高效液相色谱分析法-课件

第七章

高效液相色谱法

Chapter7

HighPerformanceLiquidChromatography第一节概述一、高效液相色谱法固定相颗粒大小固定相颗粒直径很小流动相输送压力样品分离速度柱效高灵敏度高第一节概述一、高效液相色谱法采用颗粒极细、规那么均匀的固定相二、高效液相色谱别离理论可忽略影响高效液相色谱峰扩张的主要因素：A和Cu项a.采用适宜的流动相，控制相对较小的流动相流速；b.采用颗粒直径极小的固定相；c.色谱柱填充均匀；d.减小固定相液膜厚度；第二节高效液相色谱仪第二节高效液相色谱仪一、高效液相色谱仪流程高压输液系统辅助设备进样器色谱柱检测器数据处理系统用一台仪器展示说明各局部及其功能？第二节高效液相色谱仪一、高效液相色谱仪流程高压输液系统、进样器、色谱柱、检测器为色谱别离提供流速恒定的流动相梯度洗脱：在别离过程中，使流动相组成随时间改变而改变。通过不断改变色谱柱中流动相的极性、离子强度、pH等因素，使被测组分的相对保存值得以改变，提高别离效率。二、高效液相色谱仪组成1.高压输液系统第二节高效液相色谱仪一、高效液相色谱仪流程高压输液系统、进样器、色谱柱、检测器为色谱别离提供流速恒定的流动相二、高效液相色谱仪组成1.高压输液系统2.进样器定量引入样品第二节高效液相色谱仪一、高效液相色谱仪流程高压输液系统、进样器、色谱柱、检测器为色谱别离提供流速恒定的流动相二、高效液相色谱仪组成1.高压输液系统2.进样器定量引入样品3.别离系统-色谱柱实现样品组分高效别离内径：4.6mm，长度：10-50cm填料直径：5-10m第二节高效液相色谱仪一、高效液相色谱仪流程高压输液系统、进样器、色谱柱、检测器为色谱别离提供流速恒定的流动相二、高效液相色谱仪组成1.高压输液系统2.进样器定量引入样品3.别离系统-色谱柱实现样品组分高效别离4.检测器(系统)将样品组分的量定量转化为电信号紫外-可见检测器(UVD)折光检测器(RID)荧光检测器(FLD)电化学检测器(ED)蒸发光散射检测器(ELSD)第二节高效液相色谱仪一、高效液相色谱仪流程高压输液系统、进样器、色谱柱、检测器为色谱别离提供流速恒定的流动相二、高效液相色谱仪组成1.高压输液系统2.进样器定量引入样品3.别离系统-色谱柱实现样品组分高效别离4.检测器(系统)将样品组分的量定量转化为电信号5.附属系统脱气装置流动相过滤装置第二节高效液相色谱仪一、高效液相色谱仪流程高压输液系统、进样器、色谱柱、检测器二、高效液相色谱仪组成三、常用检测器1.紫外检测器固定波长紫外检测器可调波长紫外检测器二极管阵列检测器(PAD)用于有紫外-可见吸收的样品组分的检测第二节高效液相色谱仪一、高效液相色谱仪流程高压输液系统、进样器、色谱柱、检测器二、高效液相色谱仪组成三、常用检测器1.紫外检测器具有紫外吸收组分检测2.折光检测器偏转式示差折光检测器通用检测器灵敏度低对温度变化敏感第二节高效液相色谱仪一、高效液相色谱仪流程高压输液系统、进样器、色谱柱、检测器二、高效液相色谱仪组成三、常用检测器1.紫外检测器具有紫外吸收组分检测2.折光检测器通用检测器3.荧光检测器具有荧光组分检测第二节高效液相色谱仪一、高效液相色谱仪流程高压输液系统、进样器、色谱柱、检测器二、高效液相色谱仪组成三、常用检测器1.紫外检测器具有紫外吸收组分检测2.折光检测器通用检测器3.荧光检测器具有荧光组分检测4.电化学检测器具有电响应组分检测5.蒸发光散射检测器通用检测器6.质谱检测器通用检测器第三节高效液相色谱法的主要类型一、液-液分配色谱法不同组分在固定相和流动相中分配系数不同担体+固定液非极性、弱极性化合物极性化合物流动相极性小于固定相极性1.别离原理2.固定相3.流动相正相色谱流动相极性大于固定相极性反相色谱4.别离对象正相色谱反相色谱第三节高效液相色谱法的主要类型一、液-液分配色谱法不同组分与固定相和流动相的作用力不同键合在载体(硅胶)外表非极性、弱极性化合物极性化合物1.别离原理2.固定相3.流动相正相色谱反相色谱4.别离对象正相色谱反相色谱二、化学键合相色谱法固定相直接键合在担体外表烷基、氨基、氰基、羟基烃类+氯仿、醇水、甲醇、乙腈第三节高效液相色谱法的主要类型一、液-液分配色谱法固定相的吸附能力和流动相的溶解能力的差异固体吸附剂各类化合物1.别离原理2.固定相3.流动相4.别离对象二、化学键合相色谱法硅胶、氧化铝、聚酰胺等根据样品组分极性选择分配系数差异正相：极性物质反相：非极性物质分子间作用力差异正、反相色谱三、液-固吸附色谱法第三节高效液相色谱法的主要类型一、液-液分配色谱法不同待测离子与固定相的离子交换能力的差异离子交换树脂各类可电离的化合物1.别离原理2.固定相3.流动相4.别离对象二、化学键合相色谱法各种离子交换树脂结构及性质？具有一定盐浓度的pH缓冲溶液分配系数差异正相：极性物质反相：非极性物质分子间作用力差异正、反相色谱三、液-固吸附色谱法四、离子交换色谱法固定相为离子交换树脂固定相吸附能力及流动相溶解能力各类化合物第三节高效液相色谱法的主要类型一、液-液分配色谱法待测物分子大小(尺寸、形状)不同凝胶高分子化合物1.别离原理2.固定相3.流动相4.别离对象二、化学键合相色谱法葡聚糖、琼脂糖、聚苯乙烯、硅胶等分配系数差异正相：极性物质反相：非极性物质分子间作用力差异正、反相色谱三、液-固吸附色谱法四、离子交换色谱法固定相吸附能力及流动相溶解能力各类化合物固定相的离子交换能力可电离化合物五、尺寸排阻色谱法凝胶(渗透)色谱法四氢呋喃、甲苯、氯仿、二甲基甲酰胺(DMF)、水第三节高效液相色谱法的主要类型一、液-液分配色谱法二、化学键合相色谱法分配系数差异正相：极性物质反相：非极性物质分子间作用力差异正、反相色谱三、液-固吸附色谱法四、离子交换色谱法固定相吸附能力及流动相溶解能力各类化合物固定相的离子交换能力可电离化合物五、尺寸排阻色谱法待测物分子大小大分子化合物六、亲和色谱法样品大分子与固定相外表存在特异性亲和力一、高效液相色谱法和经典液相色谱法比照第五节色谱分析方法的选择采用颗粒极细、规那么均匀的固定相，传质阻力小，别离效率高经典液相色谱高效液相色谱色谱柱：柱长10~200cm，内径10~50mm色谱柱：柱长10~25cm，内径2~10mm常压或减压高压：40~50MPa填料颗粒大：75~600m（200~30目）填料颗粒小：2~50m（2500~300目）柱效低：20~50块塔板/m柱效高：40000~60000块塔板/m分析速度慢：1~20h分析速度快：0.05~1.0h色谱柱只用一次色谱柱可重复多次使用不能在线检测能在线检测高压、固定相颗粒细小，柱效高，分析速度快。主要用于分析一、高效液相色谱法和经典液相色谱法比照第五节色谱分析方法的选择二、高效液相色谱法和气相色谱法比照流动相选择范围别离过程样品状态色谱柱柱温别离对象性质流动相不同高压、固定相颗粒细小，柱效高，分析速度快。主要用于分析目的一、高效液相色谱法和经典液相色谱法比照第五节色谱分析方法的选择二、高效液相色谱法和气相色谱法比照高压、固定相颗粒细小，柱效高，分析速度快。主要用于分析目的流动相及选择范围、样品状态、色谱柱温、别离对象气相色谱高效液相色谱只能分析挥发性物质（约20%的物质）几乎可以分析各种物质不能用于热不稳定物质的分析可以用于热不稳定物质的分析用毛细管柱色谱可得到很高的柱效色谱柱不能很长，柱效不会很高有很灵敏的检测器（ECD）和较灵敏的通用检测器（FID,TCD)有灵敏度较高的通用检测器（ELSD）流动相为惰性气体，与组分无作用流动相为不同极性液体，与组分作用运行和操作容易，运行成本低运行和操作较难，运行成本高仪器制造难度较小仪器制造难度较大一、高效液相色谱法和经典液相色谱法比照第五节色谱分析方法的选择二、高效液相色谱法和气相色谱法比照高压、固定相颗粒细小，柱效高，分析速度快。分析目的流动相及选择范围、样品状态、色谱柱温、别离对象三、色谱分析方法选择制备液相色谱分析气相、高效液相色谱1.基于用途2.基于样品根据样品分子量大小及性质选择样品分子量较大尺寸排阻色谱样品溶于水、可离解离子交换色谱样品溶于水、不离解分配色谱、尺寸排阻色谱样品蒸气压较大气相色谱样品不溶于水液相吸附色谱、分配色谱、尺寸排阻色谱实例？1.什么是高效液相色谱法？HPLC高效的原因是什么？2.与经典液相色谱相比，高效液相色谱法有何特点？3.与气相色谱相比，高效液相色谱法有何特点？4.高效液相色谱仪有哪几局部组成？各有何功能？5.什么是梯度洗脱？梯度洗脱有何优点？6.高效液相色谱检测器主要有哪几种？各适用于何种样品检测？7.高效液相色谱常用的流动相有哪些？8.高效液相色谱法可分为哪几类？各自的别离原理如何？9.何为正相色谱？适用于何种样品别离分析？判断组分流出顺序10.何为反相色谱？适用于何种样品别离分析？判断组分流出顺序11.