T-SPPHN 001-2023 2.0 亿CFU mL 嗜硫小红卵菌HNI-1悬浮剂

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001-2023学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载ICS

CCS

B15/19湖南省植物保护学会团体标准T/SPPHN

001-20232.0

sulfidophilum

SC-

发布 11-20

实施湖南省植物保护学会

发布学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载T/SPPHN

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1.1-2020

有效活菌数∕CFU/mL

2.0×10

10

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嗜硫小红卵菌

悬浮剂

2.0

1601

1604

3796

4789.28

8170

4.1

4.2

表1

表1

2.0

CFU/mL

嗜硫小红卵菌

HNI-1

悬浮剂控制项目指标

80

98

a)

b)a)，b)

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001-20235.1

GB/T6682-2008GB/T81705.2

1605-2001

5.3

有效活菌数采用最大可能数计数法（）测定；杂菌数采用平板菌落计数法测定，5.3.1 杂菌数测定用培养基：细菌培养基按

GB/T4789.

4.8

规定，霉菌培养基遵照

5.3.2 10200

3000

ECC-150A恒温培养箱控温范围：℃～80℃，温度显示精度：0.1℃，控温精度：±0.1℃，控温均匀度：±0.5EOF-150A恒温烘箱控温范围：℃～220℃，温度显示精度：0.1℃，控温精度：±1.5(150

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001-2023学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载5.3.3 根据代表菌株的形态学和生理生化特征进行菌种鉴别，并可辅助结合16S

基因序16S

5.3.4

法）（

）仪器设备：

灭菌培养皿

30

个、移液枪

、灭菌枪头、涂布棒、超

10

）操作步骤：将菌液用无菌水于

离心管中逐级稀释为

10101010101010101010

按无菌操作要求，用移液枪吸取

100μL

菌液到冷却凝固的下层培养基上，用涂布棒涂融化上层培养基，待融化的上层培养基冷却至

50℃左右时，将其倒入已涂菌的下层培

30±1

7d10d

30

300

300

30若三个稀释度的平均菌落数均不在

30300

之间，则以最接近

300

30

的平均菌落乘

20

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）操作步骤：选取

101010三个浓度梯度的稀释液做测定用。取

20

支装有

培养基的灭

101010

7d10d的分布形式对应到

表（见附录

数值，

即为样品中5.3.5

选取

101010三个浓度梯度的稀释液，用

无菌吸管吸取

，分别加

营养肉汤培养基的培养皿

表面，用无菌玻璃刮刀将稀释液均匀涂布，待菌液全部渗入培养基后，放置于

℃的恒温培养箱内倒置培养

48±2

。每一浓度10

30

300

30300

30300

300

30若三个稀稀度的平均菌落数均不在

30300

之间，则以最接近

300

30

的平均菌落数

选取

101010三个浓度梯度的稀释液，用

无菌吸管吸取

，分别加

25℃～283d

5d

10

10150

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5.4

5.5

1601

5.6

5.6.1 1)

2)3)4)三角瓶：5)5.6.2

5.6.3

50

恒温水浴锅中放置

，将量筒盖好，左手托住量筒底部，右手握住量筒顶部并用食指按

30

次充分混匀，打开量筒塞子后重新将其放入恒温水浴锅中，竖直静置

5.3.4

5.6.4 1-C1/C0×1.1111×1005.6.3学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载T/SPPHN

001-2023学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载5.6.5 10%5.7

5.8

5.9

2.22005.10

4.91h5.11

20℃；

试样置于烧杯中，在低温恒温箱中（6±2）℃保持1h，期间每隔15s6±2天。天后将烧杯取出恢复至室温，测试有效活菌数应大于等于2.0×10，则符合标准5.12

14d，取出测试其有效活菌数。

1099℃；45

℃仍能密封的具塞玻璃瓶：

用注射器将约试样，注入洁净的玻璃瓶中，置此玻璃瓶于冰盐浴中致冷，用塞子少封。将器内45±2）℃恒温箱（或恒温水浴锅）中，放置14d，取出冷至室温，将玻璃瓶拭净，于24h4.31.6×10

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1604

8170

7.1

3796

3796本产品应贮存于℃～40℃、干燥、阴凉的库房内，不得露天堆放，以防雨淋和日晒，40407.2

7.3

在规定的贮运条件下，从生产日期算起，保证期为年。在保证期内，各项指标仍应符80%学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载T/SPPHN

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（规范性）嗜硫小红卵菌

菌株来源：从海南省海水水样中分离、纯化获得。菌体形态见图

嗜硫小红卵主要生物学特性：细胞卵圆形至杆形，0.50.9μm×0.9。单极生鞭

葡萄木糖糖、）进生长蛋白酵母长最不能；在

有特征吸收峰；最适生长温度和

分别为3035℃、

7.0，培养物为红色，菌株在黑暗好氧条件生长慢、耐盐。红卵性研评述海水离出小红菌，命名

，选取黄瓜霜霉病菌作为供试病原菌。采用

年）推荐的叶盘漂

10

20

天、天、天、12天、15R.euryhaliR.iodosumum0.6-0.90.5-0.80.7-1.00.5-0.80.5-0.80.6-1.0

1-62.5-7.50.5-122.5-52.5-50.8-1.0

pH

6.5-8.06.5-7.07.0-8.06.5;7.0-7.36.5;7.3-7.78.0-8.51-2

ndndnd．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标ｗｗ准ｗ下兔学兔载T/SPPHN

001-2023．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标ｗｗ准ｗ下兔学兔载

（规范性）菌种鉴别生理生化特征法

微镜（10×100

）及试管架；菌落计数器；匀质器；

形玻璃棒；培养皿（

2.1

试剂：结晶紫、乙醇、草酸氨、碘、碘化钾、丙酮、番红、过氧化氢、性氧化钠、2.2

3.1

7296h

3.2

3.3

菌落形态观察：在光合细菌双层培养基上生长

7296h，观察菌落的形态和产色素3.4

1500

30

250

Rhodovulum

嗜硫小红卵菌（

）及其近似种的生理生化特征检表ndnd葡萄糖酸ndndndndndMol

68.9-73.2(T64.9-66.7(T62.1-68.6(T67.3-67.7(HP碳源利用学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载T/SPPHN

001-2023碳源利用学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载T/SPPHN

001-2023

4.1

光合细菌培养基中加入不同浓度的氯化钠，起始浓度为

，按

0.25%为梯度，依次配置各个梯度浓度至

10%。将目标菌株采用

250

血清瓶液体光照培养（7296，与未4.2

用盐酸分别调节光合细菌培养基的

5.09.0。采用

250

血清瓶液体光照培养7296

4.3

25%

7296

后目测生长情况。4.4

）、亚硫酸钠

7296

4.5

72

7296

4.6

0.1%7296

4.7

2.0g

0.2g

0.5g0.1g

0.5g

。培养基中不含碳源。将目标菌株接入到含

7296h

4.8

别配置含有与不含有

两种培养液，采用

血清瓶液体光照培养将目标菌7296

后目测生长情况。4.9

10学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载T/SPPHN

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2.0g

0.2g

0.5g0.1g

0.5g

。将

1.0g

被测底物：柠檬酸钠、酒石酸钠、接种到待测培养基中，采用

血清瓶液体光照培养将目标菌株培养（7296

后目4.10

NanoDrop2000

测定浓度，℃冰箱保存备用。

测定：利用带加温装置的紫外分光光度

0.30.6

25

50

℃～

值不变表示变性完毕。

）热变形温度测定完成后，将记录的温度和相应；（

25

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（规范性）菌种鉴别方法

基因序列分析法

将目标菌株涂布法在双层培养基平板上培养（10，挑取红色单菌落，采用细菌

提取试剂盒，参照试剂盒使用说明书提取细菌

。样品

使用

琼脂糖凝胶

NanoDrop2000

℃冰箱保存备用。

16S

27F

16S

将检测合格的样品

作为

扩增的模板，采用

反应体系进行

扩增。

扩增体系：5μL

2μL

ddH2O

50μL

95

10

95

45

55

72

45，循环

35

最后

72

10

℃保持．

扩增产物用

的琼脂糖凝胶电泳检

16S

将测序得到的

16S

序列提交到

核酸数据库已有的核酸序列进行

99%12ｏｍ标准学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃ下载T/SPPHN

001-2023ｏｍ标准学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃ下载

（规范性）光合细菌培养基 0.5

extract 1.5 1g 0.6

0.5g 0.05g 0.05g 1L

1.3g

1.8g

有效活菌数测定的选择性培养基 1.64g 0.2g 0.9g 0.6g 1.32g 7.0微量元素溶液 0.28g 0.21g

0.1L霉菌数测定的马丁培养基 1.0g 0.5g 5.0g 18g 13

MPN

MPN0.100.010.100.010.001--9.5214.5423.00.159.6288.794