实验室病原微生物危害评估分析报告

试验室病原微生物危害评定汇报第1版生效日期：08月02日XX市疾病预防控制中心综合试验室目录第一章综合试验室试验活动生物危害评定汇报 1第二章结核分枝杆菌生物危害评定汇报 7第三章金黄色葡萄球菌生物危害评定汇报 12第四章副溶血性弧菌生物危害评定汇报 15第五章致泻大肠埃希菌生物危害评定汇报 17第六章伤寒沙门氏菌生物危害评定汇报 19第七章志贺氏菌生物危害评定汇报 22第八章蜡样芽胞杆菌生物危害评定汇报 24第九章单核增生李斯特菌危害评定汇报 28第十章流感病毒危害评定汇报 31第十一章禽流感病毒危害评定汇报 33第十二章肠道病毒71型危害评定汇报 36第十三章麻疹病毒生物危害评定汇报 39第十四章人类免疫缺点病毒HIV生物危害评定汇报 41第十五章乙型脑炎病毒生物危害评定汇报 43第一章综合试验室试验活动生物危害评定汇报为确保试验室工作人员在工作中不被危害性生物及物品所侵害，确保危害性物品不外泄，对试验室工作环境进行评定，以判定生物安全防护等级，确保生物安全。一、危害程度分类及生物安全防护水平评定生物源危害关键是由多种检验标本中微生物，尤其是病原微生物引发，包含细菌、病毒、寄生虫等，含有潜在危险性，可能引发试验室感染；微生物室还进行一定数量多种条件致病性细菌及真菌分离培养工作，工作过程存在病原微生物对试验人员、环境污染风险；除之以外试验室还存在触电、火灾、化学品腐蚀、偷窃等危险。依据《试验室生物安全通用要求》，本试验室不包含《人间传染病原微生物名目》中高致病性微生物分离培养及高致病性微生物菌、毒种保藏，试验室采取一定防护方法就能控制感染或防范灾难，或对对应病原体存在有效免疫方法。评定我试验室生物安全防护水平按二级试验室（BSL-2）生物安全要求。二、试验人员和试验室安全防护通常要求1.吸烟危害评定及防护（1）试验室工作区内绝对严禁吸烟；（2）点燃香烟是易燃液体潜在火种；（3）香烟、雪茄或烟斗全部是传染细菌和接触毒物路径。2.试验区内食用食物、饮料及其它危害评定及防护（1）试验工作区内不得有食物、饮料及存在“手－口”接触可能其它物质（2）试验室工作区内冰箱严禁存放食物。专用存放食物冰箱应放置在许可进食、喝水休息区内。3.使用化妆品危害评定及防护试验工作区内严禁使用化妆品进行化妆，但许可并提议常常洗手试验人员使用护手霜。4.试验中眼睛和面部风险评定及防护（1）处理腐蚀性或毒性物质时，须使用安全镜、面罩或其它保护眼睛和面部防护用具。（2）工作人员在试验室危险区内不要佩戴隐形眼镜，除非同时使用护目镜或面罩。（3）使用、处理能够经过粘膜和皮肤感染试剂，或有可能发生试剂溅溢情况时，必需佩带护目镜、面罩或面具式呼吸器。5.试验中服装和个人防护装备通常要求（1）应穿着符合试验室工作需要服装，工作服应洁净、整齐。当工作中有危险物喷溅到身上可能时，应使用一次性塑料围裙或防渗外罩。有时还需要佩戴其它防护装备如：手套、护目镜、披肩或面罩等。（2）采血员和其它需要接触病员工作人员，在接触病员时需穿试验服或工作服。（3）个人防护服装应定时更换以保持清洁，遇被危险物品严重污染，则应立即更换。（4）不得在试验室内设值班床，严禁在试验室内住宿。6.试验中足部防护通常要求在工作区内，应穿舒适、防滑、并能保护整个脚面鞋。在有可能发生液体溅溢工作岗位，可加套一次性防渗漏鞋套。帆布鞋可吸收化学物品和有传染性液体，所以最好穿皮革或其它防渗漏合成材料鞋。7.试验中头发和饰物风险评定及防护留长发工作人员应将头发盘在脑后，以预防头发接触到被污染物和避免人体脱屑落入工作区。头发不得垂肩，应和离心机、切片机等正在运转器械保持一定距离8.试验中胡须风险评定及防护蓄有胡须男性工作人员必需遵守上项（7）要求。9.洗手要求试验室工作人员在脱下手套后、离开试验室前、接触患者前后、和在进食或吸烟前全部应该洗手。接触血液、体液或其它污染物时，应立即洗手。10.用口移液危害评定及防护用口液移可造成多个病原体试验室感染。全部试验室操作严禁用口液移，应使用助吸器具。11.锐利物品危害评定及防护谨慎处理针头、解剖刀、和碎玻璃等锐利物品。使用后针具不要折断、弯曲、破损、反复使用或用手重装在针管上。一次性注射器上针头用后不要取下。锐利物品应立即放置在专用锐器盒内，在完全装满之前或48小时之内更换。12.隔离方法要求接触患者时，试验室工作人员应遵守医院隔离方法。13.工作环境要求（1）“清洁”区和“非清洁”区依据试验室具体工作情况由主任选择并确定“清洁”和“非清洁”工作区，在清洁区和非清洁区之间设“缓冲室”。被指定为“清洁”区域，则应努力保持清洁，如采取预防方法，预防电话、视频显示器终端、键盘、门柄及其它常常被手或手上手套触摸物品污染，要求工作人员在触摸设备（如计算机键盘及电话保护罩等）前取下手套，制订仪器设备和工作面常规消毒和清洁制度和对严重污染紧急处理方法措施。被指定为“非清洁”区域，许可戴手套接触全部物品（如电话、门柄、计算机终端和其它物品），全部这些物品表面全部认为是不清洁。未戴手套人员假如使用该区域内电话、计算机终端或其它设备，应该戴上手套，或在使用后立即根本洗手。“清洁”和“非清洁”区全部应保持整齐。试验台最少应天天清洁、消毒一次，如有必需能够数次清洗、消毒。在处理溅溢样品或严重污染工作面时，应戴上手套和其它个人防护装备、使用对应适宜清洁剂清除全部溅溢物。（2）冰箱、冷冻柜、水浴和离心机应该定时清洗和消毒（时间由试验室主任来决定），在发生严重污染后应立即进行清洗和消毒。进行清洗、消毒时要戴上手套，穿上工作服或其它适宜防护服。（3）外衣：外衣（试验服、工作服、和围裙）应悬挂在远离散热器、蒸汽管道、供暖装置、和有明火地方，不要挂在压缩气瓶或灭火器上，也不要挂在门玻璃隔板上，妨碍视线。“清洁”和“非清洁”个人防护服要分开存放。（4）垃圾处理：天天最少清理垃圾一次。（5）装饰：不得在电灯、灯座或仪器上进行装饰，更不要使用电子装饰物、蜡烛、圣诞树等有引发火灾危险装饰品。（6）为便于清洁消毒，试验室内不应有织物装饰用具或椅子。（7）个人物品：试验工作区不得存放个人物品，如钱包、外套、皮靴、咖啡杯、运动服、预包装食品和药品等。（8）试验室内应配置应急设备，如应急洗眼装置，酒精等消毒用具。（9）试验室应安装非手触式洗手装置。（10）试验室内应安装防蚊蝇装置，应定时投撒灭蟑螂、老鼠药品。（11）用后废弃物品：试验工作区内用后废弃物品存量不要太大。具危险性液体如酸或碱性液体应放在视平线以下。较大废弃物容器应靠近地面存放。（12）出口通路：试验室出口和通道必需保持通畅无阻，不准堆放物品、垃圾、装置、或设备。安全门必需保持通畅，不得堵塞。注意：不管任何时间、何种原因全部不得阻塞通往灭火器、火警箱、防火毯、安全淋浴或出口道路。14.使用玻璃器具危害评定及防护操作玻璃器具时应遵照下述安全规则：（1）不使用破裂或有缺口玻璃器具。（2）不要用猛力取下玻璃试管上塞子，粘紧试管可用刀切开分离。（3）接触过传染性物玻璃器具，清洗之前，应先行消毒。（4）破裂玻璃器具和玻璃碎片应丢弃在有专门标识、单独、不易刺破容器里。（5）高热操作玻璃器具时应戴隔热手套。（6）在不影响试验质量前提下，应尽可能降低使用玻璃器具。15.使用离心机危害评定及防护感染路径危害评定感染路径危害评定感染路径危害评定皮肤极少粘膜（眼结膜）可能呼吸道可能消化道（经手-口）极少经血（针刺伤、切割伤）极少经血（虫媒介）极少（1）气溶胶：离心过程中应控制气溶胶产生在最低水平。（2）操作：离心机只有在盖好盖板后，才能开启。（3）传染性物品：全部能够产生气溶胶进行播散生物制品或标本，全部应使用密封离心管，并在盖紧离心头或转头中进行。（4）为预防气溶胶飞溢，应在离心停止30分钟后打开离心物。（5）清洗：根据消毒隔离制度要求清洗离心机。（6）平衡：离心时应保持适宜平衡，以确保离心顺利进行。16．采集血样危害评定及防护感染路径危害评定感染路径危害评定感染路径危害评定皮肤极少粘膜（眼结膜）极少呼吸道可能消化道（经手-口）极少经血（针刺伤、切割伤）可能经血（虫媒介）极少偷窃可能化学腐蚀极少放射无（1）天天早晨用500mg/L”84”消毒液擦拭抽血台面及其它物表，并开紫外灯消毒最少30分钟，并做好统计。（2）工人天天早晨更换消毒液，包含浸泡锐器、止血带消毒液和手消毒液。（3）工作人员必需穿工作服，戴好口罩、帽子、和手套。（4）使用合格一次性用具。严禁使用包装破损，超出使用期一次性用具。（5）严格实施无菌技术操作规程、静脉采血必需一人一针一管一巾一带。微量采血应做到一人一针一管一片，对每位病人操作前洗手或手消毒。（6）无菌物品如棉球需天天更换，开启后使用不得超出二十四小时。（7）工作人员需对锐器如采血针采取高度预防方法，用过采血针需浸泡在含有消毒液厚壁容器中。17.标本(血清、血浆、全血、尿)上检验分析仪检测过程危害评定及防护感染路径危害评定感染路径危害评定感染路径危害评定皮肤极少粘膜（眼结膜）可能呼吸道可能消化道（经手-口）极少经血（针刺伤、切割伤）极少经血（虫媒介）极少偷窃可能化学腐蚀无放射无（1）为了避免液滴和气溶胶和扩散，试验室仪器加样、加液，清洗等过程应在封闭罩内进行。（2）试验中使后比色盘，反应杯等废弃物应该搜集在封闭容器内，集中处理。（3）在每一步完成后应依据操作指南对对仪器进行消毒。血液、体液污染物表时，应立即消毒。（4）工作人员要戴手套进行操作。18.标本(血清、血浆、全血、尿、粪)手工检测过程危害评定及防护感染路径危害评定感染路径危害评定感染路径危害评定皮肤可能粘膜（眼结膜）可能呼吸道可能消化道（经手-口）可能经血（针刺伤、切割伤）可能经血（虫媒介）极少偷窃可能化学腐蚀可能放射无（1）天天早晨做好试验室清洁消毒工作。（2）工作人员要戴口罩、手套进行操作。（3）试验中使用竹签用后要用1000mg/L“84”消毒液浸泡。（4）废弃标本连同试管、盖帽要用1000mg/L“84”消毒液浸泡，由工人统一清洁后进行无害化处理。（5）试验中使用吸头、一次性塑料杯用后要用1000mg/L“84”消毒液浸泡。（6）标本污染物表时，应立即消毒。（7）离心时，发生试管破裂或标本溅出，由操作者负责用有效消毒剂对离心机内部进行立即消毒处理。19．微生物分离判定药敏试验及基因扩增试验活动危害评定及防护感染路径危害评定感染路径危害评定感染路径危害评定皮肤可能粘膜（眼结膜）可能呼吸道可能消化道（经手-口）可能经血（针刺伤、切割伤）可能经血（虫媒介）可能偷窃可能化学腐蚀极少放射无（1）天天早晨开紫外灯消毒空气最少30分钟，同时做好各物表、仪器清洁消毒工作。（2）试验人员要戴手套、帽子进行操作。当估量会出现微生物和危险物溅出时要戴好眼罩或面罩。（3）操作中使用接种环、镊子等金属物品要在酒精灯火焰上烧灼灭菌。（4）可能产生致病性微生物气溶胶或出现溅出操作如涂片、接种时，应在生物安全柜内操作，并使用个体防护设备。（5）试验室内多种标本、菌种、培养基和其它废弃物在运出试验室前必需灭活（高压、浸泡），需运出试验室灭活物品必需放在专用密闭容器中。（6）操作过程中发生菌种污染物表时，应立即采取方法进行物表消毒。（7）当发生致病性微生物气溶胶污染时，应立即进行人员疏散，通知责任人到现场进行指导消毒。（8）对菌种保留应严格遵守菌种保留制度，严禁私自保留多种国家法定传染病菌株或毒株。（9）试验人员离开试验室前要去除手套，确定无污染或污染已排除，后方可洗手离去。（10）微生物、PCR试验室要设置纱窗、挡鼠板。三、特定试验活动危害评定见以下章节之多种病原体危害评定四、工作人员素质本试验室共有技术人员10名，其中申请进入BSL-2试验室10名。硕士学位3名，5名曾经从事微生物学试验，5名曾经从事无菌试验室活动经历，10名技术人员学习过生物安全手册并经过定时培训及考评成绩合格，经体检无现患严重疾病，本试验室无其它患传染性疾病技术人员，健康状态良好。五、评定结论此次评定本试验室共14项可能潜在危险试验活动，在试验操作试验施过程中在无控制方法情况下可能产生高危害度2项，中度12项，低度0项；对危害发生可能性分析，试验危害较大可能发生有0项，可能发生2项，较少可能发生12项；这些危害造成高度严重后果2项，后果严重性中度12项，后果严重性低度0项。依据拟采取预防控制方法后仍然存在残留风险为高度0项，中度0项，低度危害12项。评估：XX市疾病预防控制中心综合试验室评定人：审核：XX市疾病预防控制中心生物安全管理委员会审核人：8月02日第二章结核分枝杆菌生物危害评定汇报结核病是由结核分枝杆菌（偶然可由牛型或非洲型分枝杆菌）引发一个细菌性疾病。结核病可累及全身各个器官，但以肺结核最为常见。该病含有传染性强，散播面广，不分地域均可发生。结核病可由呼吸道、消化道、皮肤等路径感染，但其关键传输路径是以空气为传输因子呼吸道传染，而排菌肺结核病人传染性更大，是传输感染关键传染源。1.传输路径呼吸道感染（respiratortractinfection）是肺结核关键传染路径（routesofinfection），飞沬传染（dropletinfection）为最常见方法。传染源关键是排菌肺结核患者（尤其是痰涂片阳性未经诊疗者）。飞沬核（dropletnuclei）＜10μm时可被吸人呼吸道，健康人可因吸入患者咳嗽、打喷嚏时喷出带菌飞沫而受感染。2.危害程度分级微生物按其是否致病、致病力强弱、危害人体严重性、传染性大小、临近人群抵御力、有没有免疫制剂和特效诊疗药品等综合评价，可分为四个不一样危害等级。结核分枝杆菌属于3级危险。3级危险（对个体含有极大危害，对群体含有较大危害性）：指有特殊危险致病菌。感染后症状较重，并可能危及生命，或缺乏有效预防方法、发病后不易诊疗微生物。3.试验室感染原因及预防（一）技术操作可能造成感染及其预防方法。1.接种：应使用无弹力铂丝接种环，结核菌接种后接种环火焰灭菌易崩散，酒精灯烧灼时要尤其注意。2.混匀：吸管吸吹菌液时不要产生气泡，应沿容器壁排出。3.研磨：最好使用组织研磨器，乳钵易产生气溶胶。4.移液：吸管上端棉花松紧要适度，吸液时要从管底吸收，吹出时要轻缓，不要全部吹净，以免产生气泡，形成气溶胶。5.开封：要避免压力和气流急剧改变。6.离心：离心管套底垫要完好，使用匹配管、套、离心头，加盖。7.注射：做好个人防护，正确使用注射器。8.搬运：室内移动要避免滑落，移出室外要有坚实密闭外包装。（二）技术保障1.双人标准，不许可单人操作1、2类病原。2.入口处应有危险警示标识，并标明所操作微生物种类。3.培训考评上岗，掌握相关技术操作要领，熟悉规章制度，适应工作环境。4.完备管理方法，技术操作规范。5.良好工作行为可降低生物危害风险。4.试验室中分枝杆菌及分枝杆菌气溶胶结核病试验室工作人员，在分枝杆菌检验过程中，会接触到多种潜在感染源标本和多种危险物，尤其是很多操作易产生分枝杆菌气溶胶。含有结核分枝杆菌微滴核（1-5微米）经过呼吸进入人体肺泡，能够黏附在肺泡内生长繁殖。所以，首先要对试验室中生物危险物产生路径和存在地点有充足认识，方便明确生物安全防护步骤。(一)分枝杆菌存在地点1、多种临床标本，通常是痰，胃或支气管灌洗液、脑脊液、尿液等。2、被污染操作台、器械、仪器、试剂等。3、搜集结核分枝杆菌、非结核分枝杆菌菌株等。4、细菌学试验室部分区域。(二)产生分枝杆菌气溶胶1、试验室内可疑肺结核患者痰标本采集。2、样本制备和涂片火焰固定。3、分离培养或接种培养物。4、用火焰烧灼接种环。5、使用移液器混合培养物。6、培养管或培养瓶中含有培养物滴落物。7、溢出分枝杆菌悬浮液。8、高速混合含有分枝杆菌液体。9、转移液态培养物和上清液，或培养液、上清液倾倒。10、离心过程中离心管破碎。11、用做原代培养所需组织匀浆。5.安全防护(一)严格遵守试验室安全操作规程，任何时侯全部要警惕分枝杆菌气溶胶产生。试验室技术人员必需经过生物安全培训后方可上岗。(二)试验室应严格限制非试验人员进入，降低试验室内外交叉生物污染。完成试验工作离开试验室，要关好门窗。(三)进入试验室应避免携带非必需物品。(四)进入试验室，工作人员应穿着工作服，操作时应穿戴防护隔离衣、口罩、帽子和手套，长发者应将头发装束在帽子内。(五)试验过程中绝对严禁吸烟、饮食等，不要以手抚头面部等。(六)试验前须开启紫外线灯对试验室和操作区域进行照射消毒1小时以上；试验结束后，立即开启紫外灯进行照射消毒2小时以上。(七)任何试验开始和结束后，操作人员要用70%酒精浸泡双手或仔细擦后，用清洁剂或清水洗净。(八)每次试验结束后，必需清理好试验台，并用70%酒精液或3-5%石炭酸擦洗试验台面。(九)试验室中生物危险品要依据检验项目和性质不一样，局限在对应试验区间，不得随意将其带到其它试验室。(十)试验室内任何微生物样本，废弃物全部必需经高温高压灭菌后，方可按通常垃圾处理。6.安全保障(一)首先各级试验室应按等级要求完善试验设施，如简易安全柜内抽气排风功效、紫外灯消毒功效，生物安全柜维护和除菌滤膜定时更换等。(二)试验室采集病人痰标本时应在户外进行，避免因病人咳漱造成室内气溶胶污染。(三)一般试验室应注意气流方向，试验过程中尽可能避免强气流改变而产生气溶胶（如﹕涂片、染色过程中）。(四)细菌分离培养、菌种开封、转种、研磨、稀释等操作，各级试验室均应在简易安全柜或生物安全柜中进行。(五)使用接种环进行操作时，接种环应在工作灯内焰中燃烧，以避免菌液或菌块飞溅。(六)稀释菌液时，吸管、针管要缓慢插入试管或烧瓶底部，小心操作避免产生气泡或气溶胶。(七)使用注射器加样时，用过针头切勿再重新入套或拔开注射器和针头，应直接放入锐器搜集器，以免划破皮肤造成接种感染。(八)菌株库要设专员管理，并根据国家微生物菌毒种管理措施实施。(九)进行毒菌操作过程中，不要穿戴巳经污染防护性手套触摸门柄、仪器或毒菌区以外区域，避免因为粗心扩大污染范围。(十)试验结束后，操作过程中全部可能和生物危险物接触或被污染试验器械和物品，能够高压消毒必需高压消毒，不能进行高压消毒设备、仪器，应使用有效消毒剂擦洗后再以紫外灯近距离长时间消毒。(十一)试验中发生意外污染情况，应立即通知主管人员并做好处理污染物和对应区域准备，不得私自采取其它严禁方法进行消毒处理。(十二)试验室主任应制订规章和程序，只有通知潜在风险并符合进入试验室特殊要求(如，经过免疫接种)人，才能进入试验室。(十三)操作致病性微生物时，试验室入口处应贴有生物危险标志，并显示以下信息：相关病原、生物安全等级、免疫接种要求、研究人员姓名、电话号码、在试验室中必需佩带个人防护设施、出试验室所要求程序。(十四)试验室主任为试验室人员尤其制订标准操作程序或生物安全手册中，应包含生物安全程序。对于有特殊风险人员，要求阅读并在工作及程序上遵照实施。(十五)试验室主任确保试验及其辅助人员接收合适培训，包含和工作相关可能存在风险、预防暴露必需方法和暴露评定程序。(十六)试验室所用任何个人防护装备应符合国家相关标准要求。试验室应确保含有足够有合适防护水平清洁防护服供使用。还应穿戴其它个人防护装备，如手套、防护镜、面具、头部面部保护罩等。(十七)处理样本过程中易产生高危害气溶胶时，要求同时使用合适个人防护装备、生物安全柜和/或其它物理防护设备。如可产生含生物因子气溶胶，应在合适生物安全柜中操作。(十八)试验用鞋应舒适，鞋底防滑。应用皮制或合成材料不渗液体鞋类。在从事可能出现漏出工作时可穿一次性防水鞋套。在试验室特殊区域（比如有防静电要求区域）或BSL-3和BSL-4试验室要求使用专用鞋（比如一次性或橡胶靴子）。7.结核病试验室废物处理一、试验室废弃物处理目标：(一)将操作、搜集、运输、处理及处理废弃物危险减至最小；(二)将试验室废弃物对环境有害作用减至最小。二、试验室污物处理及消毒(一)试验室含有生物危险物临床标本及被污染一次性用具，试验完成后，应在操作台或试验区域内以紫外灯近距离照射消毒2小时以上，再经高压消毒后方可丢弃或焚烧。(二)可反复使用试验用具及器材，完成试验后，应在操作台或试验区域内经紫外灯近距离照射消毒2小时以上后，再交相关人员进行高压消毒和煮沸洗刷。(三)试验用试管、吸管、注射器，须装在加盖不漏容器内，经高压灭菌后取出。(四)培养物或试验室垃圾，在丢弃前必需经高压消毒和紫外灯近距离长时间照射处理。不许可积存垃圾和试验室废弃物。已装满容器应定时运走。在去污染或最终处理之前，应存放在指定安全地方，通常在试验室区内。(五)试验室废弃物应置于合适密封且防漏容器中安全运出试验室。有害气体、气溶胶、污水、废液应经合适无害化处理后排放，应符合国家相关要求。(六)试验过程中，如标本或含标本前消化处理液被打翻污染了操作台或地面，应以吸满70%酒精卫生纸覆盖污染区，15分钟以后卫生纸方可移去。(七)试验室内未经消毒污水，严禁直接排入公共排水系统，更不许可混入居民生活垃圾。8.意外事故处理(一)假如发生意外，必需立即通知试验室主管人员，并在相关人员指导监督下对出事现场进行处理，绝对严禁未经汇报而私自对出事现场给非规范处理。(二)试验过程中，如污染物溅落到身体表面，或有割伤、刺伤、烧伤、烫伤等情况发生，应立即停止试验工作进行紧急处理，更换被污染试验服，皮肤表面用消毒液清洗，伤口以碘酒或酒精消毒，眼睛用无菌生理盐水冲洗。(三)假如发生菌液溢出，含菌种培养管破碎等，造成中、小面积污染，可用比污染面积大25%以上纱布覆盖污染区域，边缘用脱脂棉围住，向纱布倾倒5%苯酚溶液或70%酒精，浸泡2小时以上（其间适量加溶液预防干燥），再经紫外灯近距离（1米内）照射2小时以上；被污染器械、容器等立即浸泡于70%酒精中2小时以上，试验完成后再进行高压消毒处理。(四)假如发生气溶胶污染或大面积污染，应立即停止试验并关闭试验室，对污染区域进行紫外灯照射消毒过夜；第二天对污染区进行二十四小时封闭空气熏蒸消毒（乙醛消毒法﹕5ml乙醛＋2g高锰酸钾/m3空间）。(五)绝对严禁使用事故处理方法﹕1.任何有可能造成污染面积扩大去污方法，如使用70%乙醇或甲酚皂液擦洗被污染区域。2.直接用火焰对未经任何处理污染地面、操作台、器械等进行烧灼处理。3.使用消毒效果未经证实消毒剂进行消毒。4.使用低浓度消毒剂和紫外灯进行短时间、长距离照射。第三章金黄色葡萄球菌生物危害评定汇报1.生物学特征金黄色葡萄球菌是人类一个关键病原菌，隶属于葡萄球菌属，可引发多个严重感染。金黄色葡萄球菌为球型，直径0.8μm左右，显微镜下排列成葡萄串状。金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜，革兰氏染色阳性。金黄色葡萄球菌营养要求不高，在一般培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37°C，最适生长pH7.4。平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1-2mm。血平板菌落周围形成透明溶血环。金黄色葡萄球菌有高度耐盐性，可在10-15%NaCl肉汤中生长。可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。甲基红反应阳性，VP反应弱阳性。很多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐，液化明胶。2.危害程度分类依据中国卫生部制订《人间传染病原微生物名目》该菌危害程度为第三类。3.致病性和感染剂量金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见病原菌，可引发局部化脓感染，也可引发肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。金黄色葡萄球菌致病力强弱关键取决于其产生毒素和侵袭性酶，有报道现在出现越来越多耐药菌株，MRSA即耐甲氧西林金黄色葡萄球，菌致病性也伴随变强。4.暴露潜在后果暴露后可能引发感染，菌量大时可使试验人员出现皮肤软组织感染、全身性感染、呼吸道感染、中毒、肠炎等。被感染后，成为传染源，可能对周围及环境造成污染，应立即得到诊疗和控制。5.感染路径经过污染食品和水源经口传输，也可经过呼吸道和接触传输。6.微生物在环境中稳定性葡萄球菌是无芽胞菌中抵御力最强者，而干燥可达数月，加热80℃7.浓度和浓缩标本容量通常样本检测。8.自然和易感人群宿主金黄色葡萄球菌常存在于鼻咽喉、下消化道、毛发和皮肤上，在人类和一般动物全部有存在。致病性依据宿主状状，卫生情况，皮肤和黏膜有否创伤而异。当宿主免疫力下降，皮肤黏膜有创伤或卫生情况不好是易感染，尤其是老人和婴儿。9.试验操作活动巳有文件证实，金黄色葡萄球菌可造成试验人员化脓性和呼吸道感染，人类不是该菌在唯一传染源，在很多动物身上全部存在该菌。这种病原体能够存在于受感染人或动物脓液，血液等多个体液中。经过污染食品和水源经口传输，和经过呼吸道和接触传输是该菌关键传输方法，该菌也是引发院内感染关键细菌之一。暴露在气溶胶中也可能引发感染。根据国家标准方法对样本（粪便、食品、水样）进行分离，培养，判定。提议采取BSL-2级水平操作技术，防扩散设备和设施。一旦发生意外，根据本试验室《意外事故应对方案和应急程序》进行处理。10.预防和诊疗金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见病原菌，可引发局部化脓感染，也可引发肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。现在疫苗还不可用于人类。该菌能对人体多部位感染，所以跟据所致疾病不一样也应采取不一样诊疗方案，关键是对症处理和针对病原诊疗，大致用药可选择红霉素、新型青霉素、庆大霉素、万古霉素或先锋霉素Ⅵ诊疗。预防金黄色葡萄球菌感染，首先是要做好个人卫生，和加强餐饮和食品卫生管理，立即发觉带菌者，做好多种动物管理工作，把能传输该菌路径有效控制好。11.工作人员素质卫生技术专业人员，并经过生物安全培训后取得上岗证书。12.评定结论该菌生物性状较稳定，但抗生素有滥用，也出现了不少耐药株。该菌主经过污染食品和水源经口传输，也可经过呼吸道和接触传输，可引发局部化脓感染，也可引发肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。预防手段关键预防金黄色葡萄球菌感染，首先是要做好个人卫生，和加强餐饮和食品卫生管理，立即发觉带菌者，做好多种动物管理工作，把能传输该菌路径有效控制好。试验过程建仪采取BSL-2级水平操作技术、防扩散设备和设施。试验室中应穿着工作服或罩衫等防护服。离开试验室时，防护服必需脱下并留在试验室内。不得穿着外出，更不能携带回家。用过工作服应先在试验室中消毒，然后统一洗涤或丢弃。当手可能接触感染材料、污染表面或设备时应戴手套。如可能发生感染性材料溢出或溅出，宜戴两副手套。不得戴着手套离开试验室。工作完全结束后方可除去手套。一次性手套不得清洗和再次使用。操作台面用70%酒精或含氯消毒剂擦拭，废弃物处理按本试验室废弃物处理制度进行。第四章副溶血性弧菌生物危害评定汇报副溶血性弧菌（VibrioParahemolyticus,VP）是一个嗜盐性细菌。副溶血性弧菌食物中毒，是进食含有该菌食物所致，关键来自海产品，如墨鱼、海鱼、海虾、海蟹、海蜇，和含盐分较高腌制食品，如咸菜、腌肉等。本菌存活能力强，在抹布和砧板上能生存1个月以上，海水中可存活47天。临床上以急性起病、腹痛、呕吐、腹泻及水样便为关键症状。本病多在夏秋季发生于沿海地域，常造成集体发病。因为海鲜空运，内地城市病例也渐增多。此菌对酸敏感，在一般食醋中5分钟即可杀死；对热抵御力也较弱。副溶血性弧菌食物中毒多发生在6~10月，海产品大量上市时。中毒食品关键是海产品，其次为咸菜、熟肉类、禽肉、禽蛋类，约有半数中毒者为食用了腌制品后。中毒原因关键是烹调时未烧熟煮透或熟制品被污染。。1.PCR检测用于检测V．pPCR方法关键有任意引物PCR(abritrarilyprimedPCR，Ap-PCR)、针对副溶血性弧菌任意引物PCR、多重PCR(muhiplex-PCR)、实时PCR(Real-timePCR)。实时PCR常规PCR检测，需要从反应体系中吸收产物做电泳或Southern杂交等试验进行判定，转移过程中易污染，造成假阳性，而且花费时间。1996年，Tyagi开创了一个实时PCR(Real-timePCP,)。实时PCR是在，PCR反应体系中加入标识有汇报基团和淬灭基团线性Taqman。探针或茎环型荧光分子信标探针，在墓因扩增过程中，和产物杂交，此时，汇报基团和淬灭基团分开，依据能量共振转移现象，汇报基团发出荧光而被检测。这种方法操作简单，闭管检测，降低污染，灵敏度高，而且能够在PCR结束或PCR过程进行同时定性或定量检测，面且能够进行临床大规模快速检测。2.流行病学传染源传染源为病人，集体发病时往往仅少数病情严重者住院，而多数未住院者可能成为传染源，但因为病人仅在疾病早期排菌较多，其后排菌快速降低，故不至因病人散布病菌而造成广泛流行。传输路径本病经食物传输，关键食物是海产品或盐腌渍品，常见者为蟹类、乌贼、海蜇、鱼、黄泥螺等，其次为蛋品、肉类或蔬菜。进食肉类或蔬菜而致病者，多因食物容器或砧板污染所引发。地域分布特点：日本及中国沿海地域为副溶血性孤菌食物中毒发病率高发区。据调查，中国沿海水域、海产品中副溶血性弧菌检出率较高，尤其是气温较高夏秋季节。但多年来伴随海产食品市场流通，内地也有副溶血性弧菌食物中毒散在发生。季节性特点及易感性：7～9月常是副溶血性弧菌食物中毒高发季节。男女老幼均可患病，但以青壮年为多，病后免疫力不强，可反复感染。食物种类：关键是海产品，其中以墨鱼、带鱼、虾、蟹最为多见，如墨鱼带菌率达93%，其次为盐渍食品。食品中副溶血性弧菌起源：人群带菌者对多种食品直接污染。沿海地域饮食从业人员、健康人群及渔民副溶血性弧菌带菌率为11.7%左右，有肠道病史者带菌率可达31.6～88.8%。间接污染，沿海地域炊具副溶血性弧菌带菌率为61.9%，被副溶血性弧菌污染食物，在较高温度下存放，食用钱加热不根本或生吃，或熟制品受到带菌者、带菌生食品、带菌容器及工具等污染。3.诊疗方法支持及对症诊疗脱水者需输入生理盐水及葡萄盐水，或口服补液盐，以纠正失水。血压下降者，除被动补充血容量，纠正酸中毒等外，可酌用血管活性药。抗菌药品轻度患者可不用抗菌药品，较重者可给复方新诺明或庆大霉素、阿米卡星和诺氟沙星等喹诺酮类抗菌药品【上述抗生素类可能使细菌产生耐药性，使用须谨慎】。发生中毒后要立即停止食用可疑中毒食品，并到医院医治。副溶血性弧菌对氯霉素敏感。呕吐、腹泻严重者要补充水和盐。4.中毒预防加工海产品案板上副溶血弧菌检出率为87.9%。所以，对加工海产品器具必需严格清洗、消毒。海产品一定要烧熟煮透，加工过程中生熟用具要分开。烹调和调制海产品拼盘时可加适量食醋。食品烧熟至食用放置时间不要超出4个小时。关键病理改变为空肠及回肠有轻度糜烂，胃粘膜炎、内脏（肝、脾、肺）淤血等。第五章致泻大肠埃希菌生物危害评定汇报1.生物学特征大肠埃希氏菌更习惯称为大肠杆菌，分类于肠杆菌科，归属于埃希氏菌属，统称为致泻性大肠杆菌，通常包含五种：即肠毒素性大肠杆菌（ETEC）、致病性大肠杆菌（EPEC）、出血性大肠杆菌（EHEC）、侵袭性大肠杆菌（EIEC）和粘附性大肠杆菌（EAEC）。大肠埃希氏菌为两端钝圆短小杆菌，通常大小约0.5μ-0.8μm*1.0μm-3.0μm,因生长条件不一样，部分菌体可呈近似球状或长丝状。此菌多单独存在或成双，但不呈长链状排列。约有50%左右菌株含有周生鞭毛而能运动，但多数菌体只有1-4根，通常不超出10根，故菌体动力弱；多数菌株生长有比鞭毛细、短、直且数量多菌毛，有菌株含有荚膜或微荚膜；不形成芽胞，对一般碱性染料着色良好，革兰氏染色阴性。此菌合成代谢能力强，在含无机盐、胺盐、葡萄糖一般培养基上生长良好。最适生长温度为37℃，在42-44℃条件下仍能生长，生长温度范围为15大肠埃希氏菌生华物性是，发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖和甘露醇产酸产气，分解蔗糖因菌株而异，录素酶试验阴性，IMVi试验++--，有些菌株如碱性异型菌群，微产碱，不产气，无动力，易和志贺菌混淆。大肠埃希氏菌抗原结构关键由菌体抗原(O)，鞭毛抗原(H)和荚膜抗原(K)三部分组成。现巳知有171个O抗原、99个K抗原和56个H抗原。2.危害程度分类依据中国卫生部制订《人间传染病原微生物名目》该菌危害程度为第三类。3.致病性和感染剂量致泻大肠埃希氏菌在人和动物大便中大量存在，引发人体以腹泻症状为主全球性疾病，其中尤以EPEC、ETEC所占百分比为大。其中有少数多个引发人类食物中毒，部分埃希氏菌株與嬰兒腹瀉有關，並可引发成人腹瀉或食物中毒暴發，感染剂量约为107～108。尽管现在报道各地关键腹泻病是由志贺氏菌或轮状病毒引发，不过，多年来，致泻性大肠杆菌引发腹泻病例一直在第二位，可见大肠杆菌肠道传染广泛性。还有，致泻性大肠杆菌亦可常年引发人体腹泻，以夏秋季为高峰，在患者感染住院率中，婴幼儿占60%以上4.暴露潜在后果摄入是关键试验室危害，可引发试验人员感染。暴露在气溶胶中能否造成危害尚不清楚。5.感染路径经过污染食品和水源经口传输。6.微生物在环境中稳定性此菌对理化原因抵御力，在无芽胞菌中是最强一个，在室温可存活数周，在土壤、水中存活数月，耐寒力强，不过在30分钟内快速冷冻，将37℃降至4℃过程，可杀死此菌。加热60℃7.浓度和浓缩标本容量通常样本检测。8.自然和易感人群宿主致泻大肠埃希氏菌宿主关键为牛、猪、羊、鸡等家禽家畜，很多被该微生物污染食物全部不得能够作为传输媒介，幼儿、老人及免疫缺点者更为易感。9.试验操作活动致泻大肠埃希氏菌巳证实会对试验人员造成危害。摄入是关键试验室危害，暴露在气溶胶中能否造成危害尚不清楚。根据国家标准方法对样本（粪便、食品、水样）进行分离，培养，判定。提议采取BSL-2级水平操作技术，防扩散设备和设施。一旦发生意外，根据本试验室《意外事故应对方案和应急程序》进行处理。10.预防和诊疗致泻大肠埃希氏菌引发人体以腹泻症状为主疾病，依据菌型不一样可引发如部分疾病：轻度水泻，痢疾样腹泻、出血性腹泻，也可引发食物中毒性疾病。现在尚无可用于人类疫苗。对本病诊疗，病人应予胃肠道隔离，除通常诊疗外，可依据大便细菌培养及药品敏感试验选择合适抗菌药品作病原诊疗，如选择庆大霉素、丁胺卡那霉素等。预防致泻大肠埃希氏菌感染，首先是要做好个人卫生。切实做好饮食卫生、水源及粪便管理,消亡苍蝇,切断传输路径，预防病从口入。第六章伤寒沙门氏菌生物危害评定汇报伤寒沙门菌，又称伤寒杆菌，属沙门菌属D组。革兰染色阴性，呈短杆状，周有鞭毛，能活动，不产生芽孢，无荚膜。在一般培养基上能生长，在含有胆汁培养基中生长愈加好。伤寒杆菌在自然界中生活力较强，在水中可存活2—3周，在粪便中能维持1—2个月，在牛奶中不仅能生存，且可繁殖。耐低温，在冰冻环境中可存活数月，但对光、热、干燥及消毒剂抵御能力较弱，日光直射数小时即死，加热至60~C后30分钟或煮沸后立即死亡，消毒饮水余氯可快速致死。伤寒杆菌只感染人类，在自然条件下不感染动物。伤寒杆菌含有菌体(“O”)抗原、鞭毛(“H”)抗原和表面(“i'’)抗原，均能产生对应抗体，但这些并非保护性抗体。因为“O”和“H”抗原性较强，故常见于血清凝集试验(肥达反应)以辅助临床诊疗，亦可用以制备伤寒菌苗供预防接种。“i'’抗原见于新分离(尤其是从病人血液分离)菌株，能干扰血清中杀菌效能和吞噬功效，是伤寒杆菌关键毒力因子，但其抗原性不强，所产生“i'’抗体凝集效价通常较低且为时甚短。当病原菌从人体中清除后，“i'’抗体滴度快速下降，故“i'’抗体检出虽对本病诊疗无多大帮助，但有利于发觉带菌者。伤寒杆菌在菌体裂解时可释放强烈内毒素，对本病发生和发展起着较关键作用。1.流行病学(一)传染源：为病人及带菌者。病人从潜伏期开始即可从粪便排菌，从病程第1周末开始经尿排菌，故整个病程中全部有传染性，尤以病程2—4周内传染性最大。慢性带菌者是本病不停传输或流行关键传染源。原有慢性肝胆管疾病(如胆囊炎、胆石症等)伤寒病人易成为慢性带菌者，约1％—4％患者在肠道和胆囊中隐藏伤寒杆菌达数月或数年之久。(二)传输路径伤寒杆菌随病人或带菌者粪、尿排出后，经过污染水或食物、日常生活接触、苍蝇和蟑螂等传输。其中，水源污染是本病传输关键路径，亦是暴发流行关键原因。食物污染也可引发本病流行，而散发病例通常以日常生活接触传输为多。(三)人群易感性人对伤寒普遍易感。病后可取得持久性免疫，再次患病者极少。(四)流行特征世界各地全部有本病发生，以热带、亚热带地域多见，可散发、地方性流行或暴发流行。在发展中国家关键因为水源污染而暴发流行，发达国家则以国际旅游感染为主。本病终年可见，但以夏秋季最多。其中以儿童和青壮年居多。局部地域流行伤寒耐药菌株有所增加，耐药谱也在逐步扩大。除耐氯霉素、复方磺胺甲嗯唑、氨苄西林外，少数菌株对头孢菌素及喹诺酮类抗菌药品也产生耐药性。2.试验室检验（一）常规检验：血白细胞大多为3×109/L～4×109/L，伴中性粒细胞降低和嗜酸粒细胞消失，后者随病情好转逐步回升。极期嗜酸粒细胞＞2%，绝对计数超出4×108/L者可基础除外伤寒。高热时可有轻度蛋白尿。粪便隐血试验阳性。（二）细菌学检验：①血培养是确诊论据，病程早期即可阳性，第7～10病日阳性率可达90%，第三周降为30%～40%，第四面时常阴性；②骨髓培养阳性率较血培养高，尤适合于已用抗菌素药品诊疗，血培养阴性者；③粪便培养，从潜伏期起便可获阳性，第3～4周可高达80%，病后6周阳性率快速下降，3%患者排菌可超出十二个月；④尿培养：病程后期阳性率可达25%，但应避免粪便污染；⑤玫瑰疹刮取物或活检切片也可获阳性培养。（三）免疫学检验1.肥达氏试验：伤寒血清凝集试验即肥达反应阳性者对伤寒，副伤寒有辅助诊疗价值。检验中所用抗原有伤寒杆菌菌体（O）抗原，鞭毛（H）抗原，副伤寒甲，乙，丙鞭毛抗原共5种，目标在于用凝集法测定病人血清中多种抗体凝集效价。病程第1周阳性反应不多，通常从第2周开始阳性率逐步增高，至第4周可达90%，病愈后阳性反应可连续数月之久。有少数病人抗体很迟才升高，甚至整个病程抗体效价很低（14.4%)或阴性（7.8%～10%），故不能据此而排除本病。Widal试验已沿用近1，60年代曾有些人对其特异性提出异议，认为其结果存在着混乱模糊情况，非伤寒发烧性疾病Widal's试验也呈阳性结果，如多种急性感染，肿瘤，结缔组织病性疾病，慢性溃疡性结肠炎，均可出现阳性结果。Perlnan等认为无菌结肠细胞和肠杆菌可能有共同抗原，结肠粘膜损害所产生抗结肠抗体和沙门菌菌体抗原起交叉反应，所以对肥达氏反应结果判定宜审慎，必需亲密结合临床资料，还应强调恢复期血清抗体效价对比，有些人提出应用流行菌株抗原和国际菌株相比，阳性率可提升，提议用当地流行菌株替换国际标准菌株，以提升流行区域伤寒诊疗阳率。2.其它免疫学检验（1）被动血凝试验（PHA）：用伤寒杆菌菌体抗原致敏红细胞，使之和被检血清反应，依据红细胞凝集情况判定有没有伤寒特异性抗体存在，中国外报道阳性率90%～98.35%，假阳性率5%左右。鲍行豪等曾报道LSP-PHA对伤寒血培养患者检出率为89.66%，早期病人90.02%，临床确诊者为82.5%，且关键检测是特异IgM抗体，故可用于早期诊疗。（2）对流免疫电泳（CIE）：本方法可用于血清中可溶性伤寒抗原或抗体检测，操作简便，便于基层推广，特异性较高；但敏感性较低，不一样作者报道为24%～92%，关键受采集血清时间影响，发病早期最易测出，故可用于伤寒早期诊疗。（3）协同凝集试验（COA）：利用金葡菌葡萄球菌A蛋白（SPA）可（2）对流免疫电泳（CIE）：本方法可用于血清中可溶性伤寒抗原或抗体检测，操作简便，便于基层推广，特异性较高；但敏感性较低，不一样作者报道为24%～92%，关键受采集血清时间影响，发病早期最易测出，故可用于伤寒早期诊疗。（4）免疫荧光试验（IFT）：Doshi等用伤寒杆菌菌体Vi悬液作抗原进行间接免疫荧光抗体检测，140例血培养阳性伤寒患者134例（95.7%）阳性；394例对照者仅4例（1%）假阳性，现在相关本法报道尚少，伤寒疫预防接种和其它沙门氏菌感染是否会影响本试验特异性，尚需深入研究。（5）酶联免疫吸附试验（ELISA）：ELISA基础原理是用酶促反应放大作用来显示初级免疫学反应，既可检测抗原，又可检测抗体，用ELISA法检测伤寒患者Vi抗原，灵敏性达1ng/ml，高于CoA法9100ng/ml，并可检测到1∶1024稀释后尿液中Vi抗原。中国、外用ELISA检测过临床标本中Vi抗原，V9抗原，LPS，H抗原等，敏感性在62.5%～93.1%，因检测抗原不一样而异，多数在80%以上。杭州鲍行豪等应用ELISA同时检测IgM和IgG抗体，LPS-IgM-ELISA敏感性为91.38%，特异性为99.02%，LPS-IgG-ELISA分别为93.1%和98.02%，在伤寒血清免疫学诊疗方法中，ELISA方法简便，快速，敏感，特异性高，是公认很好一个诊疗方法。（四）分子生物学诊疗方法1.DNA探针（DNAProbe）DNA探针是用DNA制备诊疗试剂，用于检测或判定特定细菌，方法是用一段已标识特定DNA片段（探针）和标本中已变性细菌DNA杂交，经过测定是否发生杂交反应来达成检测目标，因为此探针是以细菌专有特异性基因片断制备，故特异性很高。用DNA探针对培养所得伤寒杆菌进行检测，敏感性需标本中达1000个细菌才能检出。DNAProbe特异性高而敏感性低，通常见于菌种判定及分离。2.聚合酶链反应（PCR）PCR方法是80年代中后期发展起来一个分子生物学方法，它能在数小时内在体外将目标基因或DNA片段扩增到数百万倍，检出率较DNA探针高100～10000倍，国外JaeHS等用PCR方法扩增伤寒鞭毛抗原编码基因，敏感度能检出10个伤寒菌，特异性为100%，PCR方法因其高度敏感，易出现产物污染，所以控制PCR方法假阳性及假阴性，是提升正确度关键。3.细菌生物安全防护在试验室操作上对于有高风险人员，如免疫缺点者，要严格限制进入。对于针头和锐器要有警示，要用专门存放锐器容器盛装。在个人防护上，要求穿隔离衣，出试验室时应将隔离衣脱下；在可能接触病原时要戴一次性使用手套，但不要戴手套接触清洁表面（如电话等），脱去手套后要洗手；在BSC外面进行操作时，要进行面部保护，如套口罩、眼罩、面罩等。要有泡手消毒缸和洗眼台，还要有高压消毒器第七章志贺氏菌生物危害评定汇报1.生物学特征志贺氏菌属（Shigella）细菌（通称痢疾杆菌），是细菌性痢疾病原菌人类对痢疾杆菌有很高易感性。在幼儿可引发急性中毒性菌痢，死亡率甚高。志贺氏菌和大肠杆菌全部属于肠杆菌科，依据DNA杂交研究结果表明，志贺氏菌属四个种和大肠杆菌属在生化上是难以区分，因为有产气志贺氏菌，也有乳糖阴性、不产气、不运动大肠杆菌，有些大肠杆菌也能引发痢疾状腹泻。志贺氏菌属细菌形态和通常肠道杆菌无显著区分，为革兰氏阴性杆菌，长约2-3μm,宽0.5-0.7μm。不形成芽胞，无荚膜，无鞭毛，不运动，有菌毛。志贺氏菌需氧或兼性厌氧。营养要求不高，能在一般培养基上生长，最适温度为37℃，最适pH为6.4-7.8。37℃培养18-二十四小时后菌落呈圆形、微凸、光滑湿润、无色、半透明、边缘整齐，直径约2nm，宋内氏菌菌落通常较大，较不透明，并常出现扁平粗糙型菌落。在液体培养基中呈均匀浑浊生长，无菌膜形成。依据抗原结构不一样，按最新国际分类法，将本属细菌分为四个群、39个血清型。2.危害程度分类依据中国卫生部制订《人间传染病原微生物名目》该菌危害程度为第三类。3.致病性和感染剂量志贺氏菌引发细菌性痢疾，关键经过消化道路径传输。依据宿主健康情况和年纪，只需少许病菌（最少为10～100个细胞）进入，就有可能致病。致病原因：志贺氏菌致病作用，关键是侵袭力、菌体内毒素部分菌株能产生外毒素。志贺氏菌引发细菌性痢疾可分为两类一类是急性细菌性痢疾：又分急性经典、急性非经典、急性中毒性菌痢三型；二类是慢性细菌性痢疾：又分慢性迁延型、慢性隐伏型、慢性急性发作型三型。病后有一定免疫力，但免疫期短，也不稳定。4.暴露潜在后果暴露后可能引发感染，菌量大时可使试验人员显性感染，菌量极少时常呈临时带菌状态。被感不染后，成为传染源，可能对周围及环境造成污染，应立即得到控制。5.感染路径经过污染食品和水源经口传输，无其它感染路径。6.微生物在环境中稳定性志贺氏菌属在外界环境中生存力，以宋内氏最强，福氏菌次之，志贺氏菌最弱。通常在潮湿土壤中能存活34天，37℃水中存活20天，在粪便内（室温）存活11天。日光直接照射30分钟，56-60℃10分即被杀死，对高温和化学消毒剂很敏感，1%石炭酸中15-30分钟即被杀死，对氯霉素、磺胺类、链霉素敏感，但易产生耐药性。7.浓度和浓缩标本容量通常样本检测。8.自然和易感人群宿主人和灵长类是志贺氏菌适宜宿主，营养不良幼儿、老人及免疫缺点者更为易感。9.试验操作活动巳有文件证实，志贺氏菌可造成试验人员感染细菌性痢疾，仅在美国和英国就有数十例汇报。尽管在捕捉非灵长类动物中曾有过暴发，但人类是惟一关键传染源。然而，试验室感染豚鼠、其它啮齿类动物和非人灵长类动物也是被证实传染源。这种病原体能够存在于受感染人或动物粪便中，极少存在于血液中。摄入及胃肠道外接种该病原体是关键试验危害。人类经口感染福氏志贺菌ID25～50大约是200个细菌。暴露在气溶胶中能否引发感染现在还不清楚。根据国家标准方法对样本（粪便、食品、水样）进行分离，培养，判定。提议采取BSL-2级水平操作技术，防扩散设备和设施。一旦发生意外，根据本试验室《意外事故应对方案和应急程序》进行处理。10.预防和诊疗志贺氏蓖可引发细菌性痢疾。细菌性痢疾又可分为两类，一类是急性细菌性痢疾：又分急性经典、急性非经典、急性中毒性菌痢三型；二类是慢性细菌性痢疾：又分慢性迁延型、慢性隐伏型、慢性急性发作型三型。现在疫苗还不可用于人类。对本病诊疗，病人应予胃肠道隔离，除通常诊疗外，可依据大便细菌培养及药品敏感试验选择合适抗菌药品作病原诊疗。如复方磺胺甲基异唑、氯霉素、庆大霉素及卡那霉素等。亦可应用氨苄青霉素或氧哌嗪青霉素等诊疗。中毒性痢疾应予对应抢救方法，如抗休克、冬眠药品和脱水药应用等。慢性菌痢可采取保留灌肠方法诊疗。。预防沙门氏菌感染，首先是要消亡传染源是预防方法之一，除治愈患者外，必需对托幼、饮食业及自来水厂工作人员定时检验，立即发觉带菌者，调离工作岗位并给予诊疗。切实做好饮食卫生、水源及粪便管理,消亡苍蝇,切断传输路径，预防病从口入。第八章蜡样芽胞杆菌生物危害评定汇报1.细菌传输和致病蜡样芽胞杆菌在自然界分布广泛，常存在于土壤、灰尘和污水中，植物和很多生熟食品中常见。已从多个食品中分离出该菌，包含肉、乳制品、蔬菜、鱼、土豆、糊、酱油、布丁、炒米饭和多种甜点等。在美国，炒米饭是引发蜡样芽胞杆菌呕吐型食物中毒关键原因；在欧洲大全部由甜点、肉饼、色拉和奶、肉类食品引发；在中国则关键和受污染米饭或淀粉类制品相关。1950年Hauge在对挪威奥斯陆某医院职员和病员进食甜食后引发食物中毒研究中，首次明确指出蜡样芽胞杆菌致病作用。蜡样芽胞杆菌作为一个食源性疾病报导较多，在多种食品中检出率也较高，如1982年犬饲等对日本名古屋所采1641份食品样品中，有193份检出了该菌、阳性率为11.8%；1984年中国相关单位对南京市所采211份食品样品中，有81份检出了该菌，阳性率为38.4%。蜡样芽胞杆菌食物中毒通常以夏秋季（6-10月）最高。引发中毒食品常于食前因为保留温度不妥，放置时间较长或食品经加热而残余芽胞以生长繁殖条件，所以造成中毒。中毒发病率较高，通常为60-100%。但也有在可疑食品中找不到蜡样芽胞杆菌而引发食物中毒情况，通常认为是因为蜡杆芽胞杆菌产生热稳定毒素所致。当摄入食品其蜡样芽胞杆菌数量达>106/克时常可造成食物中毒。蜡样芽胞杆菌食物中毒在临床上可分为呕吐型和腹泻型两类。呕吐型潜伏期为0.5-6小时，中毒症状以恶心、呕吐为主，偶而有腹痉挛或腹泻等症状，病程不超出二十四小时，这种类型症状类似于由金黄色葡萄球菌引发食物中毒。腹泻型潜伏期为6-15小时，症状以水泻、腹痉挛、腹痛为主，有时会有恶心等症状，病程约二十四小时，这种类型症状类似于产气荚膜梭菌引发食物中毒。严重者还可造成败血症。蜡样芽胞杆菌引发食物中毒是因为该菌可产生肠毒素。它产生两种性质不一样代谢物，引发腹泻型综合症是一个大分子量蛋白；而引发呕吐型综合症被认为是一个小分子量、热稳定多肽。致呕吐型综合症肠毒素至今还未提纯，致腹泻型综合症肠毒素已提纯，其纯化肠毒素分子量为55-6.0×103。致腹泻肠毒素能使小白鼠致死。2.细菌生物学特征蜡样芽胞杆菌分类为芽胞杆菌属第I群，该群有22个种。依据营养型菌细胞宽度分为两类，蜡样芽胞杆菌、蕈状芽胞杆菌、苏云金芽胞杆菌、炭疽芽胞杆菌和巨大芽胞杆菌属“大细胞菌种”。蜡样芽胞杆菌为革兰氏阳性大杆菌，大小为1-1.3×3-5μm，需氧或兼性需氧，生长6h即可形成原形芽胞，芽胞在菌体中心或次末端不突出菌体，菌体两端较平整，多数呈链状排列，和炭疽杆菌相同。引发食物中毒菌株多为周鞭毛，有动力无荚膜。它生长温度为25-37℃，最好温度30-35℃。在肉汤中生长混浊有菌膜或壁环，振摇易乳化。在一般琼脂上生成菌落较大，直径3-10mm，灰白色、不透明，表面粗糙似毛玻璃状或融蜡状，边缘常呈扩展状故而得名。偶有产生黄绿色色素，在血琼脂平板上呈草绿色溶血。在甘露醇、卵黄多粘菌素（MYP）平板上，呈伊红粉色菌落。能分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、水杨素等，VP试验阳性，可液化明胶，卵磷脂酶阳性，但数次传代后，其生化特征常可改变。另外蜡杆芽胞杆菌耐热，其食物中毒菌株中游离芽胞能耐受100℃30分钟，而干热灭菌需120℃60分钟才能杀死。本菌对氯霉素、红霉素和庆大霉素敏感，对青霉素、磺胺类和呋喃类耐药。3.细菌试验室检验及其它检验1.标本搜集采集可疑食物或搜集粪便和呕吐物进行直接涂片染色镜检和其它操作。2.活菌计数无菌操作称取样品50g放入灭菌搅拌缸内。加Butterfield磷酸盐缓冲稀释液450mL，以高速（18.000-21.000rpm）均质2min。用上述1:10稀释液，连续稀释供蜡样芽胞杆菌计数。移取10mL均质样液（1:10稀释）加到90mL空白液中，从10-2到10-6制备一系列稀释液，充足混匀，并继续稀释直到10-6为止。取样品各个稀释液（包含1:10）0.1mL接种2只MYP（甘露醇一卵黄多粘菌素琼脂）平板，用灭菌玻璃棒在每只平板表面涂布均匀。将平板置30℃3.MPN技术被推荐用于食品中低于10个/g蜡样芽胞杆菌检验。一些不适适用平板计数法脱水淀粉类食品也可用此法检验。在胰酪胨大豆多粘菌素肉汤中接种3管MPN系列，10-1、10-2、10-3稀释液各接种1mL于3管。将培养管置30℃培养48±2小时，检验生长密集、经典蜡样芽胞杆菌。将阳性管培养物划线接种于MYP平板，于304.分离培养将可疑食物置无菌乳钵中，加适量生理盐水研磨后，划线接种于一般琼脂平板或血琼脂平板，若为呕吐物可直接划线接种于上述平板，于37℃培养5.若有类似蜡样芽胞杆菌菌落出现再深入分离纯化和进行生化反应。6.蜡样芽胞杆菌证实试验蜡样芽胞杆菌分离物应符合下述条件：1)革兰氏阳性产芽胞大杆菌，其芽胞不突出体外；2）在MYP琼脂上产生卵磷脂酶而不发酵甘露醇；3）厌氧培养生长，发酵葡萄糖产酸；4）还原硝酸盐；5）VP阳性；6）分介L-酪氨酸；7）在含0.001%溶菌酶培养基中能生长。7.蜡样芽胞杆菌群判别试验要判别经典蜡样芽胞杆菌和蜡样芽胞杆菌群其它种还需深入进行下述试验：1）动力试验；2）根状生长试验；3）溶菌活性试验；4）蛋白质毒素结晶试验：蜡样芽胞杆菌有动力、强溶血、不形成根状菌落，或不产生蛋白质毒素结晶。而且蜡样芽胞杆菌在4℃8.血清学分型、噬菌体分型。4.细菌防治蜡样芽胞杆菌所引发食物中毒多因食品在食用前保留温度较高（20℃以上）和放置时间较长，故对中毒预防包含：因为蜡样芽胞杆菌在15℃以下不繁殖，剩饭、剩菜应放在低温保留。该菌污染食品通常无腐败变质异味，不易被发觉。所以，剩饭、剩菜在食用前一定要再加热。注意食品贮藏和个人卫生，预防尘土、昆虫及其它不洁物污染食品。若一旦发生了中毒，则立即停止食用可疑污染食品，多饮水。通常不需要使用抗生素诊疗。腹泻较重者可到医院就诊。5.细菌生物安全防护依据《病原微生物生物试验室生物安全管理条例》中相关要求，人间传输微生物名目（待颁布）蜡样芽胞杆菌属于三类，BSL-2。（1）操作要求1、试验时，未经试验室主任同意，限制或严禁进入试验室。2、不许在工作区域饮食、吸烟、清洗隐型眼镜和化妆。食物应存放在工作区域以外专用橱柜或冰箱中。3、全部操作过程应尽可能细心，避免产生和溅出气溶胶。4、对于污染锐器，必需时刻保持高度警惕，包含针、注射器、玻片、加样器等。5、注射和吸收感染材料时，只能使用针头固定注射器或一次性注射器（即注射器和针头是一体）。用过一次性针头必需弯曲、切断、破碎、重新套上针头套、从一次性注射器上去掉，或在丢弃前进行人工处理，要不将之小心放入不会被刺穿、用于搜集废弃锐器容器中。非一次性锐器必需放置在坚壁容器中，转移至处理区消毒，最好高压杀菌。6、打坏器皿不能直接用手处理，必需用其它工具处理，如刷子和簸箕、夹子或镊子。盛污染针头、锐器、碎玻璃容器在倒掉前，应按摄影关要求进行消毒。7、全部培养物、储存物及其它要求废物在释放前，均应使用可行消毒方法进行消毒，如高压灭菌。转移到就近试验室消毒物料应置于耐用、防漏容器内，密封运出试验室。离开该系统进行消毒物料，在转移前应包装，其包装应符合相关法规。8、溅出或偶然事件中，显著暴露于传染源时，要立即向试验室主任汇报。进行合适医学评定、观察、诊疗，保留书面统计。9、按日常程序、在相关传染源工作结束后、尤其是传染源溅出或洒出后、或受到其它传染源污染后，试验室设备和工作台面应该使用有效消毒剂消毒。污染设备在送去修理、维护前，要按摄影关要求消毒；在离开设施转移前，要按摄影关要求打包运输。（2）安全设备1、正确使用和保养生物安全柜、最好是二级生物安全柜、或其它适宜人员防护设施、或物理遏制装置。2、确定可能形成传染性气溶胶或溅出物试验过程，包含离心、研磨、匀浆、猛烈震荡或混匀、超声波破裂、开启装有传染源容器、采集感染标本等。3、包含高浓度或大致积传染源时，若选择密封转头或带安全罩离心机，若转头或安全罩仅在生物安全柜中打开，则可在开放试验室内离心。4、当必需在生物安全柜外处理标本时，需采取面部保护方法（跟镜、口罩、面罩、或其它防溅装置），以免传染源或其它有害物溅或洒到面上。5、在试验室内，必需使用专用防护性外衣、大褂、罩衫或制服。人员到非试验室区域时，防护服必需留在试验室内。防护服能够在试验室内处理，也能够在洗衣房中洗涤，但不能带回家中。6、可能接触潜在传染源、被污染表面或设备时，要戴手套。一次性手套不用清洗、不能反复使用，不能用于接触“洁净”表面（键盘、电话等），也不应该戴着到试验室外。要备有带滑石粉乳胶手套。脱掉手套后，要洗手。第九章单核增生李斯特菌危害评定汇报1.细菌传输和致病产单核李斯特菌是李斯特菌属中唯一可对人类致病菌种，能够引发李斯特菌病，关键表现为脑膜炎和败血症。健康带菌者是关键传染源，能够经粪-口路径传输，也能够经过胎盘和产道由带菌母亲感染给新生儿。假如人眼睛或皮肤和带菌病畜直接接触，也可造成局部感染。产单核李斯特还能引发鱼类、鸟类和哺乳动物牛、羊等多个动物疾病。2.细菌生物学特征产单核李斯特菌是一个革兰阳性短小杆菌，大小约为1~2μm×0.4~0.5μm，通常成双排列，偶然可见双球状。有鞭毛，但仅在18~20℃有动力，在37℃动力缓慢。无芽胞，通常不形成荚膜，但在含有血清葡萄糖蛋白胨水中能形成粘多糖荚膜。兼性厌氧，对营养要求不高，一般培养基上可生长，在血平板上会形成β-溶血。最适生长温度是30~37℃，并可在4℃条件下进行冷增菌。产单核李斯特菌和葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌等及大肠埃希菌含有共同抗原。依据菌体及鞭毛抗原不一样，可将其分为4个血清型，1、3、4型还可分为若干亚型。抗原结构和毒力无关，致病物质关键是溶血素和菌体表面成份。其中1型关键感染啮齿动物，4型关键感染反刍动物。但各型均可对人类致病，尤以1a和1b最为多见。本菌耐碱不耐酸，对热较为敏感，加热50℃10min即可死亡。同时该菌对多个抗生素敏感，以氨苄青霉素为首选，还有青霉素、链霉素、四环素、氯霉素和红霉素等敏感。但该菌对磺胺、杆菌肽和多粘菌素耐药。3.细菌试验室检验1、标本采集采集来自临床多种标本，如脑脊液和血液。另外还可依据症状采集子宫、子宫颈、阴道、鼻咽部等部位分泌物或组织，还有新生儿脐带残端、羊水及胎粪、尿等送检。2、涂片镜检除了血液标本外，其它标本全部能够涂片做革兰染色镜检，或用产单核李斯特菌1型和4型及多价荧光抗体进行染色。3、动力检验在18~20℃有动力，在374、分离培养取脑脊液离心后沉淀物划线接种于羊血琼脂平板上，于10%CO2环境中进行培养，35℃孵育18~24h；血液标本5ml注入含有50ml培养基血培养瓶中，一样在含10%CO2环境中进行培养；咽喉拭子、组织及粪便标本可接种于肉汤培养基置4℃冰箱中进行冷增菌。结果：产单核李斯特菌在血琼脂平板上能产生狭窄β-溶血环，菌落呈灰白色，直径1~5、生化判定本菌可发酵多个糖类如葡萄糖、果糖、覃糖、麦芽糖核水杨素，产酸不产气。甲基红和V-P试验阳性，触酶阳性，可使石蕊牛乳缓慢产酸并使其脱色，能水解精氨酸产氨。不还原硝酸盐、不形成吲哚、不液化明胶和凝固血清，不分解尿素。能水解七叶苷，有时还可形成硫化氢。6、血清学试验用已知李斯特菌1型、4型和多价抗血清玻片凝集试验对可疑菌进行判定。7、动物结膜点种试验取幼兔或豚鼠一只，用本菌24h肉汤培养物1滴，滴入试验。8、动物一侧结膜囊内，以另一侧为对照，观察5天。通常产单核李斯特菌会在接种后24~36h内，出现化脓性结膜炎。4.细菌生物安全防护依据《病原微生物生物试验室生物安全管理条例》中相关要求，人间传输微生物名目（待颁布）产单核李斯特菌属于三类，BSL-2。相关防护事宜包含：（1）操作要求1、试验时，未经试验室主任同意，限制或严禁进入试验室。2、不许在工作区域饮食、吸烟、清洗隐型眼镜和化妆。食物应存放在工作区域以外专用橱柜或冰箱中。3、对于污染锐器，必需时刻保持高度警惕，包含针、注射器、玻片、加样器等。4、注射和吸收感染材料时，只能使用针头固定注射器或一次性注射器（即注射器和针头是一体）。用过一次性针头必需弯曲、切断、破碎、重新套上针头套、从一次性注射器上去掉，或在丢弃前进行人工处理，要不将之小心放入不会被刺穿、用于搜集废弃锐器容器中。非一次性锐器必需放置在坚壁容器中，转移至处理区消毒，最好高压杀菌。5、打坏器皿不能直接用手处理，必需用其它工具处理，如刷子和簸箕、夹子或镊子。盛污染针头、锐器、碎玻璃容器在倒掉前，应按摄影关要求进行消毒。6、全部培养物、储存物及其它要求废物在释放前，均应使用可行消毒方法进行消毒，如高压灭菌。转移到就近试验室消毒物料应置于耐用、防漏容器内，密封运出试验室。离开该系统进行消毒物料，在转移前应包装，其包装应符合相关法规。7、按日常程序、在相关传染源工作结束后、尤其是传染源溅出或洒出后、或受到其它传染源污染后，试验室设备和工作台面应该使用有效消毒剂消毒。污染设备在送去修理、维护前，要按摄影关要求消毒；在离开设施转移前，要按摄影关要求打包运输。（2）安全设备1、正确使用和保养生物安全柜、最好是二级生物安全柜、或其它适宜人员防护设施、或物理遏制装置。2、确定可能形成传染性气溶胶或溅出物试验过程，包含离心、研磨、匀浆、猛烈震荡或混匀、超声波破裂、开启装有传染源容器、采集感染标本等。3、包含高浓度或大致积传染源时，若选择密封转头或带安全罩离心机，若转头或安全罩仅在生物安全柜中打开，则可在开放试验室内离心。4、在试验室内，必需使用专用防护性外衣、大褂、罩衫或制服。人员到非试验室区域时，防护服必需留在试验室内。防护服能够在试验室内处理，也能够在洗衣房中洗涤，但不能带回家中。5、可能接触潜在传染源、被污染表面或设备时，要戴手套。一次性手套不用清洗、不能反复使用，不能用于接触“洁净”表面（键盘、电话等），也不应该戴着到试验室外。要备有带滑石粉乳胶手套。脱掉手套后，要洗手。第十章流感病毒危害评定汇报流感病毒属正粘病毒科，分甲、乙、丙三型。含有“变异”特征，不停产生新亚型。可引发人或家禽流行性感冒。这是一个急性呼吸道传染病，它含有忽然暴发、快速蔓延、波及面广特点。在人群中，它发病率高，病死率低，多发于青少年，恢复快，含有一定季节性。而禽流感发病率和病死率高，季节性不强，起源常不明。20世纪曾有4次流感大流行。流感流行时造成经济损失名列各传染病之首。流感是第一个实施全球监测传染病。病人和病禽是关键传染源。传输路径以空气飞沫传输为主，也存在经过水源、亲密接触、垂直传输、蚊虫传输等多个路径。人群普遍易感，病后免疫时间短，而流感病毒变异性大，但型间无交叉免疫，所以人在一生中可数次患流感。流感病毒在外界抵御力弱，在56℃30分钟条件下易被灭活，在室温下传染性很快丧失，100℃1分钟即被灭活，但在0～4℃能存活数周，在-20℃真空干燥条件下可长久保留。对紫外线和化学有毒剂敏感。病毒暴露于通常使用多种消毒剂和固定剂后，病毒即失去感染性。流感极易传输，所以发觉有流感病人，应及早隔离和诊疗。流感流行期间尽可能避免人群集聚，注意房屋通风，提倡在公共场所戴口罩，病人口鼻腔分泌物及污染物应随时消毒。疫苗接种对预防流感有一定效果。保持环境卫生，养成良好卫生习惯也能起预防作用。流感是一自限性疾病，可使用抗流感病毒药品和对症诊疗来减轻症状。用抗菌素预防细菌继发感染产生并发症。1.试验模式1.1流感病毒分离培养流感病毒大量存在于病人痰液、咽拭子和病禽尸解脏器中。分离流感病毒时，可用鸡胚，最好用SPF鸡胚，但通常只采取尿囊腔接种；也可用狗肾细胞（MDCK）。1.2流感病毒血清学诊疗血凝抑制试验（HI法）或微量中和法。必需采集双份血清，疾病发作时头3天立即采集（急性期血清），发病后2-3周采集（恢复期血清），在同一条件下进行HI测定，在恢复期血清HI抗体滴度比急性期高4倍或以上，就可加以确诊。1.3流感病毒抗体检测可用免疫荧光法和ELISA。1.4流感病毒核酸检测逆转录PCR2.试验中危害原因分析流感传输路径以空气飞沫传输为主，也存在经过水源、亲密接触、垂直传输、蚊虫传输等多个路径。操作含有高致病性甲性H5和H7两亚型毒株必需在P3试验室内进行操作。尤其是部分甲性流感毒株（H5N1，H9N2）经过何种路径传染人至今不清楚，所以采集标本时，须做好一定个人防护。流感病毒易发生基因重配，易形成新亚型，但型间无交叉免疫。3.安全方法3.1严格按试验室使用和安全操作技术规程及各个试验项目标操作技术规程操作。3.2加强个人防护。采取符合国家标准口罩、防护服等个人防护用具，3.3强化离心、移液等步骤标准操作。3.4抗体检测用血清标本可先以56℃30分钟处理。第十一章禽流感病毒危害评定汇报禽流感病毒（AIV）属甲型流感病毒。流感病毒属于RNA病毒正黏病毒科，分甲、乙、丙3个型。其中甲型流感病毒多发于禽类，部分亚型也可感染猪、马、海豹和鲸等多种哺乳动物及人类；乙型和丙型流感病毒则分别见于海豹和猪感染。甲型流感病毒呈多形性，其中球形直径80～120nm，有囊膜。基因组为分节段单股负链RNA。依据其外膜血凝素（H）/和神经氨酸酶（N）蛋白抗原性不一样，现在可分为15个H亚型（H1～H15）和9个N亚型（N1～N9）。感染人禽流感病毒亚型关键为H5N1、H9N2、H7N7，其中感染H5N1患者病情重，病死率高。研究表明，原本为低致病性禽流感病毒株（H5N2、H7N7、H9N2），可经6～9个月禽间流行快速变异而成为高致病性毒株（H5N1）。通常来说，禽流感病毒和人流感病毒存在受体特异性