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文档简介

DNA琼脂糖凝胶电泳

姓名：徐秀倩

学号：3160481导师：

吴小芹

实验原理琼脂糖为链状多糖→绳状琼脂糖束→大网孔型凝胶——别离、鉴定、纯化DNA影响DNA迁移率的因素：DNA分子的大小、构象，凝胶浓度，电压，电泳缓冲液的组成缓冲液pH>DNAPi，DNA带负电荷，迁移率与分子量对数成反比DNA分子构象影响迁移率：共价闭环DNA>线状DNA>开环DNA不同浓度琼脂糖别离DNA分子的范围琼脂糖浓度〔%〕别离范围〔kb〕0.35-600.61-200.70.8-100.90.5-71.20.4-61.50.2-42.00.1-3琼脂糖凝胶中DNA的观察溴化乙锭〔EB〕—DNA：紫外光下红色荧光主要实验器材电泳仪电泳槽缓冲液琼脂糖凝胶槽梳子取液器溴酚蓝电泳槽结构操作步骤琼脂糖凝胶的制备：溶化，冷却，EB凝胶板的制备：加梳子，倒胶样品的制备：样品+1/5体积溴酚蓝加样：加样端为负极〔黑〕电泳：5V/cm观察：紫外灯下观察，照相

溶胶准备胶槽凝胶冷却至50°C，加EB至终浓度0.5μg/ml铺胶凝胶凝固后取出梳子加缓冲液

准备样品点样电泳注意观察溴酚蓝染液的迁移紫外灯下观察电泳结果

照相相关实验对琼脂糖凝胶电泳别离DNA片段的有效性的再认识琼脂糖凝胶电泳别离DNA片段的根本原理

DNA为多元酸，在中性或弱碱性缓冲液中带负电荷而向阳极泳动由于不同DNA分子在同一凝胶中迁移速率不一样，电泳一段时间后可将其分开。材料铜绿假单胞菌噬菌体PaP1基因组DNA，按常规提取，置-20℃保存备用。AgaroseⅠ、限制性内切酶EcoRⅤ为上海生工生物工程产品。从凝胶中小量回收DNA片段的试剂盒为上海华舜生物工程产品，1kbDNALadder为MBI产品。方法琼脂糖凝胶电泳用1×TAE配制0.8%琼脂糖凝胶，电泳缓冲液为1×TAE，电压为5V/cm，电泳1h，用溴化乙锭或LIGHTBLUEDye显色。结果

电泳后在日光下(LIGHTBLUEDye染色)或在紫外灯下(溴化乙锭染色)切取含“单一”目的DNA分子的胶条并称重，用小量胶回收试剂盒回DNA。

在3个大的目的DNA片段1、2和3(分别约为10、7、4.5kb)之后有很多的较小片段(从大约3.5kb到100bp不等)。在日光下(用LIGHTBLUEDye显色)分别切取含有单一目的片段1、

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