实验02酵母菌的纯培养

实验02酵母菌的纯培养配制培养基：称去皮马铃薯200g、切块加水1000ml，加热煮沸纱布过滤加20g葡萄糖加20g琼脂用蒸馏水定容至1000ml灭菌灭菌培养基：高压蒸汽灭菌法培养皿灭菌：干热灭菌法倒平板条件：50℃左右（酒精灯旁）操作步骤接种和分离：平板划线法培养酵母菌方法：将接种后的平板和一个未接种的平板倒置放到恒温箱中培养。条件：28℃左右。一、平板划线法注意问题：1、在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环的原因：划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免污染环境和感染操作者。2、在第二次以及其后的划线操作时，从上一次划线的末端开始划线的原因：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。3、接种结束后，要将一个未接种的培养基一起培养原因：培养未接种的培养基的作用是对照，未接种的培养基经过培养后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的；4、未接种的培养基表面如果有菌落生长，说明：培养基灭菌不彻底，或培养基被污染了，需要重新制备。二、无菌技术的三个主要注意点①实验前应对操作空间、操作人员进行消毒，对所用器具和培养基进行灭菌。②实验进行时需在酒精灯火焰周围无菌区操作。③避免已杀菌处理的材料再次污染。三、倒平板时的注意事项①琼脂是一种多糖，在98℃以上熔化，在44℃以下凝固。倒平板时高于50℃则会烫手，低于50℃时若不及时操作，琼脂会凝固。②可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。1．（2023·江苏·统考高考真题）下列关于细菌和酵母菌实验的叙述正确的是（）A．通常酵母菌培养基比细菌培养基有更高的碳氮比B．通常细菌的生长速度比酵母菌快，菌落比酵母菌落大C．通常细菌培养基用高压蒸汽灭菌法灭菌，酵母菌培养基用过滤除菌法除菌D．血细胞计数板既可用于酵母菌的数量测定，也可用于细菌的数量测定【答案】A【分析】培养基的营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。灭菌常用的方法有灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌。消毒常用的方法有煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外线或化学药物消毒法等。【详解】A、细菌是原核生物，酵母菌是真核生物，不同微生物对营养物质的需求是不一样，通常酵母菌培养基比细菌培养基有更高的碳氮比，A正确；B、通常细菌的生长速度比酵母菌快，但形成的菌落，不一定细菌的大于酵母菌的，与细菌的种类有关，部分细菌的菌落小于酵母菌，B错误；C、通常细菌和酵母菌的培养基都可以用高压蒸汽灭菌法灭菌，C错误；D、血细胞计数板适用于真菌的计数，细菌计数板用于细菌的数量测定等，D错误。故选A。2．（2023·辽宁·统考高考真题）细菌气溶胶是由悬浮于大气或附着于颗粒物表面的细菌形成的。利用空气微生物采样器对某市人员密集型公共场所采样并检测细菌气溶胶的浓度（菌落数/m³）。下列叙述错误的是（

）A．采样前需对空气微生物采样器进行无菌处理B．细菌气溶胶样品恒温培养时需将平板倒置C．同一稀释度下至少对3个平板计数并取平均值D．稀释涂布平板法检测的细菌气溶胶浓度比实际值高【答案】D【分析】稀释涂布平板计数是根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落，即是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞。计数时，首先将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使成单个细胞存在（否则一个菌落就不只是代表一个细胞），再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数。【详解】A、为防止杂菌感染，接种前需要对培养基、培养皿、微生物采样器进行灭菌，对实验操作者的双手进行消毒，A正确；B、纯化培养时，为防止污染培养基和水分蒸发，培养皿应倒置放在恒温培养箱内培养，B正确；C、微生物计数时在同一稀释度下，应至少需要对3个菌落数目在30～300的平板进行计数，以确保实验的准确性，C正确；D、使用稀释涂布平板法对微生物计数，数值往往偏小，原因是两个或多个细胞连在一起时，在平板上只能观察到一个菌落，D错误。故选D。3．（2023·山东·高考真题）平板接种常用在微生物培养中。下列说法正确的是（

）A．不含氮源的平板不能用于微生物培养B．平板涂布时涂布器使用前必须进行消毒C．接种后未长出菌落的培养基可以直接丢弃D．利用以尿素为唯一氮源的平板能分离出合成脲酶的微生物【答案】D【分析】1、培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质，是进行微生物培养的物质基础。2、按照培养基的用途，可将培养基分为选择培养基和鉴定培养基。选择培养基是指在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物生长，促进所需要的微生物的生长。3、消毒和灭菌是两个不同的概念，消毒是指使用较为温和的物理、化学或生物的方法杀死物体表面或内部的一部分微生物。灭菌则是指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。【详解】A、不含氮源的平板可用于固氮菌的培养，A错误；B、平板涂布时涂布器使用前必须浸在酒精中，然后在火焰上灼烧灭菌，这种操作属于灭菌，不属于消毒，B错误；C、使用后的培养基即使未长出菌落也要在丢弃前进行灭菌处理，不能直接丢弃，以免污染环境，C错误；D、脲酶可以催化尿素分解，在以尿素为唯一氮源的平板上，能合成脲酶的微生物可以分解尿素获得氮源而进行生长繁殖，但是不能合成脲酶的微生物因缺乏氮源而无法生长，因此以尿素为唯一氮源的平板能分离出合成脲酶的微生物，D正确。故选D。4．（2023·广东·统考高考真题）研究者拟从堆肥中取样并筛选能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜热菌。根据堆肥温度变化曲线（如图）和选择培养基筛选原理来判断，下列最可能筛选到目标菌的条件组合是（

）A．a点时取样、尿素氮源培养基B．b点时取样、角蛋白氮源培养基C．b点时取样、蛋白胨氮源培养基D．c点时取样、角蛋白氮源培养基【答案】D【分析】筛选能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜热菌，要用角蛋白氮源培养基。【详解】研究目的是筛选能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜热菌，因此既要耐高温，又要能够高效降解角蛋白，所以在c点取样，并且用角蛋白氮源培养基进行选择培养，所以D正确，ABC错误。故选D。5．（2022·辽宁·统考高考真题）为避免航天器在执行载人航天任务时出现微生物污染风险，需要对航天器及洁净的组装车间进行环境微生物检测。下列叙述错误的是（

）A．航天器上存在适应营养物质匮乏等环境的极端微生物B．细菌形成菌膜粘附于航天器设备表面产生生物腐蚀C．在组装车间地面和设备表面采集环境微生物样品D．采用平板划线法等分离培养微生物，观察菌落特征【答案】D【分析】微生物常见的接种的方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。【详解】A、嗜极微生物适应极端环境的特性使它们有在空间暴露环境或地外星球环境中存活的可能，因此航天器上存在适应营养物质匮乏等环境的极端微生物，A正确；B、细菌形成菌膜粘附于航天器设备表面产生生物腐蚀，会腐蚀舱内材料以及设备线路、元器件，B正确；C、对航天器及洁净的组装车间进行环境微生物检测，需要在组装车间地面和设备表面采集环境微生物样品，C正确；D、航天器及洁净的组装车间环境微生物很少，分离培养微生物，观察菌落特征，不需要采用平板划线法，D错误。6．（2022·江苏·统考高考真题）下列是某同学分离高产脲酶菌的实验设计，不合理的是（

）A．选择农田或公园土壤作为样品分离目的菌株B．在选择培养基中需添加尿素作为唯一氮源C．适当稀释样品是为了在平板上形成单菌落D．可分解酚红指示剂使其褪色的菌株是产脲酶菌【答案】D【分析】为了筛选可分解尿素的细菌，配制的培养基应选择尿素作为唯一氮源，含脲酶的微生物在该培养基上能生长，其它微生物在该培养基上因缺乏氮源而不能生长，可用于分离含脲酶的微生物。【详解】A、农田或公园土壤中含有较多的含脲酶的微生物，A正确；B、为了筛选可分解尿素的细菌，配制的培养基应选择尿素作为唯一氮源，含脲酶的微生物在该培养基上能生长，B正确；C、当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，C正确；D、在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，氨会使培养基的pH升高，酚红指示剂将变红，因此在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，能对分离的菌种做进一步鉴定，D错误。故选D。7．（2021·北京·统考高考真题）人体皮肤表面存在着多种微生物，某同学拟从中分离出葡萄球菌。下述操作不正确的是（）A．对配制的培养基进行高压蒸汽灭菌B．使用无菌棉拭子从皮肤表面取样C．用取样后的棉拭子在固体培养基上涂布D．观察菌落的形态和颜色等进行初步判断【答案】C【分析】实验室常用的消毒和灭菌方法的比较：1、消毒：煮沸消毒法（一般物品）、巴氏消毒法（一些不耐高温的液体，如牛奶）、化学药剂消毒法（如用酒精擦拭双手，用氯气消毒水源等）、紫外线消毒法（接种室、操作台）；2、灭菌：灼烧灭菌（接种工具）、干热灭菌（玻璃器皿、金属用具）、高压蒸汽灭菌（培养基及容器）。【详解】A、为避免杂菌污染干扰，需对配制的培养基进行高压蒸汽灭菌，A正确；B、葡萄球菌需从人体皮肤的微生物中分离，为避免杂菌污染，故需要使用无菌棉拭子从皮肤表面取样，B正确；C、用取样后的棉拭子浸出液在固体培养基上涂布，C错误；D、根据微生物在固体平板培养基表面形成的菌落的形状、大小、隆起程度和颜色等特征进行鉴别，D正确。故选C。8．（2021·山东·统考高考真题）解脂菌能利用分泌的脂肪酶将脂肪分解成甘油和脂肪酸并吸收利用。脂肪酸会使醇溶青琼脂平板变为深蓝色。将不能直接吸收脂肪的甲，乙两种菌分别等量接种在醇溶青琼脂平板上培养。甲菌菌落周围呈现深蓝色，乙菌菌落周围不变色，下列说法错误的是（

）A．甲菌属于解脂菌B．实验中所用培养基以脂肪为唯一碳源C．可将两种菌分别接种在同一平板的不同区域进行对比D．该平板可用来比较解脂菌分泌脂肪酶的能力【答案】B【分析】选择培养基：根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基使混合菌样中的劣势菌变成优势菌，从而提高该菌的筛选率。鉴别培养基：依据微生物产生的某种代谢产物与培养基中特定试剂或化学药品反应，产生明显的特征变化而设计。【详解】A、根据题干信息“甲菌菌落周围呈现深蓝色”，说明甲可以分泌脂肪酶将脂肪分解成甘油和脂肪酸，脂肪酸会使醇溶青琼脂平板变为深蓝色，因此甲菌属于解脂菌，A正确；B、乙菌落周围没有出现深蓝色，说明乙菌落不能产生脂肪酶，不能利用脂肪为其供能，但乙菌落也可以在培养基上生存，说明该培养基不是以脂肪为唯一碳源，B错误；C、可将两种菌分别接种在同一平板的不同区域进行对比，更加直观，C正确；D、可以利用该平板可用来比较解脂菌分泌脂肪酶的能力，观察指标可以以菌落周围深蓝色圈的大小，D正确。故选B。9．（2021·山东·统考高考真题）含硫蛋白质在某些微生物的作用下产生硫化氢导致生活污水发臭。硫化氢可以与硫酸亚铁铵结合形成黑色沉淀。为探究发臭水体中甲、乙菌是否产生硫化氢及两种菌的运动能力，用穿刺接种的方法，分别将两种菌接种在含有硫酸亚铁铵的培养基上进行培养，如图所示。若两种菌繁殖速度相等，下列说法错误的是（

）A．乙菌的运动能力比甲菌强B．为不影响菌的运动需选用液体培养基C．该实验不能比较出两种菌产生硫化氢的量D．穿刺接种等接种技术的核心是防止杂菌的污染【答案】B【分析】图中是穿刺接种的方法，根据题干中的信息“硫化氢可以与硫酸亚铁铵结合形成黑色沉淀”，所以根据黑色沉淀的多少，比较两种菌产生硫化氢的能力。【详解】A、从图中可以看出甲菌在试管中分布范围小于乙菌，说明了乙菌的运动能力比甲菌强，A正确；B、为不影响菌的运动需选用半固体培养基，B错误；C、根据题意，黑色区域的面积大小反映两种菌运动能力的大小，而不能表示二者产生硫化氢的能力大小，C正确；D、微生物接种技术的核心是防止杂菌的污染，D正确。10．（2021·广东·统考高考真题）中国科学家运用合成生物学方法构建了一株嗜盐单胞菌H，以糖蜜（甘蔗榨糖后的废弃液，含较多蔗糖）为原料，在实验室发酵生产PHA等新型高附加值可降解材料，期望提高甘蔗的整体利用价值。工艺流程如图。回答下列问题：（1）为提高菌株H对蔗糖的耐受能力和利用效率，可在液体培养基中将蔗糖作为，并不断提高其浓度，经多次传代培养（指培养一段时间后，将部分培养物转入新配的培养基中继续培养）以获得目标菌株。培养过程中定期取样并用的方法进行菌落计数，评估菌株增殖状况。此外，选育优良菌株的方法还有等。（答出两种方法即可）（2）基于菌株H嗜盐、酸碱耐受能力强等特性，研究人员设计了一种不需要灭菌的发酵系统，其培养基盐浓度设为60g/L，pH为10，菌株H可正常持续发酵60d以上。该系统不需要灭菌的原因是。（答出两点即可）（3）研究人员在工厂进行扩大培养，在适宜的营养物浓度、温度、pH条件下发酵，结果发现发酵液中菌株H细胞增殖和PHA产量均未达到预期，并产生了少量乙醇等物质，说明发酵条件中可能是高密度培养的限制因素。（4）菌株H还能通过分解餐厨垃圾（主要含蛋白质、淀粉、油脂等）来生产PHA，说明其能分泌。【答案】唯一碳源稀释涂布诱变育种、基因工程育种盐浓度为60g/L的条件下，其他杂菌因失水过多而死亡；pH为10的条件下，其他杂菌的酶变性失活，生长繁殖受抑制氧气（O2或溶解氧）蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶等【分析】微生物的筛选和计数方法：（1）实验室中微生物的筛选原理实验室筛选：人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。（2）微生物常见的接种方法：稀释涂布平板法、平板划线法。（3）测定微生物数量的方法：①直接计数法：常用显微镜直接技术法，一般适用于纯培养悬浮液中各种单细胞菌体的计数。②间接计数法：常用稀释平板计数法，平板培养基上长出一个菌落就代表原待测样品中一个微生物个体。【详解】（1）根据题意分析，该实验的目的是提高菌株H对蔗糖的耐受能力和利用效率，结合微生物的代谢需求，其液体培养基应该以蔗糖作为唯一碳源。并不断提高其浓度，经多次传代培养（指培养一段时间后，将部分培养物转入新配的培养基中继续培养）以获得目标菌株。培养过程中定期取样并用稀释涂布的方法进行菌落计数，评估菌株增殖状况。此外，选育优良菌株的方法还有诱变育种、基因工程育种等。（2）已知，菌株H具有嗜盐、酸碱耐受能力强等特性，因此当培养基盐浓度为60g/L，pH为10时，菌株H可正常持续发酵60d以上，而盐浓度为60g/L的条件下，其他杂菌因失水过多而死亡；pH为10的条件下，其他杂菌的酶变性失活，生长繁殖受抑制，故该系统不需要灭菌。（3）分析题意，扩大培养时，营养物浓度、温度、pH等条件下适宜，而发酵液中菌株H细胞增殖和PHA产量均未达到预期，并产生了少量乙醇等物质，说明发酵条件中氧气不足，使菌种进行无氧呼吸产生乙醇，即氧气（O2或溶解氧）是限制高密度培养的重要因素。（4）根据酶的专一性可知，菌株H之所以能通过分解主要含蛋白质、淀粉、油脂等的餐厨垃圾来生产PHA，说明其能分泌蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶等。1．金黄色葡萄球菌是一种常见的食源性致病微生物，其具有耐高盐的特性，在环境中分布广泛。下列相关叙述错误的是（

）A．可从食物和人的粪便中分离得到金黄色葡萄球菌B．培养过金黄色葡萄球菌的培养基要灭菌后才能丢弃C．分离样品中的金黄色葡萄球菌时，用高盐液体培养基培养不能增加该菌的浓度D．在固体选择培养基上采用平板划线法接种，可获得金黄色葡萄球菌的纯培养物【答案】C【分析】培养基(1)概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。(2)营养组成：一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。此外，还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。(3)种类：①按照物理性质可分为液体培养基、固体培养基、半固体培养基。②按照成分的来源可分为天然培养基和合成培养基。③按照功能用途可分为选择培养基、鉴别培养基等。【详解】A、金黄色葡萄球菌是一种常见的食源性致病微生物，因此可从食物和人的粪便中分离得到金黄色葡萄球菌，A正确；B、使用过的培养基及其培养物必须经过灭菌处理后才能丢弃，B正确；C、金黄色葡萄球菌可在盐浓度接近8％的环境中生长，具有耐高盐的特性，因此分离样品中的金黄色葡萄球菌时，用高盐液体培养基培养可以增加该菌的浓度，C错误；D、对微生物进行分离、纯化可用平板划线法或稀释涂布法，因此，在固体选择培养基上采用平板划线法接种，可获得金黄色葡萄球菌的纯培养物，D正确。故选C。2．下列关于微生物实验操作的叙述正确的是（

）A．对酵母菌细胞进行计数时，通常使用细菌计数板B．平板划线时，只有在最后一个划线区域才可得到所需单菌落C．在统计样品活菌数时，需对每个稀释度进行涂布培养并计数D．在平板上划线和涂布时，均需避免弄破培养基表面【答案】D【分析】统计菌落数目的方法（1）显微镜直接计数法①原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量；②方法：用计数板计数；③缺点：不能区分死菌与活菌。（2）间接计数法（活菌计数法）①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。【详解】A、酵母菌属于真菌，对酵母菌细胞进行计数时，通常使用血细胞计数板，A错误；B、平板划线时，一般在最后一个划线区域可得到所需单菌落，B错误；C、在统计样品活菌数时，并不需对每个稀释度进行涂布培养并计数，较为理想的计数平板在涂布培养后菌落数应在30300之间，要得到这样的适合计数的平板，C错误；D、在平板上划线和涂布时，均需避免弄破培养基表面，否则会导致不能形成正常菌落，D正确。3．酵母菌的品质影响葡萄酒的产量和质量，研究人员为分离出产酒精能力强的酵母菌菌株，进行了如图Ⅰ所示实验，甲、乙、丙、丁锥形瓶内分别加入100mL完全培养基。下列说法正确的是（

）A．传统葡萄酒发酵时，将葡萄冲洗去梗后榨汁装满消毒后的玻璃瓶B．对培养基进行高压蒸汽灭菌，需在压力为100kPa、温度为121℃的条件下C．用稀释涂布平板法计算出葡萄酒过滤液的活菌数为6.8×106个/L，此数值可能低于实际的活菌数D．由图Ⅱ可知，丙瓶出现的原因可能是培养瓶密封不严，丁组酵母菌产酒精能力比乙弱【答案】B【分析】实验室常用的灭菌方法：①灼烧灭菌：将微生物的接种工具，如接种环、接种针或其他金属工具，直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，可以迅速彻底地灭菌，此外，在接种过程中，试管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通过火焰燃烧来灭菌。②干热灭菌：能耐高温的，需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培养皿）和金属用具等，可以采用这种方法灭菌。③高压蒸汽灭菌：将灭菌物品放置在盛有适量水的高压蒸汽灭菌锅内，为达到良好的灭菌效果，一般在压力为100kPa,温度为121℃的条件下，维持15～30min。【详解】A、传统葡萄酒发酵时，将葡萄冲洗去梗后榨汁装到消毒后的玻璃瓶，留1/3的空间，A错误；B、培养皿和培养基都可以用高压蒸灭菌法进行灭菌，在压力100kpa，温度121℃条件下1530min后，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至0时，打开排气阀，B正确；C、若对菌液计数，需选取菌落数处于30～300的培养皿计数据图可知，该培养基的菌落数为（62+68+74）÷3÷0.1mL×104（稀释倍数）×103=6.8×109个/L，由于计数过程中两个或两个以上细胞连在一起，平板上生长出一个菌落，所以数目偏小，C错误；D、甲接种无菌水，瓶中无菌，说明培养基灭菌彻底，无菌操作正常，丁组的活菌数比乙组少，但是产生的酒精和乙组一样多，所以丁组产生酒精能力比乙强，D错误。故选B。4．下图为不同稀释度的酵母菌培养液涂布后的实验结果图，下列叙述正确的是（

）A．实验中使用接种环完成上述涂布过程B．涂布时避免涂布到琼脂边缘，因为沿着琼脂边缘计数菌落更加困难C．酵母菌扩大培养过程中需要使用液体培养基静置培养D．计数105稀释度下培养皿的菌落数，可以计算出每毫升培养液的酵母细胞个数【答案】B【分析】微生物常见的接种的方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养基表面，经培养后可形成单个菌落。【详解】A、由图可知，培养基上菌落分布均匀，使用的接种方法应为稀释涂布平板法，故应用涂布器完成上述涂布过程，A错误；B、由于菌落生长在边缘时，且易连成片，不容易计数，故涂布时避免涂布到琼脂边缘，B正确；C、酵母菌在氧气充足的条件下大量增殖，酵母菌扩大培养过程中需要使用液体培养基需震荡培养，增大培养液中氧气的含量，C错误；D、符合计数的培养基上的菌落数在30300之间，105稀释度下培养皿的菌落数很少，故不可用于计算每毫升培养液的酵母细胞个数，D错误。故选B。5．某学习小组采用如下培养基进行酵母菌的纯化培养实验。有关叙述错误的是（

）组分马铃薯滤液葡萄糖琼脂水含量200g20g15g定容至1000mLA．该培养基是以葡萄糖为唯一碳源的选择培养基B．装有培养基的锥形瓶、培养皿等应进行干热灭菌C．将接种后的平板置于28℃左右的恒温摇床上振荡培养D．若同时计数酵母菌数量，应采用稀释涂布平板法接种【答案】ABC【分析】酵母菌的纯化培养的步骤是配制培养基、灭菌、倒平板、接种、分离和培养【详解】A、葡萄糖不是酵母菌生长繁殖的唯一碳源，马铃薯滤液也能为酵母菌提供碳源、氮源和无机盐等营养成分，A错误；B、装有培养基的锥形瓶、培养皿不能进行干热灭菌，可进行高压蒸汽灭菌，B错误；C、平板不适宜在摇床上振荡培养，C错误；D、稀释涂布平板法可对微生物进行计数和分离，D正确。故选ABC。6．产脂肪酶酵母可用于含油废水处理。为筛选产脂肪酶酵母菌株，科研人员开展了相关研究如图，据图回答下列问题：(1)图中I号培养基称为培养基（按功能分）；③过程所用的接种方法统计数目会比活菌实际数目少，原因是。(2)该培养基中加入的脂肪可以为目的菌提供。(3)在培养基的配制过程中，操作方法包括以下步骤，其正确顺序为。①溶化②调整pH③培养基的分装④称量⑤灭菌⑥倒平板(4)可用于判断培养基上生长菌落种类的依据是菌落的（至少写出两点）(5)在处理含油废水的同时，可获得蛋白质，实现污染物资源化。为评价A、B两菌株的相关性能，进行了培养研究，结果如下图，据图分析，应选择菌株进行后续相关研究，理由是。(6)根据下图结果，计算每克土壤样品约含细菌个。【答案】(1)选择当两个或多个细胞连在一起时，培养基上长出的是一个菌落(2)碳源、能源(3)④①②③⑤⑥(4)形态特征、颜色、隆起程度、分布状况等(5)B与菌株A比较，B菌株增殖速度快，蛋白产量高，降解脂肪能力强，净化效果好(6)1.7×109【分析】微生物常见的接种的方法：①平板划线法：将已经灭菌的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在划线的过程中，随着线的延伸，微生物的数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过适宜倍数稀释后，均匀涂布在培养基表面，经培养后可形成单个菌落。【详解】（1）培养基按功能主要分为选择培养基、鉴别培养基，其中选择培养基指的是在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其它种类微生物生长的培养基。图中I号培养基加入适量的脂肪用于筛选产脂肪酶酵母菌株，因此属于选择培养基。通过稀释涂布平板法测得的菌落数值往往比活菌的实际数值偏小，这是因为当两个或多个菌落连在一起时，观察计数只能计为一个菌落。（2）培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐等营养物质，而脂肪是有机物，该培养基中加入的脂肪可以为目的菌提供碳源、能源。（3）培养基的配制过程中正确的操作步骤是称量、溶化、调整pH、培养基的分装、灭菌最后倒平板，其正确顺序为④①②③⑤⑥。（4）不同微生物形成的菌落形态、颜色、隆起程度、分布状况等特征不相同，因此可以用于判断菌落种类。（5）由曲线图分析可知，相同时间内，菌株B的细胞密度高于菌株A，而菌株B的脂肪剩余量低于菌株A的脂肪剩余量，故进行相关研究可选择菌株B，原因是菌株B增殖速度快，同时降解脂肪的能力强，净化效果更好。（6）称取10g某土壤样品，用无菌水定容到100mL，再按图所示进行梯度稀释，最终分别取0.1mL菌悬液涂布在固体培养基上，培养后平均酵母菌落目为（168+175+167）÷3=170，相当于稀释了106倍，故该样本中每克土壤约含酵母菌（170÷0.1）×106=1.7×109个/g。7．酵母菌作为白酒发酵生产中的主酵菌群，通常在整个发酵过程中的前期，对发酵原料的转化利用能力及乙醇的生产能力较强，但随着发酵过程的进行，在窖池酸度下降至pH≤4．5后，酵母菌的生理代谢活动逐渐受到抑制，对发酵原料的转化利用能力及乙醇的发酵生产能力也逐渐下降，甚至停止。酒用耐酸性酵母菌的筛选及应用，将改善传统的白酒生产工艺，促进白酒生产的产量与产值的提高，将产生较大的经济效益。现开展对五粮液酒厂耐酸性酿酒酵母菌的分离与筛选。请回答下列问题：(1)从窖池底泥，黄浆水（窖底部的水，呈黄色，含有丰富的有机酸）中寻找耐酸酵母菌的原因是。(2)过程②需充分振荡的主要目的是。过程②所用培养基为酵母菌提供了营养。(3)过程③所用接种工具是，划线顺序是。酿酒酵母不能采用赖氨酸作为酵母氮源，因而在赖氨酸培养基上不能生长。将④中菌株经饥饿处理后接种到赖氨酸培养基，直到15d后仍无菌落生长，说明④中的菌种是。(4)对麦芽汁培养48h的酵母菌株，以16×40倍的显微镜镜检，筛选出菌体上多端出芽菌株，目的是。【答案】(1)寻找目的菌株时，要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找（或酵母菌生长繁殖时，将产生一定量的自发突变，一旦“耐酸突变”发生，耐酸突变个体因自然选择存活于窖底泥、黄浆水等低pH环境中）(2)使菌体与培养液充分接触；增大培养液的溶氧量水、无机盐、碳源、氮源(3)接种环aedcb（或bcdea）酿酒酵母(4)得到繁殖能力强的酵母菌【分析】葡萄酒与白酒制作的原理是酵母菌无氧呼吸产生酒精和二氧化碳，酵母菌是兼性厌氧微生物，在缺氧条件下进行无氧呼吸，在氧气充足的条件下进行有氧呼吸，酵母菌具有核膜包被的细胞核，属于真核生物，适宜酵母菌生长的温度范围是18～25℃。【详解】（1）寻找目的菌株时，要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找，这样才更容易成功。因此从窖池底泥，黄浆水（窖底部的水，呈黄色，含有丰富的有机酸）去寻找耐酸酵母菌。（2）充分振荡可以使菌体与培养液充分接触、增大培养液的溶氧量，有利于酵母菌的繁殖。过程②的液体培养基的成分适合酵母菌的生存繁殖，因此为其提供了水、无机盐、碳源、氮源。（3）过程③采用的是平板划线法，因此接种工具是接种环。每次划线都要从上次划线的末端开始，因此推测划线的顺序是：aedcb（或bcdea）。酿酒酵母不能采用赖氨酸作为酵母氮源，因而在赖氨酸培养基上不能生长。将④中菌株经饥饿处理后接种到赖氨酸培养基，直到15d后仍无菌落生长，说明④中的菌种无法利用赖氨酸，那该菌种为酿酒酵母。（4）菌体上多端出芽菌株，这样的菌