农作物种子检验规程 播种质量 活力测定 征求意见稿

1GB/TXXXX—2022农作物种子检验规程播种质量活力测定本文件规定了种子活力的测定内容、测定程序、结果表示等相关要求。本文件适用于农作物种子。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T3543.1农作物种子检验规程总则GB/T3543.2农作物种子检验规程扦样GB/T3543.3农作物种子检验规程播种质量净度分析GB/T3543.4农作物种子检验规程播种质量发芽试验3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1种子活力3.1.1种子活力seedvigor在广泛的环境条件下，决定可接受发芽率的种子批出苗表现和成苗性能的各种特性的总和。注：高活力种子批，即使在不适宜该作物种类的环境条件下，仍3.1.2可接受发芽率acceptablegermination2GB/TXXXX—2022在种子没有休眠的情形下，具有该作物种类符合种子批最低发芽率的标准要求。3.1.3出苗seedlingemergence从土壤或其他种植介质中符合本文件要求的种胚生长的幼苗伸长。3.1.4成苗seedlingperformance幼苗具有从土壤或其它种植介质中伸出并有能力发育成正常植株。3.2种子活力测定3.2.1活力测定vigortest在本文件规定条件下评价种子批活力的直接或间接测定程序。3.2.2直接测定directtest在室内通过模拟逆境或其他条件下对出苗百分率或速率等种子特性指标进行测定。3.2.3间接测定indirecttest对已证实与成苗表现密切相关的其他种子特性指标进行测定。3.2.4伸长胚根测定radicalemergence(RE)test在发芽试验早期对符合本文件要求的伸长胚根数目进行测定。3.2.5电导率测定conductivitymeasurement对种子组织电解质的渗漏程度进行评估测定。3.2.6GB/TXXXX—2022加速老化测定acceleratedageing(AA)test评价人为施加高温高湿条件并经过一定时间的逆境处理后的忍受水平。3.2.7控制劣变测定controlleddeterioration(CD)test评价预先将种子水分提高到规定的统一水平并置于高温下的逆境处理后的忍受水平。3.2.8四唑活力测定tetrazoliumvigourtest使用四唑指示剂对种子染色的位置、颜色和强度进行详细差异评价。4测定内容4.1活力测定是评价种子批在广泛的环境条件下成苗潜力的生理和物理基础。种子活力并非是单一可测定的特性，而是描述与下列种子批表现相关的多个特性的一个概念：a)种子在不适宜环境条件下的出苗能力；b)种子发芽和幼苗生长的速率和一致性；c)贮藏后的种子出苗，尤其是发芽能力的恢复。4.2针对不同测定要求，可以选择不同特性测定的方法。活力测定方法可分为模拟出苗逆境或其他条件的直接法，以及与成苗表现密切相关的间接法。在本文件中，列入的直接法有伸长胚根测定、加速老化测定、控制劣变测定，列入的间接法有电导率测定、四唑活力测定。4.3较之发芽试验，活力测定能更为敏感区分可接受发芽率种子批之间差异，其测定结果信息能对不同种子批次的播种价值作出事先明智的决定。活力测定能提供以下信息：——较标准发芽试验更为敏感的种子质量指标；——据种子生理和物理质量潜力，对可接受种子批次作一致性的排序；——对拟销售的种子批的营销策略提供有关出苗、贮藏潜力的信息。5测定程序5.1试验样品4GB/TXXXX—2022试验样品所需的数量和重复依据不同方法的要求，应从种子批的有代表性样品的净种子部分中随机分取。5.2方法选择本文件所列入的测定方法包括伸长胚根计数测定、电导率测定、加速老化测定和控制劣变测定，分别属于幼苗生长测定、生化测定和逆境测定。这些方法已经检验机构比对试验和种子批比较试验的确认，其测定目的、适用作物种类、具体程序见表1。表1活力测定方法方法测定目的适用范围具体程序1伸长胚根测定预测种子田间出苗玉米、小麦、甘蓝型油菜、萝卜种子2电导率测定预测种子田间出苗大豆、菜豆、豌豆、萝卜、鹰嘴豆种子3加速老化测定预测大豆种子田间出苗、贮藏潜力未经杀菌处理的大豆种子，但也适用于已进行杀菌处理的种子4控制劣变测定预测种子田间出苗和贮藏性能未经杀菌处理的芸薹属种子，不宜适用于已经杀菌处理的芸薹属种子（可能会影响测定效果）5四唑活力测定预测种子田间出苗大豆种子5.3测定条件活力测定方法因作物种类而异，呈现一定的专一性，除本文件列入的种类外，活力测定方法和适用种类，需经方法确认后方可使用。每一种方法的试验条件是规定的，测定时应加以严格控制。活力测定要求具有适宜的仪器并使用对照样品，同时也与种子检验员的经验和技术培训密切相关。规定使用设置对照的，宜包括为活力测定结果提供一致性的内在质量对照样品。对照样品的结果差异，能够反映试验条件（如温度、种子水分或其他因素）的微小波动就会明显影响结果的可靠性。注：设置的对照样品，其选择、贮藏和处置一般符合下列要求——每年测定发芽率和活力。所选择的种子批无物理损伤和病虫害感染，具有较高的发芽率和中等的活力。监控对照种子批的每一次活力测定结果，能核查——对照样品的原始水分达到被检种的安全贮藏水分，一般为10——对照样品的数量应足够多，以满足一年或一个生产季节的种子检验测定需要。宜将对照5GB/TXXXX—2022粒的次级种子样品，检验前贮存在10℃~20℃的低温环境中。对照样品使用前须提前取出，并在室温6结果计算和表示种子活力测定结果计算和表示，主要有以下两种类型：a)以百分率表示的，比如：伸长胚根测定的伸长胚根数目百分率，加速老化测定的正常幼苗、不正常幼苗、硬实、新鲜种子、死种子的百分率，控制劣变测定（采用发芽试验的）的发芽种子总数百分率”和“正常幼苗百分率，四唑活力测定的有活力种子的百分率；b)以仪器读数直接表示的，比如：电导率测定、控制劣变测定（采用电导率测定的）采用电导仪的读数，单位使用µScm-1g-1。不同测定方法的具体结果计算和表示，详见附录A～E。7结果填报结果填报应包括测定结果、使用方法和附加说明，不同方法的结果填报见表2，若结果为零的填报表2活力测定结果填报方法测定结果附加说明1伸长胚根测定结果采用伸长胚根数目的百分率，修约至最接近的整数测定所使用的温度、伸长胚根计数时间（单位为h）例如：在20℃下经66h后，已伸长胚根为90%2电导率测定结果采用µScm-1g-1表示，修约至一位小数测定过程使用特定条件的相关信息，如浸泡时间和温度。如测定前对种子水分作了调节的，还需注明调节前和调节后的种子水分3加速老化测定结果采用正常幼苗、不正常幼苗、硬实、新鲜种子、死种子的百分率，修约至最接近的整数测定中使用特定条件的相关信息，如老化前后种子重量、老化时间和温度。如测定前对种子水分作了调节的，还需注明调节前和调节后的种子水分6GB/TXXXX—20224控制劣变测定发芽试验结果采用“发芽种子总数百分率”和“正常幼苗百分率”表示，结果修约至最接近的整数电导率测定结果采用µScm-1g-1表示，修约至一位小数控制劣变过程使用特定条件的相关信息，如劣变时间和温度，以及电导率测定的浸泡时间和温度。如测定前提高种子水分，注明增加的种子水分5四唑活力测定结果采用有活力种子百分率，修约至最接近的整数测定过程使用特定条件的相关信息，如2,3,5～三苯基氯化四唑溶液浓度、染色温度和时间例如：用0.1%的2,3,5～三苯基氯化四唑溶液在35℃下染色3h的四唑测定：有活力的种子为90%。GB/TXXXX—2022（规范性）伸长胚根测定A.1原理种子发芽速率缓慢，是种子老化的早期生理表现，也是种子活力下降的主要原因。玉米、小麦、甘蓝型油菜、萝卜种子在发芽早期的伸长胚根数量能准确反映其发芽速率，并与发芽速率的其他指标密切相关。发芽早期的伸长胚根数量越多，则表明种子活力较高；反之伸长胚根数量越少，则表明种子活力较低。A.2仪器设备a）发芽试验设备，能保持发芽试验规定温度的培养箱；b）辅助器具，发芽试验所用的纸介质，以及防止发芽试验期间介质干燥的塑料袋或盒。A.3测定程序A.3.1试验设置伸长胚根测定试验应使用表A.1中所述的发芽介质、测定重复进行设置，按照GB/TXXXXX.X的正常程序进行发芽试验。A.3.2试验温度伸长胚根测定按照表A.1中的发芽温度进行试验。温度是测定过程最重要的潜在变异因素，每个种子批次应在设置发芽后15min内转移到试验温度。温度监测是需要的，建议每隔24h对种子批和重复进行翻转。A.1伸长胚根测定规定条件8GB/TXXXX—2022A.3.3计数时间和伸长标准伸长胚根计数时间、伸长胚根评定标准应按照表A.1规定执行。A.4结果计算和表达按照表A.1的规定，记录每一重复伸长胚根的种子数。对每一重复伸长胚根的种子进行计数，换算成每重复的百分率。将副重复组合形成以100粒种子为一重复，若两个100粒的重复间的差异超过了表A.2规定的容许误差，应进行重新测定。若第二次测定结果与第一次测定结果比较，未超过表A.3规定的容许误差，则填报两次测定的平均值。表A.2100粒2次重复间最高和最低胚根数目的容许误差（2.5%显著水平的两尾测定）243566789表A.2100粒2次重复间最高和最低胚根数目的容许误差（续）GB/TXXXX—2022表A.3同一检验机构相同或不同送验样品200粒伸长胚根数目两次测定结果间的容许误差（2.5%显著2233456789GB/TXXXX—2022（规范性）电导率测定B.1原理通过测定渗滤液的电导率，能对植物组织电解质的渗漏程度进行评估。通过测定不同种子批组织渗透液的电解率，可以评估种子活力程度。电解质渗漏较多（即高电解率）的种子批，则其种子活力较低；电解质渗漏较少（低电导率）的种子批，则其种子活力较高。B.2仪器和试剂a）电导仪,可采用电极常数达到1.0的直流或交流电直接读数的电导仪。电导仪刻度范围在（0~1999）µScm～1之间，分辨率至少达到0.1µScm～1，精确度为±1%，温度范围为(20～25)℃。b）容器基部直径应具有足够大小（见表B.1以能盛有足够的水浸没所有种子和电极。所有容器在使用前，应彻底清洗并用去离子水或蒸馏水冲洗两次。c）水，使用去离子水或蒸馏水，使用前水温应在（20±2）℃,其电导率在20℃下不得超过5µScm～1。d）能保持（20±2）℃恒温的发芽箱、培养箱或发芽室。e）符合GB/TXXXXX.X的水分测定仪器。B.3测定程序B.3.1样品水分调节按照GB/TXXXXX.X，测定送验样品的种子水分。样品水分处于10%～14%，直接进行测定，无需进行水分调节。除萝卜种子外，对于水分低于10%或高于14%的，则应将样品水分调节至10%～14%，但在此范围内并不需要所有样品的水分都相同。调节种子水分，应将净种子充分混匀后从中随机分取一个至少含有200粒种子的次级样品，将样品称重。种子水分若低于10%，则将该次级样品的种子置于湿润纸巾间让种子吸湿，直至水分达到10%~14%。一般情况下，初始水分为7%的豌豆种子大约经3h或7h吸湿后，种子水分分别可达到10%或14%，但实际吸湿时间的长短取决于纸巾的湿润程度。种子水分若高于14%，则将次级样品种子置于30℃烘箱中，烘至水分达到10%～14%。一般情况下，GB/TXXXX—2022初始水分为15%的种子，烘1h后水分达到14%，烘（5～6）h后水分达到10%。初始水分为16%左右的种子，烘（1～2）h后水分达到14%，烘（8～10）h后水分达到10%。水分为10%或14%的次级样品的重量可通过如下公式计算：M1=M0--…………（B.1）式中：M1——10%或14%水分的次级样品重量；M0——初始重量；P1——种子初始水分；下放置（12～18）h，使种子水分保持均衡。B.3.2设备和容器检查B.3.2.1电极校准电导仪使用之前应采用有追溯性标准溶液校准，未经校准的电导仪不能用于电导率测定。电极校准，可选择下述方法之一：a）采用标定液进行校准。至少使用两种标定液校准，一种电导率不超过100µScm～1，另一种电导率为（1000～1500）µScm～1。校准应在25℃下进行。如果读数不正确，则应重新校准，必要时对电导仪进行调整或维修。b）采用氯化钾溶液进行校准。称取纯净干燥分析纯KCl0.745g（称重前在150℃下烘干1h，并在干燥器内冷却溶解于1L去离子水中，配成0.01mol/LKCl溶液。该溶液在20℃下电导仪的读数应介于1273µScm～1和1278µScm～1之间。如果超出该范围，则应重新校准，必要时对电导仪进行调整或维修。B.3.2.2容器清洁度检查每一检验工作日，应从备用的每10个容器（锥形瓶或烧杯）中随机选取2个，加入预先置于（20±2）℃下的已知电导率的去离子水或蒸馏水，测定电导率。电导率测定值若大于5µScm～1，则应重新用去离子水或蒸馏水充分冲洗电极和所有容器，再从每10个容器中随机选取2个，加入去离子水或蒸馏水进行重新测定。重复此过程，直至所测定的电导率读数不高于5µScm～1为止。GB/TXXXX—2022B.3.2.2温度检查检查发芽箱、培养箱或发芽室以及水的温度，只有当温度均达到测定所需（20±2）℃时，才可进行电导率测定。B.3.3电导率测定B.3.3.1试验样品准备每一样品设置4个重复（见表B.1每个重复直接从净种子中随机数取，或者从已调节水分的次级样品中数取。称重每一样品，保持两位小数（0.01g）。表B.1电导率测定规定条件B.3.3.2容器准备对于每一待测样品，准备4个容器并加入所需的水量（见表B.1盖好所有容器以防止污染，在放入种子前放置在（20±2）℃下平衡（18～24）h。每次测定应设置仅加入去离子水或蒸馏水的2个对照容器。B.3.3.3种子浸泡将每一已称重的重复种子放入准备好的容器中，轻轻旋转每个容器，确保所有种子完全淹没。用铝箔或保鲜膜覆盖好每个容器，在（20±2）℃下放置表B.1所需浸泡时间。每个容器贴上标签，容器测定时间不得超过其规定浸泡时间结束后的15min内，同一时间内一次测定的容器数量应控制，通常为（10～12）个。B.3.3.4电导仪准备测定前启动电导仪，按照电导仪规定的最低预热时间进行预热。准备两个容器，每个容器中加入足够的去离子水或蒸馏水，用于每次测定后洗涤电极之用。GB/TXXXX—2022B.3.3.5浸泡液电导率测定按照表B.1规定的时间浸泡结束后，应立即测定浸泡液电导率。采用下列方法之一混匀浸泡液：a）轻轻晃动盛有种子的容器（10～15）s，以确保渗滤液充分混匀，移去铝箔或薄膜盖，将电极浸没在未经过滤的浸泡液中，电极不能直接接触种子；b）按照上述a）测定电导率之前，使用塑料勺轻轻搅动种子和浸泡液。每次测定前，用水冲洗塑料勺两次并用干净的纸巾抹干；c）利用尼龙筛将容器中的种子和浸泡液倒往另一洁净容器，再将浸泡液倒回原来容器，将电极浸没在浸泡液中。每次测定前，用水冲洗电极和尼龙筛两次，并用干净的纸巾抹干。浸泡液混匀后，重复测定几次直至得到一个稳定数值为止。测定时发现有硬实种子，则应在测定完成后将其取出，记录其数量。然后，将硬实种子表面擦干、称重，并从50粒副重复种子重量中扣减硬实种子重量。B.3.3.6对照电导率扣减测定一个对照容器的电导率，对于电导率任一读数大于5µScm～1的均表明电极尚未冲洗干净，需重新冲洗电极。测定另一对照容器的电导率，测定后电导率仍大于5µScm～1的的，则表明电极仍存在问题。按照电导仪提供的说明书进行清冼，在清洁未解决之前不能进行测定。若第二个对照容器的电导率不大于5µScm～1的，或者两个对照容器的平均值未大于5µScm～1的，则将第二个对照容器值作为背景电导率。每一重复测定的电导率读数应减去背景电导率，作为该重复的B.4结果计算与表示B.4.1计算与表示每重复每克种子的电导率，为该重复的电导率除以该重复的种子重量，单位以µScm-1g-1表示：L=式中：L——电导率；L1——样品电导率；L2——对照电导率；L1L1-L2M3（B.2）GB/TXXXX—2022B.4.2适用豆类种子的容许误差对于大豆、菜豆、豌豆、鹰嘴豆，若4次重复间电导率最高与最低值之差未超过表B.2规定容许误差的，则4次重复的电导率平均值为该样品的电导率。若差值超过表B.2的容许误差，则应重做4次重复，若第二次结果与第一次结果的差值未超过表B.3的容许误差的，则填报两次结果的平均值。在同一检验机构对于同一批种子批进行重复测定的，两次测定的容许误差见表B.3。在不同检验机构和不同样品进行测定的，两次测定的容许误差见表B.4。表B.2电导率测定四次重复间的最大容许误差(5%显著水平)33表B.2电导率测定四次重复间的最大容许误差（续）GB/TXXXX—2022表B.3同一检验机构同一样品电导率两次测定的容许误差(5%显著水平的两尾测定)3表B.3同一检验机构同一样品电导率两次测定的容许误差（续）GB/TXXXX—2022表B.4不同检验机构不同样品电导率两次测定的容许误差(5%显著水平的两尾测定)33表B.4不同检验机构不同样品电导率两次测定的容许误差（续）B.4.3适用萝卜种子的容许误差对于萝卜种子，按照下列公式计算方差、标准差和变异系数：Ν（Ν-1）……式中：S——方差；X——每个重复电导率，以µScm-1g-1为单位表示；N——重复的次数；—求和。GB/TXXXX—2022………………（B.3）s=S………………（B.4）式中：S——方差s——标准差X式中：C——变异系数 X——样品的平均电导率变异系数若不超过9.0，则重复是可接受的；变异系数若大于9.0，则需重新测定。在不同检验机构进行两次测定的，其两次测定的最大容许误差为电导率平均值×0.3326。GB/TXXXX—2022（规范性）加速老化测定C.1原理加速老化测定属于逆境试验，是将种子短期置于高温高湿（约95%）条件下，种子因吸湿而水分增加，同时伴随高温的作用，导致其加速老化。高活力种子批能忍受这种逆境条件处理，加速老化后仍能保持较高发芽率，而低活力种子批劣变较快，发芽率明显降低。C.2仪器和试剂a）老化箱，能保持（41±0.3）℃恒温，室内环境温度可通过空调进行调节。建议采用水调老化箱，将塑料或不锈钢锅放在箱底部，并填充水以保持老化过程中的相对湿度。b）塑料老化盒，带盖，长宽高规格大小分别为（11.0×11.0×3.5）cm，内有长宽高规格为（10.0×10.0×3.0）cm的塑料或金属网架，网孔大小为（1.16±0.01）mm×（1.63±0.01）mm。c）标有从0mL至100mL刻度的容量杯。d）感量为0.001g的天平。e）去离子水或蒸馏水。f）符合GB/TXXXXX.X的水分测定仪器。g）符合GB/TXXXXX.X的发芽试验仪器。C.3测定程序C.3.1样品水分调节按照GB/TXXXXX.X，测定送验样品的种子水分。样品水分处于10%～14%，直接进行测定，无需进行水分调节。对于水分低于10%或高于14%的，则应将样品水分调节至10%～14%，但在此范围内并不需要所有样品的水分都相同。调节种子水分时，应将一部分净种子充分混合，并随机分取一个至少有200粒种子的次级样品，称重。种子水分若低于10%，则将该次级样品的种子置于湿润纸巾间，让种子吸湿，直至水分达到10%~14%。如果种子水分高于14%，则将次级样品的种子置于30℃烘箱中，烘至水分达到10%～14%。水分调节通过称重法确定，重量可通过如下公式计算：GB/TXXXX—2022式中：M——10%或14%水分的次级样品重量；M0——种子初始重量P1——种子初始水分P2——种子设定水分，10或14。水分符合要求后，充分混合净种子，随机获取一个至少42g的次级样品。应将次级样品密封在一个防水容器内，于5℃~10℃下放置12h～18h，使水分达到平衡。C.3.2检查设备和材料C.3.2.1老化箱温度用经检定的温度计准确校准老化箱温度为（41±0.3）℃。只有当温度在（41±0.3）℃至少能保持2d时，才允许进行老化测定。C.3.2.2设备清洁度每次测定开始前，为防止菌类污染，塑料老化盒和网架采用15%的次氯酸钠溶液彻底清洗并烘干备用，包括托盘在内的老化箱内部也应使用次氯酸钠溶液洗涤，每年至少清洗两次。C.3.3加速老化C.3.3.1准备塑料盒和种子样品在每个老化盒中加入40mL去离子水或蒸馏水，然后插入干燥的网架，注意不能让水溅到网架上。称取（42±0.5）g大豆种子，在网架上摆为一层，以便从潮湿的环境中均匀吸收水分。在每个塑料老化盒上盖上盒盖（不需密封边缘）。将老化盒放在架子上排成一排，盒子之间保持约2.5cm的间隔，以确定温度均匀。每次测定应设置一个或多个对照老化样品。C.3.3.2老化种子将装有种子的塑料盒的架子放入老化箱内，注意不能让水溅到网面上。如果在一次测定中同时检验GB/TXXXX—2022多个样品，则应将它们同时放入老化箱并关闭箱门。记录放入的日期和时间，在（41±0.3）℃下老化72h。老化期间不能打开箱门，并连续监控老化温度，使其维持在（41±0.3）℃。老化完成后，将放有塑料盒的架子从老化箱中取出。当同一天在几个老化室对多个种子批进行老化测定时，不同老化室开始试验的时间间隔大约为1h或2h，以便为老化期后立即进行样品的发芽试验留出足够的时间。在老化试验结束时，进行发芽试验开始前，应立即称重对照样品。如果重量小于52g或大于55g，则表明测定结果不准确，应重新测定。若需要用400粒种子进行发芽试验，则应使用两份42g的次级样品进行老化试验。C.3.4发芽试验从老化箱中取出种子后，应在1h内进行发芽试验。每个样品设4个重复，每个重复50粒种子，按GB/TXXXXX.X的程序进行发芽试验。C.4结果计算与表示将每50粒的两个重复合并为一个100粒的重复，按照GB/TXXXXX.X的程序计算老化种子的发芽率。如果100粒的俩个重复间发芽率差距超过了表C.1规定的容许误差，则应重新测定。同一样品在同一检验机构进行两次老化测定时，两次测定结果的容许误差见表C.2。不同样品在不同检验机构进行老化测定时，两次测定结果的容许误差见表C.3。表C.1加速老化100粒2次重复间种子发芽率的容许误差（2.5%显著水平的两尾测定）1231232*3*6表C.1加速老化100粒2次重复间种子发芽率的容许误差（续）6789GB/TXXXX—2022———表C.2同一检验机构同一样品两次测定的容许误差（5%显著水平的两尾测定）1231232*3*4657689———表C.3不同检验机构不同样品两次测定的容许误差（5%显著水平的两尾测定）1231232*3*4*879 GB/TXXXX—2022（规范性）控制劣变测定D.1原理控制劣变测定属于逆境试验，与加速老化测定有所不同，是预先将种子水分提高到规定的统一水平，然后置于高温下，这样保证了所有样品接受同样程度的劣变处理。高活力种子批能忍受这种逆境条件处理，控制劣变后仍能保持较高发芽率，而低活力种子批劣变较快，会明显降低发芽率。D.2仪器设备a）能保持（45±0.5）℃温度的水浴箱。注：可使用具有相同精度的培养箱。当进行多项测试时，水浴可更均匀地保养箱，需注意确保其内部温度没有差异，尤其是b）感量为0.0001g的分析天平。c）铝箔袋,大小以长（7～10）cm、宽（5～6）cm为宜，单层能放置100粒种子，放置种子后上方至少还能留有3cm空间。已放入种子的铝箔袋经密封后应不渗漏水。d）对铝箔袋进行防水密封的密封机。e）滤纸或发芽纸符合GB/TXXXXX.X的要求。f）9cm培养皿或发芽盒等容器。g）能保持（7±2）℃温度的冰箱或低温培养箱。h）符合GB/TXXXXX.X的水分测定仪器。i）采用滚筒加水法的，实验滚筒具有每分钟30转；瓶口可密封的玻璃小瓶；符合表D.1所示的容量和准确度由填加的水的重量/体积决定的微量移液器。表D.1微量移液器的选择水的重量（mg）或体积(µL）微量移液器的量程(µL）精度(µL）1>2005j）符合GB/TXXXXX.X的发芽试验仪器（适用时）。k）离子水或蒸馏水、电导仪、基本直径应为50mm(±5mm)并提供足够的水深来浸泡所有种子GB/TXXXX—2022和电极的容器(烧杯或烧瓶)，同B.2。D.3测定程序D.4.1调节种子水分按照GB/TXXXXX.X测定种子初始水分（SMC)，然后将种子水分调整至20%。调节种子水分可任选下列方法之一：a）滤纸法随机数取4个重复、每个重复100粒种子，称重至4位小数。然后将每一重复种子置于容器内的湿润滤纸或发芽纸上吸胀。通过定时对种子称重，称重至4位小数，以确定种子何时达到设定水分。达到水分20%的种子按下列公式计算，计算至4位小数，修约至3位小数：M=M0根--………（D.1）式中：M——20%水分的种子重量；M0——种子初始重量；P1——种子初始水分；P2——种子设定水分。一般情况下，在9cm的发芽纸加（3～4）mL水即可，纸湿润而不是湿透，纸上应无多余的水。每一重复的加水量应一致。通常在置床后（1.25～1.5）h达到设定水分，具体取决于种子批、室内温度和相对湿度。种子达到设定水分后，迅速放入铝箔袋。平放袋子用手挤压出空气，用密封机将铝箔袋密封，袋子上方应有3cm空间。将封后的铝箔袋在（7±2）℃冰箱或培养箱中放置24h。b）滚筒加水法从净种子中数取500粒种子样品，称重保留小数点4位。计算20%水分的样品所需的重量，保留小数点后4位，修约至3位小数。将样品的种子水分提高到20%所需的水量计算如下：V=M-M0……………（D.2）式中：GB/TXXXX—2022V——所需水的体积(µLM——计算出的20%水分的种子重量（g将称重的种子样品放入玻璃瓶中，加入所需体积的水。将玻璃瓶放在滚筒上，每分钟30转8±2）℃过夜。重新称量每个样品计算提高的种子水分，并确保将种子包装在铝箔袋中之前为20±0.5%水分。用手将包装袋压平去除空气，并在种子上方3cm处加热密封。D.4.2种子劣变将4个重复的铝箔袋放入45℃水浴中，24h±15min后取出，置于流动的冷水中5min冷却。D.4.3劣变效果测试将种子从水浴中取出后30min内，采用以下两种方法之一进行劣变反应的测试。a）发芽试验将4个重复的劣变种子按GB/TXXXXX.X进行发芽试验。b）电导率测定从劣变后的种子中随机抽取100粒种子，重复4次，称重，保留到小数点后2位（0.01g）。将100粒种子样品加入装有50mL蒸馏水/去离子水的容器中，4个重复。将每一重复的种子放入装有50mL蒸馏水或去离子水的容器中。轻轻旋转每个容器，确保所有种子完全淹没。用铝箔或保鲜膜覆盖好每个容器，在（20±2）℃下放置16h±15min。开始测定时给每个样品的第一个重复贴上标签。同一时间内测定的容器数量不得超过在16h浸泡期结束后15min内测量电导率的数量，即通常一次测定的容器数量为（10～12）个。D.5结果计算与表示D.5.1发芽试验记录每一重复的发芽种子总数百分率、正常幼苗百分率。其中，发芽种子总数是指在控制劣变下发芽试验末期的正常幼苗和不正常幼苗数量之和。计算结果采用4个重复的平均值。结果填报发芽种子总数百分率、正常幼苗百分率。D.5.2电导率测定在16h±15min浸泡期结束后，测定每个重复的渗滤液的电导率。每个重复每克种子的电导率是在考虑了初始水分的电导率之后计算出来的，4个重复的平均值即为GB/TXXXX—2022该种子批的测定结果。每个重复的电导率的计算公式如下：L=L2……………（D.3）式中：L——电导率；L1——样品电导率；L2——对照电导率；然后计算方差、标准差和变异系数。如下：Σ……（D.4）式中：S——方差X——每个重复电导率，以µScm-1g-1为单位表示；N——重复的次数；—求和。s=S……………（D.5）式中：S——方差s——标准差C=sx100……………（D.6）X式中：C——变异系数一X——样品的平均电导率变异系数若不超过10.0，则计算重复间结果；变异系数若大于10.0，则应重做测定。当在不同检验机构进行两次测试时：两次测定的最大容许误差=电导率的平均值×0.3326。GB/TXXXX—2022（规范性）四唑活力测定E.1原理四唑活力测定是应用2,3,5～三苯基氯化（或溴化）四唑的无色溶液作为一种指示剂，以揭示活细胞呼吸