和发酵型。

氧化型细菌在有氧的条件下才能分解葡萄糖，无氧的条件下不能分解葡萄糖；发酵型细菌在有氧无氧条件下均可分解葡萄糖；不分解葡萄糖的细菌称为产碱型。根据糖管的色泽变化可鉴别细菌。第13页,共147页，2024年2月25日，星期天2、方法取待检菌，以穿刺法接种于两管葡萄糖半固体培养基上，在其中一管加入一层（约1cm）灭菌的液体石蜡以隔绝空气，在37℃培养2~4h天，每天观察结果。第14页,共147页，2024年2月25日，星期天3、结果观察与记录封油管未封油管发酵型产酸（黄色）产酸（黄色）氧化型不产酸（绿色）产酸（黄色）产碱型不产酸（绿色）不产酸（绿色）第15页,共147页，2024年2月25日，星期天（三）V-P试验1、原理：某些细菌能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸经缩合、脱羧生成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中的氧氧化为双乙酰，在α-萘酚和肌酸的催化作用下，双乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称V－P（+）反应。第16页,共147页，2024年2月25日，星期天2、试验方法（1）奥梅拉（O’Meara）法（2）贝立脱（Barritt）氏法（3）快速法

第17页,共147页，2024年2月25日，星期天（１）奥梅拉法：

将试验菌接种于磷酸盐葡萄糖蛋白胨水培养基，于36±1℃培养48h，每1mL培养液加奥梅拉O’Meara试剂0.1mL，摇动试管1~2min，静置于37℃恒温箱4h，或在48~50℃水浴放置2h后判定结果。第18页,共147页，2024年2月25日，星期天（2）贝立脱法：

将试验菌接种于磷酸盐葡萄糖蛋白胨水培养基，于36±1℃培养2天，每2mL培养液先加入6%a-萘酚纯酒精溶液1mL，再加40%氢氧化钾水溶液0.4mL，摇动2~5min，阳性菌常立即呈现红色，若无红色出现，静置于室温或36±1℃培养4h，如显现红色为阳性，呈黄色或有类似铜色者，可判定为阴性。第19页,共147页，2024年2月25日，星期天（3）快速法：

将0.5%肌酸溶液2滴放于小试管中，挑取产酸反应的三糖铁琼脂斜面培养物一接种环，乳化接种于其中，加入5%α-萘酚3滴，40%氢氧化钠水溶液2滴，振动后放置5min，判定结果。不产酸的培养物不能使用。第20页,共147页，2024年2月25日，星期天3、结果观察与记录（1）发酵管出现红色者，为阳性，记V-P+（2）发酵管为黄色或铜绿色者，为阴性，记V-P-第21页,共147页，2024年2月25日，星期天（四）甲基红试验（MR）1、原理细菌分解葡萄糖产生丙酮酸后，由于代谢的途径不同，有的细菌可使丙酮酸转化生成乳酸、琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物，使培养基pH值下降至pH4.5以下，使甲基红指示剂变红色，为甲基红试验阳性；有的细菌使丙酮酸脱羧后形成酮、醇类中性产物，培养液pH＞5.4，甲基红指示剂呈桔黄色，为甲基红试验阴性。第22页,共147页，2024年2月25日，星期天2、试验方法

挑取新鲜的待试培养物少许，接种于磷酸盐葡萄糖蛋白胨水培养基，于36±1℃或30℃（以30℃较好）培养3~5天，从第48h起，每日取培养液1mL，加入甲基红指示剂1~2滴，立即观察结果。第23页,共147页，2024年2月25日，星期天MR-VP试验原理及照片V-P第24页,共147页，2024年2月25日，星期天3、结果观察与记录（1）呈鲜红色或橘红色为阳性，呈淡红色为弱阳性，记MR+；（2）呈橘黄色或黄色为阴性，记MR-，迄至发现阴性并培养至第5天仍为阴性，即可判定结果。第25页,共147页，2024年2月25日，星期天MR+MR-第26页,共147页，2024年2月25日，星期天（五）七叶苷水解试验１、原理：七叶苷被细菌分解后，生成葡萄糖和七叶素，七叶素与Fe2+结合，生成黑色化合物，使培养基呈黑色，以此鉴别细菌。第27页,共147页，2024年2月25日，星期天2、试验方法

将待试纯培养物少许，接种于七叶苷培养基，于36±1℃培养24h,观察结果。第28页,共147页，2024年2月25日，星期天3、结果观察与记录（1）培养基变为黑色或棕黑色者，为阳性，记录为+（2）培养基不变色者，为阴性，记录为-第29页,共147页，2024年2月25日，星期天（六）甘油品红试验1、原理：某些细菌可分解甘油成为丙酮酸，并进一步脱羧生成乙醛，乙醛与无色品红生成醌式化合物，呈深紫红色，以此鉴别细菌。第30页,共147页，2024年2月25日，星期天2、试验方法

取待检菌的新鲜纯培养物，接种于甘油品红肉汤培养基中，于36±1℃培养8天,并用未接种的培养基在相同条件下培养作为阴性对照，观察结果。第31页,共147页，2024年2月25日，星期天3、结果观察与记录（1）出现紫色或紫红色者,为阳性，记录为+；（2）与对照管颜色相同者,为阴性，记录为-第32页,共147页，2024年2月25日，星期天（六）甘油品红试验1、原理：某些细菌可分解甘油成为丙酮酸，并进一步脱羧生成乙醛，乙醛与无色品红生成醌式化合物，呈深紫红色，以此鉴别细菌。第33页,共147页，2024年2月25日，星期天2、试验方法：

取待检菌的新鲜纯培养物，接种于甘油品红肉汤培养基中，于36±1℃培养8天,并用未接种的培养基在相同条件下培养作为阴性对照，观察结果。第34页,共147页，2024年2月25日，星期天3、结果观察与记录（1）出现紫色或紫红色者,为阳性，记录为+；（2）与对照管颜色相同者,为阴性，记录为-第35页,共147页，2024年2月25日，星期天（一）靛基质（吲哚）试验（二）H2S试验（三）尿素酶试验（四）氨基酸脱羧酶试验（五）苯丙氨酸脱氨酶试验（六）明胶（Gelatin）液化试验三、氨基酸和蛋白质代谢试验第36页,共147页，2024年2月25日，星期天（一）靛基质试验1、原理：某些细菌含有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸，生成靛基质（吲哚）。吲哚与对二甲氨基苯甲醛结合，可形成红色化合物，即玫瑰吲哚，以此鉴别细菌。第37页,共147页，2024年2月25日，星期天2、试验方法：所用试剂:（1）柯凡克(Kovacs)试剂;（2）欧—波试剂第38页,共147页，2024年2月25日，星期天

将待检菌小量接种于培养基中，于36±1℃培养24~48h时后，加入柯凡克试剂数滴，轻摇试管，呈红色者为阳性。或沿试管壁缓慢加入欧-波试剂约0.5mL覆盖液面，两液接触处呈现玫瑰红色者，为阳性反应，无红色者为阴性反应。第39页,共147页，2024年2月25日，星期天靛基质试验原理及照片靛基质+第40页,共147页，2024年2月25日，星期天3、结果观察与记录呈现玫瑰红色，为阳性反应，记+无红色者，为阴性反应，记-第41页,共147页，2024年2月25日，星期天（二）硫化氢（H2S）试验1、原理：某些细菌可分解培养基中的含硫氨基酸或含硫化合物，产生硫化氢，硫化氢遇铅盐或铁盐可生成黑色沉淀物PbS或FeS，以此鉴别细菌。第42页,共147页，2024年2月25日，星期天2、试验方法：

挑取待检菌，用穿刺接种法接种于三糖铁培养上，于36±1℃培养24~48h，观察结果。第43页,共147页，2024年2月25日，星期天3、结果观察与记录培养基底部呈黑色，为阳性，记+培养基底部无黑色，为阴性，记-第44页,共147页，2024年2月25日，星期天（三）尿素酶试验1、原理：某些细菌能产生尿素酶，将尿素分解产生氨，氨使培养基变为碱性，使培养基中的酚红指示剂呈粉红色，培养基由黄色变为红色，为阳性。以此鉴别细菌。

第45页,共147页，2024年2月25日，星期天2、试验方法：

挑取大量培养18~24h的待试菌，浓密涂布接种于尿素琼脂斜面上，不要到达底部，留底部作变色对照。培养2、4和24h分别观察一次结果，培养基变为粉红色为阳性，颜色不变者为阴性。如阴性应继续培养至4天，作最终判定。第46页,共147页，2024年2月25日，星期天尿素酶试验图阳性第47页,共147页，2024年2月25日，星期天3、结果观察与记录培养基变呈粉红色，为阳性，记+培养基颜色不变，为阴性，记-第48页,共147页，2024年2月25日，星期天（四）氨基酸脱羧酶试验1、原理：某些细菌能产生氨基酸脱羧酶,可使赖氨酸、鸟氨酸生产脱羧作用,生成胺类物质和CO2。胺类物质使培养基呈碱性变紫色，为阳性,如呈黄色为阴性，以此鉴别细菌。第49页,共147页，2024年2月25日，星期天2、试验方法

取待检菌，分别接种于含有氨基酸的培养基内和不含氨基酸的对照培养基内，在36±1℃培养1~4天，每天观察结果。第50页,共147页，2024年2月25日，星期天3、结果观察与记录试验管呈紫色，对照管呈黄色，为阳性，记+试验管、对照管都呈黄色，为阴性，记-第51页,共147页，2024年2月25日，星期天试验管对照管阳性+阴性-对照管变黄试验管变黄第52页,共147页，2024年2月25日，星期天阳性反应试验管颜色变化过程紫色→黄色→紫色原理：对照管呈黄色，说明有细菌生长。在培养的早期（10~12h），细菌发酵葡萄糖产酸使培养液pH下降，指示剂溴甲酚紫由紫色变为黄色，以后由于氨基酸脱羧生成胺，pH又回升至碱性，指示剂显紫色。第53页,共147页，2024年2月25日，星期天阳性反应试验管颜色变化过程：紫色→黄色→紫色第54页,共147页，2024年2月25日，星期天（五）苯丙氨酸脱氨酶试验1、原理：某些细菌可产生苯丙氨酸脱氨酶，使苯丙氨酸脱去氨基，形成苯丙酮酸，苯丙酮酸与氯化铁作用生成绿色化合物，以此鉴别细菌。第55页,共147页，2024年2月25日，星期天2、试验方法从待检菌琼脂斜面上挑取大量培养物，接种于苯丙氨酸培养基上，在36±1℃培养18~24h后，加入氯化铁溶液4~5滴，转动试管，使试剂与菌苔表面充分接触，立即观察结果。第56页,共147页，2024年2月25日，星期天3、结果观察与记录试验管立即出现绿色，为阳性，记+无色为阴性，记-。第57页,共147页，2024年2月25日，星期天加氯化铁试剂出现绿色+第58页,共147页，2024年2月25日，星期天（六）明胶液化试验

1、原理有些细菌具有明胶酶（亦称类蛋白水解酶），能将明胶先水解为多肽，又进一步将多肽水解为氨基酸，明胶失去凝胶性质，使培养基由固态变为液态。第59页,共147页，2024年2月25日，星期天2、试验方法

挑取培养18~24h的待试菌，以较大量穿刺接种于明胶高层约2/3深度。于20~22℃培养7~14天。明胶高层亦可培养于36±1℃。另取一支未接种的培养基一同培养作对照，每天取出两支试管，放入冰箱放置20~30min后，再观察结果。第60页,共147页，2024年2月25日，星期天3、结果观察与记录明胶液化，为阳性，+。明胶凝固，为阴性，-。第61页,共147页，2024年2月25日，星期天四、有机酸盐和铵盐的利用试验柠檬酸盐利用试验丙二酸盐利用试验第62页,共147页，2024年2月25日，星期天（一）枸橼酸盐利用试验

1、原理：某些细菌能利用柠檬酸盐作为唯一碳源，分解枸橼(柠檬)酸盐生成碳酸盐；同时分解培养基的铵盐生成氨，使培养基变为碱性，使指示剂溴麝香草酚蓝由淡绿转为深蓝色，为阳性。第63页,共147页，2024年2月25日，星期天2、试验方法

挑取待检菌，在西蒙柠檬酸盐培养基斜面上密集划线接种，在36±1℃培养1~4天，每天观察结果。第64页,共147页，2024年2月25日，星期天3、结果观察与记录斜面有菌苔生长，培养基斜面变为蓝色或深蓝色，为阳性，记+；无菌苔生长，培养基斜面仍为绿色者，为阴性，记-第65页,共147页，2024年2月25日，星期天柠檬酸盐试验原理及斜面照片阳性+第66页,共147页，2024年2月25日，星期天（二）丙二酸盐利用试验1.原理:

某些细菌可以利用培养基中的丙二酸盐作为唯一碳源,丙二酸盐被分解成碳酸钠,使培养基变为碱性,培养基由草绿色变成蓝色，为阳性，以此鉴别细菌。第67页,共147页，2024年2月25日，星期天2、试验方法

取待检菌新鲜纯培养物，接种于丙二酸钠培养基上，于36±1℃培养48h，观察结果。第68页,共147页，2024年2月25日，星期天3、结果观察与记录培养基由草绿色变成蓝色,为阳性,记+;培养基无颜色变化,为阴性,记-第69页,共147页，2024年2月25日，星期天五、呼吸酶类试验氧化酶试验过氧化氢酶试验硝酸盐还原试验氰化钾试验第70页,共147页，2024年2月25日，星期天（一）氧化酶试验1.原理:

氧化酶使细胞色素C氧化后，氧化型细胞色素C再使盐酸二甲基对苯二胺氧化，使生成玫瑰红色到暗紫色的醌类化合物,再和α-萘酚结合,生成吲哚酚蓝,呈蓝色反应，为阳性。第71页,共147页，2024年2月25日，星期天试剂1%α-萘酚-乙醇液1%盐酸二甲基对苯二胺第72页,共147页，2024年2月25日，星期天2、试验方法用滴管直接滴加1%盐酸二甲基对苯二胺试剂1~2滴在培养物上,再加入1%α-萘酚-乙醇液1~2滴,在30秒内判定试验结果。第73页,共147页，2024年2月25日，星期天3、结果观察与记录在30秒内呈蓝色反应,为阳性,记+不变色或为红色者,为阴性,记-第74页,共147页，2024年2月25日，星期天成蓝色为+不变色或为红色为-第75页,共147页，2024年2月25日，星期天（二）过氧化氢酶试验原理：某些细菌可分泌过氧化氢酶，加入过氧化氢后，可将过氧化氢分解生成水和氧气，产生气泡，即为阳性反应。第76页,共147页，2024年2月25日，星期天2、试验方法挑取固体培养基上的新鲜菌落一环，置于洁净玻片上（或试管），滴加3%过氧化氢液数滴，或在琼脂斜面培养物上直接滴加过氧化氢液，立即观察结果。第77页,共147页，2024年2月25日，星期天3、结果观察与记录产生气泡者，为阳性，记+不产生气泡者，为阴性，记-第78页,共147页，2024年2月25日，星期天（三）硝酸盐还原试验1、原理：某些细菌具有还原硝酸盐的能力，可将硝酸盐还原为亚硝酸盐，在酸性条件下，亚硝酸盐可生成亚硝酸，亚硝酸与对氨基苯磺酸作用，生成重氮苯磺酸，重氮苯磺酸再与α-萘胺作用，生成红色的化合物，呈红色反应，为阳性反应。第79页,共147页，2024年2月25日，星期天试剂A、对氨基苯磺酸试剂B、α-萘胺试剂第80页,共147页，2024年2月25日，星期天2、试验方法取待检菌新鲜纯培养物，在硝酸盐培养基上接种，在36±1℃培养1~4天，每天取2mL培养液,加入A、B试剂的等量混合物各二滴混匀，立即观察结果。第81页,共147页，2024年2月25日，星期天3、结果观察与记录呈现红色，为阳性，记+若无红色出现，为阴性，记-第82页,共147页，2024年2月25日，星期天（四）氰化钾试验1.原理：氰化钾是细菌呼吸酶系统的抑制剂,可与呼吸酶作用使酶失去活性,抑制细菌的生长,但有的细菌在一定浓度的氰化钾存在时仍能生长,以此鉴别细菌.第83页,共147页，2024年2月25日，星期天2、试验方法

取培养20～24h的营养肉汤培养液或菌落1环，接种至对照培养基及氰化钾培养基内，立即以橡胶塞塞紧，36±1℃培养24～48h，观察结果。第84页,共147页，2024年2月25日，星期天3、结果观察与记录对照管有菌生长，试验管有菌生长为阳性，记+。对照管有菌生长，试验管无菌生长为阴性。记-。第85页,共147页，2024年2月25日，星期天

六、毒性酶类试验溶血试验链激酶试验卵磷脂酶试验血浆凝固酶试验第86页,共147页，2024年2月25日，星期天（一）溶血试验1、原理：某些细菌在代谢过程中能产生溶血素，可使人或动物的红细胞发生溶解，不同的细菌有不同的溶血反应，借此可鉴别细菌。第87页,共147页，2024年2月25日，星期天2、试验方法平板法试管法第88页,共147页，2024年2月25日，星期天平板法

将培养物接种于血平板培养基上，36±1℃培养24～48h，观察结果。第89页,共147页，2024年2月25日，星期天溶血试验的溶血类型及现象（1）α（甲型）溶血:菌落周围出现较窄的半透明的草绿色溶血环。（2）β（乙型）溶血:菌落周围出现较宽的透明溶血环。（3）γ（-丙型）溶血:菌落周围无溶血环。第90页,共147页，2024年2月25日，星期天甲型（α-）溶血乙型（β-）溶血丙型（γ-）溶血第91页,共147页，2024年2月25日，星期天试管法

将待检菌培养液与等量的2%羊血球混合，在36±1℃培养16～18h，观察结果。如溶血，培养液可出现透明状。第92页,共147页，2024年2月25日，星期天3、结果观察与记录有溶血现象，为阳性，记+；无溶血现象，为阴性，记-第93页,共147页，2024年2月25日，星期天（二）链激酶试验1、原理：

A群链球菌群能产生链激酶，该酶能使血液中的纤维蛋白酶原变成纤维蛋白酶，而后溶解纤维蛋白，使血凝块溶解,为阳性反应。此试验用于测定链球菌的致病性。阳性反应具有致病性。第94页,共147页，2024年2月25日，星期天2、试验方法

吸取草酸钾血浆0.2mL(0.01g草酸钾加5mL兔血浆混匀，经离心沉淀，吸取上清液)，加入0.8mL生理盐水，混匀后，再加入待检菌36℃下培养18-24h肉汤培养物0.5mL和0.25％氯化钙0.25mL，混匀，放37℃水浴中，2min观察一次。第95页,共147页，2024年2月25日，星期天

待血浆凝固后继续观察并记录溶化时间。如2h内不溶化，继续放置24h后观察。同时用肉浸液肉汤做阴性对照，用已知的链激酶阳性的菌株做阳性对照。第96页,共147页，2024年2月25日，星期天3、结果观察与记录如凝块全部溶化,为阳性+，凝块24h仍不溶化,为阴性-第97页,共147页，2024年2月25日，星期天（三）卵磷脂酶试验1、原理：某些微生物能产生卵磷脂酶，在钙离子存在时，能迅速分解卵磷脂，生成不溶性甘油酯和水溶性磷酸胆碱，在卵黄琼脂平板上菌落周围形成不透明的乳浊环或混浊白环，或使血清、卵黄液变混浊，以此鉴别细菌。第98页,共147页，2024年2月25日，星期天2、试验方法（1）卵黄平板法：

A法：将待检菌培养物划线接种或点种于卵黄琼脂平板上，36±1℃培养3～6h，观察结果。

第99页,共147页，2024年2月25日，星期天菌落白色混浊环，第100页,共147页，2024年2月25日，星期天B法：先用卵黄磷脂酶抗血清将平板涂一半，置于36℃待干后，将待检菌接种于未涂抗血清的一半卵黄琼脂平板上，再转划已涂过抗血清的一半，36±1℃厌氧培养24～48h，观察结果。在未涂抗血清的一半平板上，菌落周围形成较大的不透明乳白色混浊区，在涂抗血清的一半平板上，菌落周围无不透明混浊区，为阳性。两边均无不透明区，为阴性。第101页,共147页，2024年2月25日，星期天菌落周围无混浊白环菌落周围有混浊白环乳糖卵黄琼脂平板,借以确定该菌可否产生卵磷脂酶。卵磷脂酶具抗原性，其活性可被相应抗血清所抑制，第102页,共147页，2024年2月25日，星期天（2）卵黄盐水法

将庖肉培养基培养物经除菌过滤，收集滤液。在两支灭菌试管内，每管加入1%卵黄盐水0.4mL,在一管中加入滤液0.2mL，另一管加入生理盐水0.2mL作对照。在36℃水浴中，经2h、4h、8h、24h观察结果。管底发生混浊沉淀，对照管无沉淀者，为阳性。第103页,共147页，2024年2月25日，星期天3、结果观察与记录菌落周围形成较大的不透明区，为阳性。两边均无不透明区，为阴性。管底发生混浊沉淀，对照管无沉淀者，为阳性两管无沉淀者，为阴性。第104页,共147页，2024年2月25日，星期天（四）血浆凝固酶试验1、原理：致病性葡萄球菌能产生血浆凝固酶，可使血浆中的纤维蛋白原转变成纤维蛋白，附着在细菌的表面，形成凝块；或作用于血浆凝固酶原，使它成为血浆凝固酶，从而使抗凝的血浆发生凝固现象,为阳性。第105页,共147页，2024年2月25日，星期天2、试验方法（1）玻片法：取清洁干燥载玻片，一端滴加一滴生理盐水，另一端滴加一滴兔（人）血浆，挑取菌落分别与生理盐水和血浆混合，5min内,如血浆内出现团块或颗粒状凝块，而盐水滴仍呈均匀混浊，则为阳性;如两者呈均匀混浊，无凝固则为阴性。第106页,共147页，2024年2月25日，星期天有凝块均匀混浊血浆生理盐水血浆凝固酶试验第107页,共147页，2024年2月25日，星期天阳性反应阴性反应不凝固少量、零散凝固明显的块状凝固巨大块凝固完全凝固，倒置不流动第108页,共147页，2024年2月25日，星期天金黄色葡萄球菌血浆凝固酶实验

第109页,共147页，2024年2月25日，星期天3、试管法的结果观察与记录空白对照管的血浆流动自如，阳性对照管血浆凝固，试验管血浆凝固者为阳性；均无凝固则为阴性。第110页,共147页，2024年2月25日，星期天三糖铁（TSI）试验第111页,共147页，2024年2月25日，星期天1、三糖铁试验的原理

如果细菌可利用乳糖和蔗糖发酵产酸或产酸产气，培养基全部变黄；如果只可以利用葡萄糖，葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面最后为红色，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，仍保持黄色。如果细菌又能分解含硫化合物，产生硫化氢，培养基底部变黑。第112页,共147页，2024年2月25日，星期天制好的培养基对照管斜面红色，底面黄色培养基全黄色斜面、底部黄色，并产生H2S斜面红色，底部黄色，产生H2S底面黄色，并产生CO2第113页,共147页，2024年2月25日，星期天2、试验方法

以接种针挑取待试菌可疑菌落或纯培养物，穿刺接种并涂布于斜面，置36±1℃培养18~24h，观察结果。第114页,共147页，2024年2月25日，星期天下面照片所示2-3-4，可能是大肠杆菌、沙门氏菌还是志贺氏菌？2－志贺氏菌3－沙门氏菌4－大肠杆菌第115页,共147页，2024年2月25日，星期天第二节血清学试验血清学反应：指相应的抗原与抗体在体外一定条件下作用，所出现肉眼可见的沉淀、凝集现象。第116页,共147页，2024年2月25日，星期天一、抗原与抗体第117页,共147页，2024年2月25日，星期天（一）抗原1、抗原的概念抗原(Ag)：是指凡能刺激机体免疫系统诱导免疫应答，并能与应答产生的抗体或致敏淋巴细胞发生特异反应的物质。第118页,共147页，2024年2月25日，星期天2、抗原的特性免疫原性反应原性第119页,共147页，2024年2月25日，星期天（二）抗体1、抗体：是指机体内的淋巴系统细胞在抗原物质的激发下，所合成的一种具有特异性免疫功能的球蛋白(免疫球蛋白)。

第120页,共147页，2024年2月25日，星期天第121页,共147页，2024年2月25日，星期天2、抗体的理化性质（1）抗体是球蛋白（2）免疫球蛋白第122页,共147页，2024年2月25日，星期天兔血清电泳分离图第123页,共147页，2024年2月25日，星期天经对不同免疫血清的电泳分析，超速离心分析和分子量测定等方法，发现大部分抗体活性存在于γ球蛋白内，但有小部分抗体活性可存在于β球蛋白内。它们的离心常数分别为7S和平共处19S，分子量分别为16万和90万。因此它们分别被命名为7Sγ球蛋白分子（16万）19Sβ2巨球蛋白分子(β2M,90万)和β2A球蛋白分子，所以从早期对抗体性质的研究证明抗体不是由均质性球蛋白组成，而是由异性球蛋白组成。第124页,共147页，2024年2月25日，星期天（三）抗原抗体反应抗原抗体反应：是指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应

第125页,共147页，2024年2月25日，星期天第一节抗原抗体反应的原理

抗原抗体反应:指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。物质基础:

抗原表位与抗体高变区间的互补结合抗原表位与抗体高变区的沟槽分子表面的结合抗原抗体之间的结合力亲水胶体转化为疏水胶体第126页,共147页，2024年2月25日，星期天静电引力（electrostaticforces）范德华引力:作用最小（vanderWaalsinteractions）氢键:最具特异性（hydrogenbond）疏水作用力:作用最大（hydrophobicinteractions）

抗原抗体结合力示意图一、抗原抗体结合力第127页,共147页，2024年2月25日，星期天抗体结合部位与抗原表位之间结合的强度亲合力(avidity)抗原抗体亲合力示意图第128页,共147页，2024年2月25日，星期天抗体分子上一个抗原结合点与对应的抗原决定簇之间相适应而存在着的引力，是抗原抗体间固有的结合力亲和力(affinity)抗原抗体亲和力示意图二、抗原抗体的亲和力和亲合力第129页,共147页，2024年2月25日，星期天

可见反应抗原抗体复合物

(疏水胶体)电解质

抗原(亲水胶体)

抗体(亲水胶体)

+三、亲水胶体转化为疏水胶体第130页,共147页，2024年2月25日，星期天第二节抗原抗体反应的特点特异性可逆性比例性阶段性第131页,共147页，2024年2月25日，星期天特异性：抗原与抗体结合反应的专一性抗原抗体反应特异性示意图分子基础:抗原表位与抗体分子高变区之间空间构型的互补性一、特异性第132页,共147页，2024年2月25日，星期天

第133页,共147页，2024年2月25日，星期天两种不同的抗原分子具有部分相同或类似结构的抗原表位，可与彼此相应的抗血清发生反应交叉反应（crossreactions）抗原抗体交叉反应示意图第134页,共147页，2024年2月25日，星期天二、可逆性可逆性：抗原与相应抗体结合成复合物后，在一定条件下又可解离为游离抗原与抗体的特性影响因素：抗体对相应抗原的亲合力－亲合力越高，结合越牢固，越不易解离环境因素对复合物的影响－pH、离子强度

第135页,共147页，2024年2月25日，星期天前带(prezone)：抗体过量后带(postzone)：抗原过量等价带(equivalencezone)：

抗原抗体比例合适

抗原抗体反应比例性示意图比例性：抗原与抗体发生可见反应需遵循一定的量比关系三、比例性第136页,共147页，202