病原性球菌及检验

关于病原性球菌及检验1.简述病原性球菌的概念及种类。2.熟悉常见病原性球菌的主要生物学特性、临床意义。3.说出葡萄球菌、链球菌、脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌的检验程序和检验方法。

学习目的与要求第2页,共120页，2024年2月25日，星期天

对人有致病性的球菌主要引起化脓性炎症,又称化脓性球菌。主要包括有1、G+球菌：葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌。2、G-球菌：脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、卡他布兰汉菌等。第3页,共120页，2024年2月25日，星期天第一节葡萄球菌属

(Staphylococcus)

第4页,共120页，2024年2月25日，星期天（一）形态与染色

G+，球形，无鞭毛、无芽孢，呈葡萄串状排列。一、生物学特性第5页,共120页，2024年2月25日，星期天（二）培养特性

营养：要求不高，耐盐。

液体：均匀浑浊生长

普通琼脂平板：

血液琼脂平板：高盐甘露醇平板：金黄色葡萄球菌为淡橙黄色菌落；其他葡萄球菌为白色菌落。第6页,共120页，2024年2月25日，星期天（三）生化反应

活泼

分解多种糖类、蛋白质、氨基酸。(如：葡萄糖，麦芽糖，蔗糖，甘露醇）

触酶（＋）（区别于链球菌属）第7页,共120页，2024年2月25日，星期天（四）抗原构造１、蛋白抗原（ＳＰＡ）２、多糖抗原

金黄色葡萄球菌：核糖醇磷壁酸（检测磷壁酸Ａｂ有助于金葡菌感染诊断）凝固酶（－）：甘油磷壁酸第8页,共120页，2024年2月25日，星期天（五）分类:３２个种及亚种１、按色素分类：金、白、柠２、按凝固酶分类：凝固酶阴性、凝固酶阳性葡萄球菌３、按噬菌体分类：金葡菌分为5群26型

4.据色素、生化反应分：

金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌第9页,共120页，2024年2月25日，星期天

三种葡萄球菌的主要性状第10页,共120页，2024年2月25日，星期天（六）抵抗力无芽胞菌中最强，耐干燥，对石炭酸、升汞、龙胆紫敏感。易产生耐药性变异，如：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）。MRSA常呈多重耐药，对青霉素、氧氟沙星及红霉素的敏感率分别为1.3%、3%及14%。第11页,共120页，2024年2月25日，星期天

长期住院、反复使用各种广谱抗菌药物、烧伤或有伤口的病人及与MRSA定植或感染的病人接触都是造成院内MRSA流行的危险因素。MRSA定植或感染的人员及院内环境污染是引起院内流行的主要来源。

MRSA定植或感染的人员及院内环境污染是引起院内流行的主要来源。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）第12页,共120页，2024年2月25日，星期天二、致病性和免疫性(一)致病物质金黄色葡萄球菌产生多种侵袭性酶与外毒素。

1．血浆凝固酶（coagulase)：分：结合型凝固酶、游离型凝固酶。

鉴别金黄色葡萄球菌的重要指标。

2．葡萄球菌溶血素（staphylolysin）第13页,共120页，2024年2月25日，星期天3．杀白细胞素（leukocidin）4．肠毒素（enterotoxin）：（A、B、C1、C2、C3、D、E、G、H9个血清型）5．表皮剥脱毒素（exfoliativetoxin）6.毒性休克综合征毒素1（toxicshocksyndrometoxin1,TSST1）第14页,共120页，2024年2月25日，星期天（二）所致疾病

1．侵袭性疾病：（1）皮肤软组织感染

特点：病灶局限且脓汁粘稠

（2）内脏器官感染

（3）全身感染

（4）尿路感染第15页,共120页，2024年2月25日，星期天2．毒素性疾病

（1）食物中毒

（2）烫伤样皮肤综合征由表皮剥脱毒素引起。

（3）毒性休克综合征由TSST1引起

（4）假膜性肠炎

第16页,共120页，2024年2月25日，星期天

人类凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）感染中以表皮葡萄球菌的感染最为常见。

CNS主要引起以下几种感染：泌尿系感染，细菌性心内膜炎，败血症等，其中大多为医院内感染。此外，心脏起搏器安装、置换人工心脏瓣膜、长期腹膜透析、静脉滴注等亦可造成凝固酶阴性葡萄球菌的感染。3、凝固酶阴性葡萄球菌的致病性第17页,共120页，2024年2月25日，星期天三、微生物学检验（一）标本采集（二）检验程序（三）检验方法第18页,共120页，2024年2月25日，星期天三、微生物学检验（一）标本采集根据病情采集标本

种类：脓液、伤口分泌物、穿刺液、血液、尿液、痰液、脑脊液、粪便等。

注意：无菌操作，避免污染。第19页,共120页，2024年2月25日，星期天（二）葡萄球菌检验程序脓液、咽拭子、穿刺液尿液、痰液脑脊液血液粪便、呕吐物直接涂片染色增菌培养分离培养（血平板）分离培养（高盐甘露醇平板）取可疑菌落鉴定试验药敏试验涂片染色血浆凝固酶耐热核酸酶其他鉴定试验报告初报第20页,共120页，2024年2月25日，星期天（三）检验方法1、直接涂片适用于：正常情况下无菌的标本（如脑脊液）伴有炎症细胞的其他体液标本、脓液等初步报告：“查见革兰阳性葡萄状排列球菌，疑为葡萄球菌”或：“查见类似葡萄球菌的革兰阳性球菌”第21页,共120页，2024年2月25日，星期天2、分离培养

50ml葡萄糖肉汤（增菌）

浑浊无菌（7天）报告：无菌生长脑脊液、脓液、穿刺液、咽拭、尿液血平板血液标本5ml粪便、呕吐物高盐甘露醇平板第22页,共120页，2024年2月25日，星期天（三）检验方法3、鉴定试验（1）血浆凝固酶试验：金黄色葡萄球菌（+）（2）甘露醇发酵试验：金黄色葡萄球菌（+）（3）耐热核酸酶试验：金黄色葡萄球菌（+）（４）肠毒素测定：金黄色葡萄球菌产生（5）SPA检测：金黄色葡萄球菌（6）凝固酶阳性和凝固酶阴性的葡萄球菌鉴定（7）API葡萄球菌鉴定试剂盒第23页,共120页，2024年2月25日，星期天（四）结果评价和报告1、金黄色葡萄球菌：无论任何标本中分离到均应鉴定并报告临床。2、表皮葡萄球菌及腐生葡萄球菌：从输液导管、人工植入组织中分离到，应视为致病菌。3、尿培养计数：>103-104为阳性菌尿标准。4、其他凝固酶阴性葡萄球菌：引起感染流行或治疗失败时，应鉴定到种。5、金黄色葡萄球菌（MRSA)：头孢菌素类抗生素体外药敏试验为敏感时，不应报告，因体内试验已证实MRSA对该类抗生素耐药。第24页,共120页，2024年2月25日，星期天第二节链球菌属

(Streptococcus)第25页,共120页，2024年2月25日，星期天一、链球菌第26页,共120页，2024年2月25日，星期天一、生物学特性（一）形态与染色

G+，球形或椭圆形，呈链状排列，无鞭毛、无芽胞，有荚膜。第27页,共120页，2024年2月25日，星期天一、生物学特性（二）培养特性

条件：营养要求较高，多数为兼性厌氧菌，少数专性厌氧。

液体：沉淀生长（絮状或颗粒状）。

普通琼脂平板：不生长。

血液琼脂平板：第28页,共120页，2024年2月25日，星期天（三）生化反应

活泼

分解多种糖类、蛋白质、氨基酸。菊糖（-）胆汁溶菌试验（-）

optochin敏感试验（-）

触酶（-）（区别于葡萄球菌属）（区别甲链与肺链）第29页,共120页，2024年2月25日，星期天（四）抗原构造

１、多糖抗原（C抗原）：群特异性。２、蛋白抗原（M、T、R、S）型特异性，与致病有关的是M蛋白抗原。

3、核蛋白抗原：无特异性。

第30页,共120页，2024年2月25日，星期天多糖抗原蛋白质抗原核蛋白抗原链球菌抗原构造模式图荚膜第31页,共120页，2024年2月25日，星期天（五）分类40个种及亚种

１、按溶血情况分类：（1）甲型溶血性链球菌：菌落周围有1～2mm宽的草绿溶血环，称甲型溶血或α溶血。为条件致病菌。

（2）乙型溶血性链球菌：菌落周围形成一个2～4mm宽的透明溶血环，称乙型溶血或β溶血。又称溶血性链球菌。致病力强，引起多种疾病。（3）丙型链球菌：无溶血环，不致病第32页,共120页，2024年2月25日，星期天２、按抗原结构分类：

按C抗原分群：ABCD…20群，对人致病的以A群为主。按M蛋白分型：如A群：100个型，B群：4型，C群：13个型。（五）分类第33页,共120页，2024年2月25日，星期天（六）抵抗力不强，60℃30min杀死，对多种消毒剂敏感。乙链：对青霉素、四环素、红霉素等敏感。第34页,共120页，2024年2月25日，星期天二、致病性和免疫性（一）致病物质

1、链球菌溶血素（1）链球菌溶血素O(SLO)SLO抗体

抗链球菌溶血素O试验：协助诊断风湿热（>1:400)

（2）链球菌溶血素S(SLS)：无抗原性。2、致热外毒素（猩红热毒素/红疹毒素）3、M蛋白第35页,共120页，2024年2月25日，星期天

4、透明质酸酶

5、链激酶

6、链道酶第36页,共120页，2024年2月25日，星期天（二）所致疾病主要由A群链球菌引起。

1、化脓性感染：由皮肤伤口侵入，经呼吸道侵入，其他途径（如产褥热、蜂窝组织炎）特点：病灶界限不清,脓汁稀薄2．中毒性疾病：猩红热由产生致热外毒素的A族链球菌所致的急性呼吸道传染病。第37页,共120页，2024年2月25日，星期天3．变态反应性疾病：风湿热急性肾小球肾炎二、致病性和免疫性4．其他疾病：甲型（草绿色）链球菌：引起亚急性细菌性心内膜炎。第38页,共120页，2024年2月25日，星期天三、微生物学检验（一）标本采集（二）检验程序（三）检验方法第39页,共120页，2024年2月25日，星期天（一）标本采集根据病情采集标本

种类：脓液、鼻咽拭子、血液等风湿热查血清抗体第40页,共120页，2024年2月25日，星期天（二）链球菌的检验程序痰、脓、穿刺液咽拭子等脑脊液血液直接涂片染色测抗原分离培养增菌培养(5%CO2葡萄糖肉汤)血平板（5%CO2）可疑菌落鉴定试验初步报告血清学鉴定（分群）杆菌肽试验

optochin胆汁溶菌试验其他鉴定敏感试验试验第41页,共120页，2024年2月25日，星期天（三）链球菌的检验方法（1）直接镜检：（痰、脓、穿刺液、咽拭子等）初报：发现G+球菌，呈链状排列第42页,共120页，2024年2月25日，星期天

（2）分离培养：①血液、脑脊液肉汤增菌

②脓液、咽拭子等血平板分离第43页,共120页，2024年2月25日，星期天（3）鉴定链球菌的主要试验：根据形态、菌落、溶血情况进行：①杆菌肽敏感试验：A群敏感(d>10mm)②Optochin敏感试验：肺炎链球菌d>18mm，

d<15mm为阴性。③胆汁溶菌试验：肺炎链球菌+

④CAMP试验：Ｂ群无乳链球菌为＋

第44页,共120页，2024年2月25日，星期天⑤血清学鉴定：试剂盒STREPTEX。用亚硝酸抽提待测菌的群特异性抗原，分别与包被有抗体的胶乳颗粒反应。⑥抗O试验：风湿性关节炎、急性肾小球肾炎，效价>400为+第45页,共120页，2024年2月25日，星期天二、肺炎链球菌

(S.pneumoniae)

属链球菌科，链球菌属。广泛分布于自然界，主要寄生于人类上呼吸道，多数不致病。第46页,共120页，2024年2月25日，星期天一、生物学特性（一）形态与染色

G+，矛头状，成双（或短链）排列，无鞭毛、无芽胞，有荚膜。第47页,共120页，2024年2月25日，星期天（二）培养特性

条件：营养要求较高，兼性厌氧菌，5-10%C02生长最好。产生自溶酶。

液体：培养24h呈均匀混浊，后期因产生自溶而变得澄清。

普通琼脂平板：不生长。

血液琼脂平板：灰白色，圆形，扁平，较小，周围有草绿色溶血环（α溶血）

第48页,共120页，2024年2月25日，星期天（三）生化反应

活泼

分解多种糖类。菊糖（多数+）胆汁溶菌试验（+）

Optochin试验(+)区别甲链与肺链第49页,共120页，2024年2月25日，星期天（四）抗原构造

１、荚膜多糖抗原：据此将肺炎链球菌分85型，对人致病的有20多型。Ⅰ-Ⅲ型引起大叶性肺炎。

２、菌体多糖抗原：可与CRP反应，产生沉淀。

3、M蛋白抗原：型特异性。

第50页,共120页，2024年2月25日，星期天

（五）抵抗力较弱，加热56℃，20min即死亡。对一般消毒剂敏感，对干燥抵抗力较强。荚膜变异：有荚膜的光滑（S）型菌有毒力，失去荚膜的粗糙（R）型毒力减低或消失。（六）变异性第51页,共120页，2024年2月25日，星期天二、致病性和免疫性（一）致病物质

1、荚膜：肺炎球菌的致病力，主要是荚膜的抗吞噬作用。

2、蛋白粘附素、脂磷壁酸、肺炎链球菌溶素O等

溶血毒素“O”：自溶后释放，能溶解人和动物的红细胞，高浓度对动物有坏死及致死作用。第52页,共120页，2024年2月25日，星期天（二）所致疾病

存在于正常人上呼吸道，为条件致病菌，仅在人体抵抗力下降时才引起疾病。可引起：大叶性肺炎，胸膜炎，脓胸，慢性支气管炎，中耳炎，脑膜炎，败血症等。第53页,共120页，2024年2月25日，星期天三、微生物学检验（一）标本采集痰液，脓液，血液，脑脊液等。（二）检验程序（三）检验方法第54页,共120页，2024年2月25日，星期天检验程序痰、脓脑脊液血液直接涂片分离培养革兰染色、美兰染色荚膜肿胀试验增菌培养（葡萄糖肉汤、硫酸镁肉汤）（血平板）挑选可疑菌落纯培养初报兔血清肉汤小白鼠毒力试验涂片荚膜肿胀试验胆汁溶菌试验菊糖发酵Optochin试验药敏试验报告第55页,共120页，2024年2月25日，星期天检验方法1、直接镜检适用于：痰、脓、脑脊液标本。

报告：“找到肺炎链球菌”2、分离培养

硫酸镁肉汤：均匀混浊生长，有绿色荧光。

血平板：灰白色，圆形，扁平，较小，周围有草绿色溶血环（α溶血）

第56页,共120页，2024年2月25日，星期天3、鉴定试验（1）荚膜肿胀试验（2）胆汁溶菌试验：+（3）Optochin试验：+（4）菊糖发酵试验：+（5）小鼠毒力试验：有毒力的菌株，接种后12-36h，死亡。

第57页,共120页，2024年2月25日，星期天胆汁溶菌试验阳性：

加入胆汁或10%去氧胆酸钠，37℃，5-10min，激活本菌的自溶酶，出现溶菌现象。第58页,共120页，2024年2月25日，星期天Optochin敏感试验阳性：取肉汤培养液均匀涂于血平板上用optochin纸片贴于接种区中央（或分区划线法，纸片贴于1-2区），35℃需氧培养过夜，抑菌圈>18mm。第59页,共120页，2024年2月25日，星期天Optochintest

第60页,共120页，2024年2月25日，星期天肺炎链球菌的主要鉴定依据1、镜下形态：革兰阳性球菌，矛头状成双排列，平端相对，尖端向外；

2、血平板菌落特点：直径0.5-1.5mm，灰白色，半透明，光滑（有些菌株为粘液状），扁平，周围有草绿色溶血环。培养或放置24h以上，菌落中央可塌陷，呈脐窝状。

3、生化鉴定：

Optochin试验+，胆汁溶菌试验+。第61页,共120页，2024年2月25日，星期天肺炎链球菌与甲型溶血性链球菌的鉴别

形态菌落血清胆汁菊糖Opto-小鼠肉汤溶菌chin毒力试验肺链甲链矛头状，稍大，湿润浑浊++++成双，扁平，有荚膜脐窝状圆形，较小，稍干，沉淀————无荚膜圆，凸起第62页,共120页，2024年2月25日，星期天（四）结果评价和报告

乙型溶血性链球菌和肺炎链球菌为毒力强的致病菌，无论从任何临床标本中分离出均应报告临床。及时鉴定和报告咽部标本中分离出的化脓性链球菌，有利于早期治疗，以减少并发症（如风湿热，肾小球肾炎）的产生。

草绿色链球菌在重症感染时，应鉴定到种。第63页,共120页，2024年2月25日，星期天第三节肠球菌属

是肠道中的正常菌群导致医院内感染：如尿路感染、腹部和盆腔感染、败血症、脑膜炎。第64页,共120页，2024年2月25日，星期天一、生物学特性（一）形态染色

G+球菌，单个、成双或短链状排列。无荚膜、芽胞，部分菌株有鞭毛。第65页,共120页，2024年2月25日，星期天

营养要求较高。能在高盐（6.5%NaCl）、高碱（PH9.6）、高胆汁（40%）、10~45℃生长。

菌落：圆形、中等大小、灰白色、不透明、S型，有γ或α溶血。（二）培养特性第66页,共120页，2024年2月25日，星期天能分解多种糖类触酶（-）PYR（吡咯烷酮-β-萘基酰胺）试验（+）（三）生化反应第67页,共120页，2024年2月25日，星期天

目前分18种。引起医院内感染常见的是粪肠球菌和屎肠球菌。常用的分型方法：rRNA基因探针分型法。（四）分型（五）抵抗力

对理化因素抵抗力弱。但对大多数抗生素天然耐药。第68页,共120页，2024年2月25日，星期天二、微生物学检验

（一）标本采集

尿液、血液、脑脊液、脓汁分泌物等。第69页,共120页，2024年2月25日，星期天（二）检验程序尿液、脓汁、穿刺液血液涂片染色分离培养（血平板、5%CO2）初报挑选可疑菌落增菌培养（葡萄糖肉汤、5%CO2）PYR试验胆汁七叶苷试验6.5%NaCl生长试验血清学试验其他鉴定试验报告第70页,共120页，2024年2月25日，星期天（三）检验方法1、直接镜检适用于：痰、脓、脑脊液、穿刺液标本。2、分离培养

血平板：灰白色，圆形，中等大小，不透明，S型菌落，周围有α溶血或γ溶血。选择培养基：叠氮胆汁七叶苷琼脂平板。第71页,共120页，2024年2月25日，星期天3、鉴定试验（1）菌属鉴定试验：①PYR试验：肠球菌、A群链球菌、某些凝固酶阴性葡萄球菌为（+）②胆汁七叶苷试验：+③盐耐受试验：+（4）种间鉴定试验：P175表17-3第72页,共120页，2024年2月25日，星期天第四节奈瑟菌属

(Neisseria)

特点：为一群G-双球菌，无鞭毛，无芽胞，有菌毛，需氧，氧化酶及触酶+。

种类：共九种，主要致病菌是

脑膜炎奈瑟菌(merningococcus)

淋病奈瑟菌(gonorrhoeae)第73页,共120页，2024年2月25日，星期天一、脑膜炎奈瑟菌

(N.meningitidis)即脑膜炎球菌，是流行性脑脊髓膜炎的病原体第74页,共120页，2024年2月25日，星期天（一）生物学性状1．形态结构2．培养特性3．生化反应4.抗原结构5.抵抗力特点

第75页,共120页，2024年2月25日，星期天

（一）形态结构G-，肾形成双排列在患者脑脊液标本中位于中性粒细胞内无芽胞、无鞭毛，具有荚膜、菌毛。

第76页,共120页，2024年2月25日，星期天2．培养特性营养要求高，必须在含有血清或多种氨基酸、无机盐的培养基上生长良好。血平板：半透明，灰褐色，圆形，湿润光滑露滴样菌落。易自溶。第77页,共120页，2024年2月25日，星期天巧克力平板：圆形，扁平，蓝灰色，半透明，光滑湿润的菌落。卵黄双抗（EPV）平板：较大，无色，光滑湿润，扁平，边缘整齐的菌落。血清肉汤：呈微混浊。第78页,共120页，2024年2月25日，星期天3.生化反应分解葡萄糖、麦芽糖：+硝酸盐还原试验阴性，不分解尿素氧化酶试验阳性第79页,共120页，2024年2月25日，星期天4.抗原结构可分9个血清群，对人致病的主要是A群5．抵抗力特点

对寒冷、光、热力，干燥等十分敏感。室温3h，60℃5min死亡。采集标本：注意保温迅速送检。对磺胺类、青霉素、链霉素均敏感。

第80页,共120页，2024年2月25日，星期天（二）致病性与免疫性1．致病物质：菌毛、荚膜、内毒素

2．所致疾病：传染源、传播途径寄生在正常人鼻咽部，存在易患人群，与患者补体介导的杀菌活性缺陷有关。约2%-3%的人表现为流脑症状。

3.免疫性病原可产生群特异性抗体，但不持久。第81页,共120页，2024年2月25日，星期天(三)微生物学检验1．标本采集

菌血症期病人采集血液有出血点或瘀斑者，可取瘀斑渗出液有脑膜刺激症状，抽取脑脊液带菌者：咽拭子第82页,共120页，2024年2月25日，星期天注意事项：立即送检注意保温（勿放冰箱）防干燥防紫外线第83页,共120页，2024年2月25日，星期天２、脑膜炎球菌的检验程序

血液增菌培养（葡糖肉汤）分离培养（巧克力、血平板）鉴定试验涂染检氧化酶葡、麦糖多价血清药敏试验

结果报告

鼻咽拭子

卵黄双抗平板5~10%co237℃18~24h37℃18~24h37℃18~24h脑脊液瘀血点离心上沉清淀液物5~10%ＣＯ2涂片染色初步报告直接凝集第84页,共120页，2024年2月25日，星期天脑膜炎球菌的鉴定依据菌落特征符合形态染色符合分解葡、麦糖产酸氧化酶、触酶阳性血清凝集试验阳性第85页,共120页，2024年2月25日，星期天二、淋病奈瑟菌（N.gonorrhoeae）

即淋球菌为淋病的病原体，人是唯一天然宿主和传染源第86页,共120页，2024年2月25日，星期天（一）生物学性状1．形态结构2．培养特性3.生化反应4．抵抗力特点

第87页,共120页，2024年2月25日，星期天1．形态结构G-，球形或肾形，成对排列有荚膜，无芽胞和鞭毛第88页,共120页，2024年2月25日，星期天2．培养特性营养要求高，30-37℃生长，须在含有血液或血清的培养基上培养，常用血液、巧克力等培养基初次分离，须5-10%CO2才能生长发育菌落：凸起，光滑、圆形，灰褐色，半透明第89页,共120页，2024年2月25日，星期天3.生化反应

氧化酶试验：（+）触酶：（+）葡萄糖（+），麦芽糖（-）易自溶第90页,共120页，2024年2月25日，星期天4．抵抗力特点

抵抗力弱，在干燥环境中仅能存活1-2h，湿热55℃5min,100℃立即死亡。室温下存活1-2d。对消毒剂极敏感

第91页,共120页，2024年2月25日，星期天１、致病物质：菌毛、外膜蛋白、等２、所致疾病：侵犯人类泌尿生殖系统引起淋病(首位性病)

新生儿眼炎（二）致病性与免疫性

第92页,共120页，2024年2月25日，星期天1．标本采集标本：男性：尿道分泌物女性：阴道分泌物全身性淋病：血液、泌尿、生殖道的各种分泌物、尿液立即送检

２．检验程序(三)微生物学检验第93页,共120页，2024年2月25日，星期天脓汁、分泌物直接涂片染色

分离培养血、巧克力、TM平板5－10%co235℃18－24h鉴定试验涂染检氧化酶糖发酵药敏试验报告

初步报告35℃18－24h第94页,共120页，2024年2月25日，星期天（１）直接涂片镜检急性淋病：嗜中性粒细胞内大量G-，肾形双球菌——具有诊断意义慢性淋病：镜检较困难３．检验方法第95页,共120页，2024年2月25日，星期天（２）分离培养

即采集即培养，常用含有两种以上抗生素（万古霉素、粘菌素、磺胺类等）的选择培养基上培养（如ML、TM）5-10%CO2培养基先预温。第96页,共120页，2024年2月25日，星期天氧化酶试验：（+）触酶：（+）（多数奈瑟菌为阴性）

葡萄糖（+），麦芽糖（-）

PCR：灵敏，特异，标本不受限制(不需活菌)

（３）鉴定第97页,共120页，2024年2月25日，星期天

1.名词解释：血浆凝固酶、SPA、抗链“o”试验、Optochin试验。

2.根据色素和生化反应将葡萄球菌分成哪几种？

3.金黄色葡萄球菌的鉴定依据有哪些？

4.根据链球菌在血平板上的溶血现象，将其分成哪些类型？甲链和乙链有何区别？

5.简述链球菌的检验程序和检验方法。

6.脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌有哪些异同点？

7.采集脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌的标本进行细菌检验应该注意哪些问题？为什么？

复习思考题第98页,共120页，2024年2月25日，星期天中等大，突起，有色素，S型菌落。葡萄球菌菌落形态（普通琼脂平板）第99页,共120页，2024年2月25日，星期天金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌第100页,共120页，2024年2月25日，星期天金黄色葡萄球菌有透明溶血环。表皮葡萄球菌无溶血环。第101页,共120页，2024年2月25日，星期天葡萄球菌A蛋白（SPA）的意义：（1）降低抗体的调理作用，抗吞噬（2）协同凝集试验:辅助诊断疾病。第102页,共120页，2024年2月25日，星期天血浆凝固酶试验［原理］致病性葡萄球菌能产生２种血浆凝固酶：

一种为结合型凝固酶（凝聚因子）：细菌表面的纤维蛋白原受体与血浆中的纤维蛋白原结合，导致细菌凝集。另一种为游离型凝固酶，可被人或兔血浆中的协同因子激活，成为凝血酶样物质，使纤维蛋白原变为纤维蛋白，从而使血浆凝固。

［检测方法］结合型凝固酶：玻片法游离型凝固酶：试管法第103页,共120页，2024年2月25日，星期天耐热核酸酶试验液体培养物煮沸15min

37℃3h甲苯胺蓝核酸琼脂第104页,共120页，2024年2月25日，星期天肠毒素测定病人呕吐物、粪便、剩余食物高盐肉汤37℃24h分离培养肉汤煮沸30min，离心，取上清夜幼猫观察症状（4h出现）第105页,共120页，2024年2月25日，星期天SPA的检测致病性葡萄球菌（SPA)兔抗羊红