SN-T 3335-2012进出口纺织品微生物项目检验规范

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T3335—2012进出口纺织品微生物项目检验规范Rulesfortheinspectionofmicrobiologicalspecificationonimportandexporttextiles2012-12-12发布国家质量监督检验检疫总局本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国山东出入境检验检疫局、中华人民共和国厦门出入境检验检疫局、中华人民共和国上海出入境检验检疫局、中华人民共和国广东出入境检验检疫局、中华人民共和国江苏出入境检验检疫局。Ⅱ近年来，随着人们生活水平的提高和近年来进口纺织服装的增多，中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局关于将进出口检验检疫工作重点，转移到安全、卫生、环保、反欺诈等项目上来的要求，借鉴国外的先进经验，特别是通过总结我国十年来进出口纺织品卫生项目检验工作的经验，制定一部检验检《进出口纺织品微生物检测规范》是对SN/T1649《进出口纺织品安全项目检验规范》在卫生项目方面的补充和完善。本检验规范中规定的检测方法，一是采用我国近几年来颁布实施的涉及纺织品微生物的检测方法；二是采用已颁布实施的涉及纺织品微生物检测的国际标准或国外先进标准；三是采用有关进出口合同或协议中规定的检测方法。进出口纺织品微生物项目检验规范本标准规定了进出口纺织品的微生物项目的技术要求、试验方法和检验规则。本标准适用于进出口纺织品微生物项目的检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB4789.4食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验SN/T1538.1培养基制备指南第1部分：实验室培养基制备质量保证通则SN/T1538.2培养基制备指南第2部分：培养基性能测试实用指南3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。直接接触皮肤的产品productswithdirectcontacttoskin非直接接触皮肤的产品productswithoutdirectcontacttoskin纺织品微生物项目纺织品微生物项目主要指涉及人身卫生的微生物等项目。24要求4.1进出口纺织品的微生物项目要求见表1,如合同或协议另有规定，按合同或协议执行。标明所符合的分类技术要求类别。菌落总数大肠菌群沙前氏菌致病性化脓菌*真菌菌落总数用品(A类)不得检出不得检出直接接触皮肤用品(B类)不得检出不得检出非直接接触皮肤用品(C类)——“致病性化脓菌含铜绿假单胞菌、金黄色葡尚球前与溶血性链球菌。4.2根据不同输入国家或地区(组织)法律法规的要求，进出口纺织品及辅料微生物项目限量要求参见5试验方法5.1样品处理和检验方法的选择实验室应按要求尽快检验，看及时检取必要的持样品的原有状态，防止样品中目标微生物因客观条件的于扰而发生变化。200mL灭菌生理盐水中，充分混句，得到一个1:10生理老水样液如被检样品含有大量吸水材料而导致不能吸出足够样液时，稀释液量可按每次50mL递增，直至能吸出足够测试用样液。在计算细菌葡落总数写真菌菌落总数时相应调整稀释度。5.2菌落总数检测方法5.2.1操作步骤从上述生理盐水样液中取上清液作菌落计数。用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10生理盐水上清样液1mL,沿管壁缓慢注于盛有9mL灭菌生理盐水稀释液的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面),振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀根据对样品污染状况的估计，选择2～3个适宜稀释度的样品匀液在进行10倍递增稀释时，吸取1mL样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取1mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。及时将15mL～20mL冷却至46℃左右的熔化的平板计数琼脂培养基(可放置46℃±1℃恒温水浴箱中保温)倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。待琼脂凝固后翻转平皿置35.2.2结果报告5.2.2.1选取菌落数在30CFU～300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30CFU的平板记录具体菌落数，大于300CFU的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数，记录稀释倍数和相应的菌落数量。5.2.2.2若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每克样品中菌落总数结果。5.2.2.3若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按式(1)计算结果： (1)式中：N——样品中细菌菌落总数，CFU/g;ZC——平板(含适宜范围菌落数的平板)上的细菌菌落数之和；n₁——第一稀释度(低稀释信数)平板个数：n₂——第二稀释度(高稀释倍数)平板个数d——稀释因子(第一稀释度)。5.2.2.4若所有稀释度的平板上菌落数均大于300CFO,则对稀释度最高的平板进行计数，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。者所有稀释度的平板菌落数均小于30CFU,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。5.2.2.5若所有稀释度平板均无南落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。当菌落数在100以内，按实有数据报告，大于100时采用一位有效数字。5.3大肠菌群检测方法5.3.1操作步骤取样液5mL接种50mL,乳糖胆盐发酵管，置35℃二2℃培养24h,如不产酸也不产气，则报告为大肠菌群阴性。如产酸产气，则划线接种伊蓝京脂平版，置3℃±28h～24h,观察平板上菌落形态。典型的大肠菌落为黑紫色或色，网形，边缘整齐，表面光滑湿涌，常具有金属光泽，也有的呈紫黑色，不带或略带金属光泽，或粉红色，中心较深的菌落。取疑似菌落1～2个作革兰氏集色镜检，同时接种乳糖发酵管，35℃±2℃培养24h,观察产气情况。5.3.2结果报告凡乳糖胆盐发酵管产酸产气，在伊红美蓝平板上有典型大肠菌落，革兰氏染色为阴性无芽胞杆菌，乳糖发酵管产酸产气，可报告被检样品检出大肠菌群。5.4铜绿假单胞菌检测方法5.4.1操作步骤取样液10mL,加入到90mL,SCDLP培养液中，充分混匀，置35℃±2℃培养18h～24h。如有铜绿假单胞菌生长，培养液表层呈现一层薄菌膜，培养液常呈黄绿色或蓝绿色。从培养液的薄菌膜处挑取培养物，划线接种十六烷三甲基溴化铵琼脂平板，置35℃±2℃培养18h～24h,观察菌落特征。铜绿假单胞菌在此培养基上生长良好，菌落扁平，边缘不整，菌落周围培养基略带粉红色，其他菌不长。取可疑菌落涂片作革兰氏染色，镜检为革兰氏阴性菌者应进行下列试验：4氧化酶试验：取一小块洁净的白色滤纸片放在灭菌平皿内，用无菌玻璃棒挑取可疑菌落涂在滤纸片上，然后在其上滴加一滴新配制的1%二甲基对苯二胺试液，30s内出现粉红色或紫红色，为氧化酶试验阳性，不变色者为阴性。也可用商品化的试剂，按说明书操作进行氧化酶试验。绿脓菌素试验；取2～3个可疑菌落，分别接种在绿脓菌素测定用培养基斜面，35℃±2℃培养24h,加入三氯甲烷3mL～5mL,充分振荡使培养物中可能存在的绿脓菌素溶解，待三氯甲烷呈蓝色时，用吸管移到另一试管中并加入1mol/L的盐酸1mL,振荡后静置片刻。如上层出现粉红色或紫红色即为阳性，表示有绿脓菌素存在。硝酸盐还原产气试验：挑取被检菌落纯培养物接种在硝酸盐胨水培养基中，置35℃±2℃培养24h,培养基小倒管中有气者即为阳性。明胶液化试验：取可疑菌落纯培养物，穿刺接种在明胶培养基内，置35℃±2℃培养24h,取出放于4℃~10℃,如仍呈液态为阳性，凝固者为阴性。42℃生长试验：取可疑培养物，接种在普通琼脂斜面培养基上，置42℃培养24h～48h,有铜绿假单胞菌生长为阳性。5.4.2结果报告被检样品经增菌分离培养后，证实为革兰氏阴性杆菌，氧化酶及绿脓菌素试验均为阳性者，即可报告被检样品中检出铜绿假单胞菌。如绿脓菌素试验阴性而液化明胶、硝酸盐还原产气和42℃生长试验三者皆为阳性时，仍可报告被检样品中检出铜绿假单胞菌。5.5金黄色葡萄球菌检测方法5.5.1操作步骤取样液10mL,加入到90mLSCDLP培养液中，充分混均，置35℃±2℃培养24h。自上述增菌液中取1～2接种环，划线接种在血琼脂培养基上，置35℃±2℃培养24h～48h。在血琼脂平板上该菌菌落呈金黄色，大而突起，圆形，不透明，表面光滑。周围有溶血圈。挑取典型菌落，涂片作革兰氏染色镜检，金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，排列成葡萄状，无芽胞与荚膜。镜检符合上述情况，应进行下列试验：甘露醇发酵试验：上述菌落接种在甘露醇培养液中，置35℃±2℃培养24h,发酵甘露醇产酸者阳性。血浆凝固酶试验：玻片法：取清洁干燥载玻片，一端滴加一滴生理盐水，另一端滴加一滴兔血浆，挑取菌落分别与生理盐水和血浆混合，5min如血浆内出现团块或颗粒状凝块，而盐水滴仍呈均匀混浊无凝固则为阳性，如两者均为无凝固则为阴性。凡玻片试验呈阴性反应或盐水滴与血浆滴均有凝固现象，再进行试管凝固酶试验；试管法：吸取1:4新鲜血浆0.5mL,放入灭菌小试管中，加入等量待检菌24h肉汤培养液0.5mL。混匀放35℃±2℃温箱或水浴中，每半小时观察一次，24h之内呈现凝块即为阳性。同时以已知血浆凝固酶阳性和阴性菌株肉汤培养物及肉汤培养基各0.5mL作为对照。5.5.2结果报告凡在琼脂平板上有可疑菌落生长，镜检为革兰氏阳性葡萄球菌，并能发酵甘露醇产酸，血浆凝固酶试验阳性者，可报告被检样品检出金黄色葡萄球菌。5.6溶血性链球菌检测方法5.6.1操作步骤取样液10mL加人到90mL葡萄糖肉汤，35℃±2℃培养24h。5将培养物划线接种血琼脂平板，35℃±2℃培养24h观察菌落特征。溶血性链球菌在血平板上为挑取典型菌落作涂片革兰氏染色镜检，应为革兰氏阳性，呈链状排列的球菌。镜检符合上述情况，应进行下列试验：链激酶试验：吸取草酸钾血浆0.2mL(0.01g草酸钾加5mL兔血浆混匀，经离心沉淀，吸取上清液),加入0.8mL灭菌生理盐水，混匀后再加入待检菌24h肉汤培养物0.5mL和0.25%氯化钙0.25mL,混匀，放35℃±2℃水溶中，2min观察一次(一般10min内可凝固),待血浆凝固后继续观察并记录溶化时间。如2h内不溶化，继续放置24h观察，如凝块全部溶化为阳性，24h仍不溶化为杆菌肽敏感试验：将被检菌菌液涂于血平板上，用灭菌镊子取每片含0.04单位杆菌肽的纸片放在平板表面上，同时以已知阳性菌株作对照，在35℃±2℃下放置18h～24h,有抑菌带者为阳性。5.6.2结果报告镜检革兰氏阳性链状排列球菌，血平板上呈现溶血圈，链激酶和杆菌肽试验阳性，可报告被检样品检出溶血性链球菌。培养基和试剂的配制遵循SN/T1538.1和SN/T1538.2的要求。5.7真菌菌落总数检测方法5.7.1操作步骤从上述生理盐水样液中取上清液作真菌计数。共接种5个平皿，每个平皿中加入1mL样液，然后用冷却至45℃左右的熔化的沙氏琼脂或孟加拉红培养基20mL～25mL倒入每个平皿内混合均匀，琼脂凝固后翻转平皿置25℃±2℃培养7d,分别于第3、5、7天观察，计算平板上的菌落数，如果发现菌菌落呈片状生长的平板不宜采用；计数符合要求的平板上的菌数，按式(2)计算结果：X₂=B×K/5 (2)B——5块平板上的真菌菌落总数之和；如果样品菌落总数超过本标准的规定，按5.7.3进行复检和结果报告。5.7.3复检方法将留存的复检样品依前法复测2次，2次结果都达到本标准的规定，则判定被检样品合格；其中有任何1次结果超过本标准规定，则判定被检样品不合格。5.8沙门氏菌定性检测方法起始检验样品量为20g,按GB4789.4进行沙门氏菌检验。66检验规则布匹至少距布端2m,以上无菌操作取样，样品尺寸为长度不小于0.5m的整幅宽；服装或制品的取样数量应满足试验需要，抽取样品后立即把样品放进经消毒杀菌的密封袋密封，并尽快送往实验室进从每一检验批中按品种、颜色随机抽取代表性样品，于同一批号的三个运输包装中至少抽取12个最小销售包装样品，1/4样品用于检测，1/4样品用于留样，另1/2样品(可就地封存)必要时用于复检参考。抽样的最小销售包装不应有确础检验前不得启开。6.2样品的贮存和运输采样后，应将样品在接近原有比存温度条件下尽快送往实验室检验。运输时应保持样品完整。如6.3结果判定根据纺织产品基本安全要求类，对照表1评定(其他安全项目等根据合同或协议对照相关附录的规定评定)。如果样品的测试结果符合表/1的要求(含有2种及以上组件的样品，每种组件均符合表1的要求),则判定该批产品的基下安全性能(或其他安全性能等)合格。如果样品的测试结果有一项果答格，则州定该样品所代表的品种或颜色的产品的基本安全性能(或其他安全性能等)不合格，同批中的其他品种或颜色不受此品种或颜色不合格的影响。6.4对不合格批的处理本标准系一次抽样检验，当进行检验，复验结果不作为最终,仅作参考。出口纺织产品料需经过灭菌处理后再行使用。试验报告应包括下列内容：a)试样完整的识别标记；b)试验方法；c