农药残留检测技术课件

第二章农药残留样品的

采集

学习指南观察思考课外阅读复习自测退出本章演示文稿本章目录

一、样品的种类二、取样方法三、样品的包装、记录和贮存四、样品的预处理本节首页退出本章

1、主观样品为研究农药残留量与各种因素的关系，从设计的实验区域内采集的样品。

2、客观样品

监测样品和执法样品，测定的农药残留种类是未知的或施药背景不清楚的样品。一、样品的种类本节首页退出本章1、实验室样品从群体采集的送到残留分析实验室的样品。2、检测样品实验室经过缩分减量或经过精制后的样品。3、检测样份从检测样品中称取的用于分析的样品。4、检测溶液经过提取、净化后进入待测状态。知识窗本节首页退出本章

1、取样原则

①代表性②方法与目的保持一致③精度要求④防止化学变化或丢失⑤防止污染二、取样方法本节首页退出本章

2、取样方法

①静态群体中取样②静态群体中取样二、取样方法本节首页退出本章

3、农药残留田间试验及取样

①农药残留田间试验的目的和要求②农药残留田间试验的内容

a、农药残留动态试验

b、施药因素与最终残留量水平相关性

c、农药残留田间试验样品的采集二、取样方法本节首页退出本章

4、商品取样分类

①监测调查取样：随机、概率、分布水平②执法取样：强制性、超标与否二、取样方法本节首页退出本章

5、商品取样量要求

①小的或轻的产品→1.0~1.5Kg②中等大小产品→2.0~2.5Kg③大的产品→4.0~5.0Kg④肉、禽、鱼→1.0~1.5Kg⑤谷物和制品→0.5~1.0Kg二、取样方法本节首页退出本章

6、不同样品的采集要求

①根茎类蔬菜→采集整个果实②叶类蔬菜→除去腐烂和枯萎部分③豆类→整个果实④果类蔬菜→去除茎部⑤谷物→整个籽粒⑥肉类→整体二、取样方法本节首页退出本章三、样品的包装、记录和贮存本节首页退出本章标签（2个）编号：样品名称：采样时间：地点：要求：温度湿度光照单独存放四、样品的预处理本节首页退出本章①粉状物②谷物③小体积水果和蔬菜④大体积水果和蔬菜⑤液体样品⑥土壤对含水量较高的样品采样方法①肉：放人铰肉机中铰匀②水果蔬菜等，放入高速组织捣碎器搅匀③蛋类食品，去壳后用打蛋器打匀。④对于包装食品，取出各种调味品后，再制备均匀。知识窗本节首页退出本章第一节概论一、进展和发展趋势二、样品处理的原则三、样品制备原理四、样品制备（提取）五、常用样品制备技术本节首页退出本章样品前处理：采样技术和样品制备技术。采集→样品→适合分析的形态。过程→耗时、繁琐、误差前处理不好→需要灵敏度高、测定范围宽的检测器和分离效率高的分离柱。一、进展和发展趋势本节首页退出本章①制备过程中避免组分发生化学变化；②要防止和避免欲测定组分的沾污；③尽可能减少无关化合物引入制备过程；④尽可能简单易行。二、样品处理的原则本节首页退出本章三、样品制备原理

利用残留农药与样品基质的物理化学差异，使其从检测系统有干扰作用的样品基质中提取分离出来（相似相溶）。

极性-溶解度、分配系数；挥发性-蒸汽压。本节首页退出本章（一）、分子的极性和水溶性1、极性提取、净化条件的依据。相似相溶原理：使用与农药极性相近的溶剂为提取剂，使残留农药在溶剂中达到最大溶解度。极性判断：电负性、双键、对称性表示：氧化铝吸附剂上洗脱供试溶质的能力本节首页退出本章2、水溶性农药的极性决定其在溶剂中的溶解性。影响溶解性的其他因素①温度：高→溶解性高②含盐量：盐会降低有机物的溶解度。③pH：影响可解离的农药的溶解度（一）、分子的极性和水溶性本节首页退出本章极性溶剂强度溶剂溶解度（20～25℃）溶剂在水中（%）水在溶剂中（%）非极性强反相弱正相正己烷0.000950.0111异辛烷微溶微溶四卤化碳0.0770.010三卤甲烷0.8150.072二卤甲烷2-四氢呋喃任意混溶任意混溶乙醚6.041.468乙酸乙酯8.082.94丙酮任意混溶任意混溶乙腈任意混溶任意混溶异丙醇任意混溶任意混溶甲醇任意混溶任意混溶水任意混溶任意混溶极性弱反相强正相醋酸任意混溶任意混溶（二）、分配定律分配定律：在一对互不相溶的两相溶剂系统中，由于物质在非极性相和极性相中的溶解度不同，当达到平衡时，物质在该两相中的浓度比在一定条件下为常数的定律。KD

（分配系数）=[A]非极性相

/[B]极性相

本节首页退出本章（三）、挥发性与蒸汽压挥发性：液态或固态物质转变为气态的物理性能。挥发性决定：物质在气-液或气-固两相中的分布。分为沸点和蒸汽压。蒸汽压：固态、液态→气态本节首页退出本章四、样品制备（提取）

提取是指通过溶解、吸附（吸着）或挥发等方式将样品中的残留农药分离出来的操作步骤，也叫萃取。避免：强酸、强碱、高温、剧烈操作极性-溶解度、分配系数；挥发性-蒸汽压。本节首页退出本章五、常用样品制备技术溶剂萃取蒸馏技术固相萃取微波萃取衍生化超临界萃取样品制备本节首页退出本章第二节溶剂萃取技术溶剂萃取：溶解性差异，选用对残留农药溶解度大的溶剂，将分析物从样品基质中提取出来的方法。关键：选择合适的提取溶剂。本节首页退出本章一、分类液-液萃取液-固萃取液-气萃取（溶液吸收）萃取对象

本节首页退出本章二、液-液萃取两种不相容的液体水溶剂：亲水化合物进入到水相中。有机溶剂：疏水性化合物将进入有机相中的程度就越大。本节首页退出本章（一）、液-液萃取原理利用样品中不同组分分配在两种不混溶的溶剂中溶解度或分配比的不同来达到分离、提取或纯化的目的。有机相水相本节首页退出本章（二）、Nernst分配定律（1）KD=co／caq有机物质在有机溶剂中的溶解度一般比在水相中的溶解度大，分配系数越大，水相中的有机物可被萃取。本节首页退出本章（二）、Nernst分配定律（2）式中，m0是被萃取溶液中溶质（X）的总含量，

mn是经过n次萃取后，X在溶剂中的剩余量，

V是被萃取溶液的体积，

VB是每次萃取所用溶剂B的体积（均为VB），

n是等量萃取的次数。本节首页退出本章（三）、液-液萃取步骤（1）溶剂体积为样品溶液的30％～35％。振荡几次打开活塞Gas蒸气逸出（也叫放气）本节首页退出本章（三）、液-液萃取步骤（2）絮状物（乳化）有机相水相水相和絮状物静置分层激烈振摇1～2min本节首页退出本章（三）、液-液萃取步骤（3）有机相3～5次本节首页退出本章（四）、产生乳化的原因由于液-液萃取过程中剧烈振动，经常发生乳化现象，特别是那些含脂肪的样品。原因：体系的性质、离子浓度、有机相粘度、萃取温度、pH等。温度越低，有机相粘度越大，离子浓度越高越易产生乳化。本节首页退出本章（五）、破乳的常用方法通过改变KD;改变溶剂或化学平衡作用的添加剂;缓冲剂调节pH;盐调节离子强度等。本节首页退出本章①离心法破乳。2000r／min，2min；②无水硫酸钠研磨法破乳；③蒸干法，蒸干后，再用有机溶剂萃取。不适用挥发性物质的萃取。A、高度乳化（即全部乳化）本节首页退出本章B、中度乳化（乳化率达50％）①电解质破乳。加入无机盐，通过提高体系中水相的比重使两相分层；

破乳率与加入电解质的量成正比。②lmol／L的盐酸；③无水乙醇溶解两相液滴；④无水硫酸钠漏斗过滤。本节首页退出本章C、轻度乳化（两相间形成一薄乳化层）①玻璃棒搅动，削弱吸附作用；②静置一定的时间后，可自然分层。因为乳浊液是液体杂质以微小珠滴散布在液体溶剂中的一种分散体系，是热力学不稳定体系。本节首页退出本章三、液-固萃取固体→萃取溶剂→振荡（加热）→离心/过滤→分离→欲萃取组分进入溶剂。本节首页退出本章（一）、萃取过程

溶解和扩散的过程

分子扩散：固体样品表面/溶剂接解处影响因素：温度、分子大小和液体介质的黏度。对流扩散：远离固体样品表面处的扩散影响因素：流动液体的速度和状态，液体的黏度、样品表面的性质等。②①

索氏萃取装置和K-D浓缩器本节首页退出本章（二）、萃取装置四、不同样品中残留农药的提取1、水样2、气体样品3、植物和动物样品4、土壤样品本节首页退出本章五、萃取剂的选择1、萃取剂的选择性（极性）2、稳定性、毒性3、沸点：40~80℃者为宜

4、萃取剂回收的难易与经济性5、色谱检测器的响应

本节首页退出本章第三节固相萃取技术一、固相萃取概念二、固相萃取原理五、HPLC与SPE的比较三、装置及操作程序

四、溶剂的选择本节首页退出本章六、固相微萃取七、气体萃取（顶空技术）

一、固相萃取(SPE)概念本节首页退出本章SPE：SolidPhaseExtraction是一种液相色谱分离，利用固体吸附剂将液体样品中的目标化合物与干扰化合物分离，达到分离和富集目标化合物的目的。慢中等快淋洗液二、固相萃取的模式及原理本节首页退出本章反相固相萃取正相固相萃取离子交换固相萃取①阴离子交换②阳离子交换（一）、反相固相萃取本节首页退出本章流动相：极性（水溶液）或中等极性固定相：非极性。分离对象：中等到非极性物质。本节首页退出本章分析物中的CH键+硅胶表面官能团→吸附→极性溶液中的有机分析物→保留在SPE。用非极性溶剂解吸吸附在固定相中的目标物质。1、反相固相萃取原理本节首页退出本章2、常用反相固相萃取柱LC-18、LC-8：标准的单键合硅胶ENVI-18、ENVI-8：聚合键合类填料ENVI-ChromP：苯乙烯：疏水

ENVI-Carb：含碳

本节首页退出本章（二）、正相固相萃取流动相：非极性、中等极性固定相：极性。分析物质：极性、中等极性、非极性本节首页退出本章1、正相固相萃取原理

保留取决于分析物的极性官能团与吸附剂表面的极性官能团之间的相互作用。用比样品本身更极性的溶剂洗脱吸附的分析物质。本节首页退出本章①极性官能团键合硅胶

LC-CN，LC-NH2，

LC-Diol②极性吸附物质

LC-Si，LC-Florisil，

ENVI-Florisil，LC-Alumina2、常用正相固相萃取柱知识窗流动相①②本节首页退出本章（三）、离子交换固相萃取适用于带有电荷的化合物（水溶液、有机溶液）。原理：静电吸引，化合物上的带电荷基团与键合硅胶上的带电荷基团之间的吸引。分为：阴离子交换和阳离子交换。1、阴离子（负电荷）交换本节首页退出本章LC-SAX、LC-NH2：脂肪族季铵类盐+硅胶2、阳离子交换本节首页退出本章LC-SCX：磺酸基；LC-WCX：羧酸基团本节首页退出本章（四）溶剂极性的影响①目标化合物在极性/非极性溶剂中的溶解度，这主要涉及淋洗液的选择。②目标化合物有无可能离子化（可用调节pH值实现离子化）。本节首页退出本章（四）溶剂极性的影响③目标化合物有无可能与吸附剂形成共价键。④在吸附剂上吸附点的竞争程度，关系到能否很好分离。三、固相萃取的装置及操作程序本节首页退出本章固相萃取的装置筛板筛板筛板本节首页退出本章1、固相萃取的装置本节首页退出本章1、固相萃取的装置本节首页退出本章2、操作程序（1）、活化吸附剂

萃取之前要用适当的溶剂淋洗小柱，以使吸附剂保持湿润，可以吸附目标化合物或干扰化合物。本节首页退出本章2、操作程序（2）、上样（吸附）样品倒入活化后的固相萃取小柱，然后利用抽真空，加压或离心的方法使样品进入吸附剂。本节首页退出本章2、操作程序3、洗涤（去除杂质）在样品进入吸附剂，目标化合物被吸附后，可先用较弱的溶剂将弱保留干扰化合物洗掉。本节首页退出本章2、操作程序4、洗脱和收集再用较强的溶剂将目标化合物洗脱下来，加以收集。本节首页退出本章活化吸附剂进

样洗涤洗脱我来说！四、SPE分离机制与溶剂的选择分离机制典型的弱溶剂（保留条件）典型的强溶剂（洗脱条件）反相SPE缓冲液或低浓度的甲醇或乙腈乙腈、甲醇或溶剂与水的混合物正相SPE正己烷、甲苯等二氯甲烷、甲醇等阳离子交换SPE低离子强度缓冲液(<0.1mol/L)高离子强度缓冲液（＞0.1mol/L)低反离子强度高反离子强度阴性离子交换SPE低离子强度缓冲液（<0.1mol/L)高离子强度缓冲液(>0.1mol/L)本节首页退出本章五、HPLC与SPE的比较HPLCSPE硬件（柱子）不锈钢柱塑料柱颗粒度(um)540颗粒形状球型(均匀）球型（不均匀）塔板数20～25，000＜1001、柱子的比较

柱接头

螺帽柱管

过滤片型号：C18柱管筛板固定相尖端？N=L/H2、塔板数的比较本节首页退出本章六、固相微萃取

SPME不是将待测物质全部分离出来，通过在样品与固相涂层间的平衡来达到分离。方法：玻璃纤维浸入样品中→残留农药→扩散→吸附→平衡→取出玻璃纤维→洗脱→分析。本节首页退出本章

固相微萃取装置本节首页退出本章

固相微萃取装置关键：石英纤维上涂吸附剂原则：目标化合物是非极性时选择非极性涂层；目标化合物是极性时选择极性涂层。

使用方法本节首页退出本章七、气体萃取（顶空技术）本节首页退出本章七、气体萃取（顶空技术）本节首页退出本章七、气体萃取（顶空技术）取样品基质（液体和固体）上方的气相部分进行色谱分析。用途：痕量高挥发性物质的分析测定，气体是挥发性物质的最理想的溶剂。本节首页退出本章1、特点①操作简单②可自动化③可变因素多④灵敏度高：检出限可达10-12水平。本节首页退出本章2、分类静态顶空：在一个密闭的容器中，样品与样品上方气体（1/2）达到平衡。动态顶空：

“连续气体萃取”方法，不必两相达到平衡。经捕集浓缩后进行测定。本节首页退出本章3、静态顶空过程本节首页退出本章4、动态顶空过程捕集阱中捕集浓缩。“烘烤”：载气的流动方向与热解吸时的流动方向相反。第四节蒸馏和浓缩技术一、蒸馏和精馏三、浓缩二、净化本节首页退出本章一、蒸馏和精馏本节首页退出本章一种材料在不同温度下的饱和蒸气压变化是蒸馏分离的基础。蒸馏1、（半）挥发性杂质：不挥发/难挥发→主体留下2、（半）挥发主体蒸发→不挥发/难挥发→杂质留下。一、蒸馏和精馏本节首页退出本章1、简单蒸馏2、减压蒸馏3、水蒸汽蒸馏4、精馏（一）、简单蒸馏本节首页退出本章液体样品→加热冷凝→回流→回流液冷凝→收集→流出液1、简单蒸馏要求本节首页退出本章①圆底烧瓶②沸点差别＞50℃。③加热温度：40~150℃④加热温度不能比蒸馏物质的沸点高出30℃本节首页退出本章2、简单蒸馏装置组成：蒸馏烧瓶、温度计、冷凝器、收集器和加热装置等。备注：液体装入烧瓶后，加热之前，加入沸石。（二）、减压蒸馏本节首页退出本章沸点：蒸气压=外界大气压时的温度。沸点：随外界压力的降低而降低。减压蒸馏：真空泵降低表面压力（沸点）高沸点：0.13～26.7kPa条件下减压蒸馏。1、压力换算本节首页退出本章1atmos=1013mBar1Kpa=0.146psi1Psi=68.948mbar1atmos=？Kpa

1-电炉；2-克莱森瓶；3-毛细管；4-螺旋止水夹；5-温度计；6-细铜丝；7-冷凝器；8-接受瓶；9-接收管；10-转动把；11-压力计；12-安全瓶；13-三通管阀门；14-接抽气机2、减压蒸馏装置(三）、水蒸汽蒸馏本节首页退出本章对象：有机物具备条件：几乎不溶于水、不会发生化学变化、在100℃下蒸汽压有大于1.3kPa。本节首页退出本章盛水量为75％液体样品1/3。烧瓶倾斜45o冷凝管：30o

。

水蒸气蒸馏装置被蒸馏的材料根本不会加热到比蒸汽的温度还高。二、净化（纯化）本节首页退出本章样品经萃取→被测成分→萃取液→含有杂质→干扰测定。※萃取液→适当处理→除去杂质→纯化。（一）干扰杂质的性质本节首页退出本章1、脂类：脂肪酸、醇→溶于有机溶剂2、色素：溶于极性较强的溶剂3、其他：硫→ECD、FPD

塑料管→有机溶剂（二）、净化方法本节首页退出本章1、过滤2、柱层析法3、液-液分配法（又称萃取法）4、吹扫共馏法5、沉淀净化法6、化学净化法本节首页退出本章1、样品过滤过滤：样品中除去颗粒物用0.45μm或

0.22μm滤膜去除干扰物滤膜有机滤膜：白色无机滤膜：绿色2、柱层析法本节首页退出本章利用被测物质与干扰物质在固体吸附剂表面的吸附力不同而达到分离的目的。农药一般先被淋洗出来，达到与杂质分离的目的。柱层柱类型本节首页退出本章①弗罗里硅土柱：乙醚/石油醚②氧化铝柱：乙醚/正己烷③硅胶柱：④活性碳柱：乙腈/苯本节首页退出本章3、液-液分配法是利用物质在两种互不相溶的溶剂中极性不同，将有机污染物从抽提液转移到另一种溶剂中达到分离。①具备以下条件

本节首页退出本章⑴对被测物（农药、兽药、真菌毒素等）有较大的溶解性；⑵对色素、脂肪、蜡质等杂质有较小的溶解性。②萃取液与提取液本节首页退出本章极性较杂的质大，用强极性溶剂溶解。如极性较大的氯仿、甲醇等溶剂来萃取石油醚等极性较小的抽提液。本节首页退出本章4、沉淀净化法低温下，脂肪和蜡质形成结晶，从溶解度较高的农药提取物中除去。步骤:丙酮提取→80℃→沉淀→净化本节首页退出本章5、化学净化法针对动物样品用强酸、强碱将样品基体消解掉。留下农药母体并净化，应用对象：有机氯农药三、浓缩和富集本节首页退出本章目的：使供测定的样品达到仪器能够检测的浓度，或进行溶剂转换。浓缩：通过减少样品溶液中的溶剂或水分而使组分的浓度升高。富集：利用液-固萃取的方法浓缩某种组分。本节首页退出本章1、注意事项（1）、农药损失（2）、样品污染本节首页退出本章2、浓缩和富集方法方法（1）减压蒸馏：旋转蒸发器（2）气流吹蒸：空气或氮气（3）K-D浓缩器浓缩（4）真空离心浓缩法（1）旋转蒸发仪本节首页退出本章包括旋转烧瓶、冷凝器、溶剂接收瓶、真空设备、加热源等。溶剂可以回收。溶剂分子式常压条件时沸点密度g/cm340℃下沸腾时压力mbar）丙酮C3H6O560.790556苯C6H6800.877236甲苯C7H81110.86777氯仿CHCl3621.483474正己烷C6H14690.660335环己烷C6H12810.779235醋酸C2H4O21181.04944乙醇C2H6O790.789175乙酸乙酯C4H8O2770.900240甲醇CH4O650.791337乙醚C4H10O350.714-水H2O1001.00072（2）气流吹蒸法本节首页退出本章利用空气或氮气流将溶剂带出样品，一般在加热条件下进行。用于少量液体的浓缩，蒸汽压较高的组分易损失。氮吹仪的注意事项本节首页退出本章①不能用于燃点低于100℃的物质②氮气、氧气纯度高于99%③不能用于酸、碱物质的浓缩④酸性用碳酸氢钠溶解中和⑤一天一换水浴的水第五节超临界萃取技术等一、超临界萃取技术二、微波萃取技术三、超声波辅助萃取本节首页退出本章四、衍生化技术五、生物大分子的细胞破碎与蛋白质的去除一、超临界萃取技术本节首页退出本章临界温度：32℃一、超临界萃取技术

本节首页退出本章1、三相点和临界点本节首页退出本章临界点：液、气两相呈平衡状态的点。临界温度：在临界点时的温度。临界压力：在临界点时的压力。2、超临界流体

本节首页退出本章物体处于其临界温度和临界压力以上时的状态。气体：粘稠度、表面张力低，溶解能力强，萃取功能高。压力↑，溶解能力↑。液体：体积小。流体名称分子式临界压力(bar)临界温度(℃)临界密度(g/cm3)二氧化碳CO272.931.20.433水H2O217.6374.20.332氨NH3112.5132.40.235乙烷C2H648.132.20.203氧化二氮N2O71.736.50.4503、超临界流体的性质4、特点本节首页退出本章⑴在35～40℃下提取⑵干净的提取方法⑶CO2是一种不活泼的气体。⑷循环使用，降低成本。⑸参数可以调节流动相二、微波萃取本节首页退出本章微波金属水分二、微波萃取本节首页退出本章二、微波萃取本节首页退出本章1、微波本节首页退出本章频率：300—300000MHz的电磁波。穿透：玻璃、塑料、陶瓷等绝缘体。当微波作用于水和酸性物质时，将被极性分子所吸收，因而物质很快被加热。2、工作原理本节首页退出本章吸收微波→细胞内部温度↑，→细胞内部压力超过细胞壁膨胀承受能力→细胞破裂→有效成分自由流出。本节首页退出本章3、影响因素㈠萃取温度的影响㈡萃取溶剂的影响㈢样品杯：聚四氟乙烯本节首页退出本章三、超声波辅助萃取能量→外部向内部→传递。超声波使溶液形成气泡（空化效应）→爆裂→温度和压力↑，→增强化学反应能力。本节首页退出本章三、超声波辅助萃取优点：价廉快速，简便安全，批量处理样品。四、衍生化技术本节首页退出本章化学反应→定量生成→适于分析。1、衍生化的目的本节首页退出本章①灵敏度与选择性②改善色谱分离：挥发性、降低与色谱材料的相互作用③理化稳定性2、分类本节首页退出本章柱前衍生化：为了分离柱后衍生化：为了检测3、气相色谱的衍生化本节首页退出本章（1）硅烷化衍生化方法（2）酯化衍生化方法（3）卤化衍生化方法（4）酚化衍生化方法方法（1）、硅烷化衍生化方法本节首页退出本章利用醇，酚，酸，胺等与硅烷化试剂反应，形成挥发性的硅烷衍生物R3Si—X+H—R`R3Si—R`+H—X（2）酯化衍生化方法本节首页退出本章大多数有机酸挥发性、热稳定性差。在GC分析之前衍生为相应的酯。①甲醇法②重氮甲烷法③三氟乙酸配法①甲醇法本节首页退出本章甲醇法有机酸与甲醇在催化剂的存在下加热，可以发生酯化反应，生成有机酸的甲酯RCOOH+CH3OH催化剂RCOOCH3+H2O△②重氮甲烷法本节首页退出本章与有机酸反应，生成有机酸的甲酯，重氮甲烷不稳定，有爆炸性，有毒。RCOOH+CH2N2RCOOCH3+N2（3）、卤化衍生化方法本节首页退出本章引入卤原子→ECD检测器→也改善挥发性和稳定性。

卤素的作用是加成或取代

本节首页退出本章4、液相色谱的衍生化1.紫外衍生化反应2．荧光衍生化反应3．电化学衍生化反应本节首页退出本章（1）紫外衍生化反应苯甲酰氯+胺、醇、酚→苯甲酸酯类衍生物（２００～３６０ｎｍ）

苯甲酰化反应本节首页退出本章（2）荧光衍生化反应在目标化合物上接上能发出荧光的生色基团，如荧光素。本节首页退出本章5、制备衍生物的反应罐瓶五、生物大分子的细胞破碎与蛋白质的去除本节首页退出本章（一）、生物样品植物：营养成分、农药残留等动物：体内的药物及代谢产物、糖类、维生素、氨基酸等微生物：待测物的位置本节首页退出本章体液或细胞外：采用萃取方法。也可将干扰组分（如蛋白质、DNA、多糖等等）沉淀除去。生物细胞内：首先将细胞破碎，再采用萃取或沉淀等方法。本节首页退出本章（二）、细胞的破碎目的：就是为了破坏细胞的外壳，使细胞内含物有效地释放出来，获得有效的提取。本节首页退出本章1、细胞的破碎方法①组织较柔软：匀浆器研磨②组织较韧：铰碎→匀浆③纤维组织：捣碎器破碎或加砂研磨。④微生物坚韧的细胞壁：用自溶、冷热交替、加砂研磨、超声波和加压处理。1、细胞的破碎方法本节首页退出本章2、机械法（机械切力）①高速组织捣碎机：20000r／min。对象：动植物组织②匀浆器：铰碎组织。对生物大分子破坏较少。③研磨：玻璃砂。本节首页退出本章3、物理法（物理作用）①反复冻融法：-15～-20℃。②冷热交替法：90℃维持数分钟，立即置于冰浴中冷却。③超声波处理法：用于微生物。④加压破碎法：加气压或水压，可使90％以上细胞被压碎。本节首页退出本章4、化学及生物化学法（化学试剂或酶）①自溶法：在一定条件（pH、温度），利用自身的酶系将细胞破坏。②溶菌酶处理：具有专一地破坏细菌细胞壁的功能。本节首页退出本章Antifungalactivity例：溶菌酶处理本节首页退出本章（三）、蛋白质的去除目的：蛋白质的存在，常常严重干扰分析1、加热法2、盐析法3、膜分离法4、高速离心5、有机溶剂沉淀法本节首页退出本章1、加热法欲测组分热稳定性好时采用。加热到90℃。蛋白沉淀后可用离心或过滤除去，能除去热变性蛋白。本节首页退出本章2、盐析法原理：利用不同蛋白质在高浓度的盐溶液中溶解度不同程度的降低来沉淀除去蛋白质。在低盐浓度下，蛋白质溶解度随着盐浓度升高而增加，称为盐溶作用。当盐浓度不断升高时，不同蛋白质的溶解度又以不同程度下降，并先后析出沉淀，称为盐析作用。本节首页退出本章3、膜分离法超滤：靠薄膜两侧压力差作为推动力来分离不同分子量的物质。将欲测小分子化合物和大分子蛋白质分离。本节首页退出本章4、高速离心物质沉降系数、质量、浮力因子等不同，用离心力使物质分离、浓缩、提纯的方法。小中大159一、超临界萃取技术

本节首页退出本章160二、微波萃取本节首页退出本章微波金属水分161本节首页退出本章三、超声波辅助萃取能量→外部向内部→传递。超声波使溶液形成气泡（空化效应）→爆裂→温度和压力↑，→增强化学反应能力。162四、衍生化技术本节首页退出本章化学反应→定量生成→适于分析。163五、生物大分子的细胞破碎与蛋白质的去除本节首页退出本章（一）、生物样品植物：营养成分、农药残留等动物：体内的药物及代谢产物、糖类、维生素、氨基酸等微生物：164待测物的位置本节首页退出本章体液或细胞外：采用萃取方法。也可将干扰组分（如蛋白质、DNA、多糖等等）沉淀除去。生物细胞内：首先将细胞破碎，再采用萃取或沉淀等方法。165（二）、细胞的破碎166本节首页退出本章（二）、细胞的破碎目的：就是为了破坏细胞的外壳，使细胞内含物有效地释放出来，获得有效的提取。167本节首页退出本章1、细胞的破碎方法168本节首页退出本章1、细胞的破碎方法1691、细胞的破碎方法170本节首页退出本章2、物理法（物理作用）①反复冻融法：－15～－20℃。②冷热交替法：90℃（数分钟）→冷却。③超声波处理法：用于微生物。④加压破碎法：171本节首页退出本章3、化学及生物化学法（化学试剂或酶）①自溶法：在一定条件（pH、温度），利用自身的酶系将细胞破坏。②溶菌酶处理：具有专一地破坏细菌细胞壁的功能。172本节首页退出本章Antifungalactivity例：溶菌酶处理173本节首页退出本章（三）、蛋白质的去除目的：蛋白质的存在，常常严重干扰分析1、加热法2、盐析法3、膜分离法4、高速离心5、有机溶剂沉淀法174本节首页退出本章1、加热法90℃→离心或过滤→除去热变性蛋白。175本节首页退出本章2、盐析法原理：利用不同蛋白质在高浓度的盐溶液中溶解度不同程度的降低来沉淀除去蛋白质。盐浓度蛋白质溶解度盐溶作用盐析作用176本节首页退出本章3、膜分离法超滤：靠薄膜两侧压力差分离小分子化合物大分子蛋白质177本节首页退出本章4、高速离心靠物质沉降系数、质量、浮力因子等不同进行分离小中大178六、净化（纯化）本节首页退出本章样品经萃取→被测成分→萃取液→含有杂质→干扰测定。※萃取液→适当处理→除去杂质→纯化。179（一）干扰杂质的性质本节首页退出本章1、脂类：脂肪酸、醇→溶于有机溶剂2、色素：溶于极性较强的溶剂3、其他：硫→ECD、FPD

塑料管→有机溶剂180（二）、净化方法本节首页退出本章181本节首页退出本章1、样品过滤过滤：除去颗粒物用0.45或

0.22μm滤膜滤膜有机滤膜：白色、黄色无机滤膜：绿色、蓝色1821832、柱层析法本节首页退出本章184柱层柱类型本节首页退出本章①弗罗里硅土柱：乙醚/石油醚②氧化铝柱：乙醚/正己烷③硅胶柱：④活性碳柱：乙腈/苯185本节首页退出本章3、液-液分配法186①具备以下条件

本节首页退出本章⑴对被测物（农药、兽药、真菌毒素等）有较大的溶解性；⑵对色素、脂肪、蜡质等杂质有较小的溶解性。187②萃取液与提取液本节首页退出本章极性较大的杂质，用强极性溶剂溶解。如极性较大的氯仿、甲醇等溶剂来萃取石油醚等极性较小的抽提液。188本节首页退出本章4、沉淀净化法低温下，脂肪和蜡质形成结晶。步骤:丙酮提取→80℃→沉淀→净化189本节首页退出本章5、化学净化法针对动物样品用强酸、强碱将样品基体消解掉。留下农药母体并净化，应用对象：有机氯农药190三、浓缩和富集本节首页退出本章目的：使供测定的样品达到仪器能够检测的浓度，或进行溶剂转换。浓缩：通过减少样品溶液中的溶剂或水分而使组分的浓度升高。富集：利用液-固萃取的方法浓缩某种组分。191本节首页退出本章1、注意事项（1）、农药损失（2）、样品污染192本节首页退出本章2、浓缩和富集方法方法（1）减压蒸馏：旋转蒸发器（2）气流吹蒸：空气或氮气（3）K-D浓缩器浓缩（4）真空离心浓缩法193（1）旋转蒸发仪本节首页退出本章旋转烧瓶冷凝器溶剂接收瓶真空设备加热源194溶剂分子式常压条件时沸点密度g/cm340℃下沸腾时压力mbar）丙酮C3H6O560.790556苯C6H6800.877236甲苯C7H81110.86777氯仿CHCl3621.483474正己烷C6H14690.660335环己烷C6H12810.779235醋酸C2H4O21181.04944乙醇C2H6O790.789175乙酸乙酯C4H8O2770.900240甲醇CH4O650.791337乙醚C4H10O350.714-水H2O1001.00072195（2）气流吹蒸法本节首页退出本章空气、氮气、浓缩、蒸汽压196氮吹仪的注意事项本节首页退出本章①不能用于燃点低于100℃的物质②氮气、氧气纯度高于99%③不能用于酸、碱物质的浓缩④酸性用碳酸氢钠溶解中和⑤一天一换水浴的水第一节实验室的基础条件本节首页退出本章一、试剂要求本节首页退出本章（一）、纯水制备蒸馏水：水与杂质的沸点不同，难免有痕量的金属离子。去离子水：交换树脂获得的纯水称离子交换或。本节首页退出本章各种水的比较特纯水＞1.8x10799.99999水的种类电阻率Ω·cm用途普通纯水5x105，常量分析优质纯水＞1x106AA本节首页退出本章（二）、试剂特级光（色）谱纯S.P白色级别名称代号标志一级优级纯GuarantteReagent绿色二级分析纯AnalysisReagent红色三级化学纯ChemicalReagent蓝色本节首页退出本章1、试剂的鉴别图片本节首页退出本章2、试剂的净化时间(minors)响应信号(mv)要求：浓缩进样5ul，杂峰高度不应超过1mm。本节首页退出本章（1）、氧化铝（SPE用）550℃→4h130℃→5h本节首页退出本章（2）、活性碳活性碳→农盐酸→1h（加热煮沸）→中性→烘干。600℃→2h105℃→4h本节首页退出本章（3）、石油醚沸程：60~90℃密度：0.65净化方法：①吸附→蒸馏②回流→蒸馏③分液（漏斗）本节首页退出本章（4）、丙酮沸点：55~57℃密度：0.78净化方法：脱水→棕色瓶本节首页退出本章（5）、乙腈沸点：81.6℃密度：0.78惰性液体净化方法：无水碳酸钠→高锰酸钾→蒸馏本节首页退出本章二、环境条件本节首页退出本章三、人员要求①学历②专业知识背景（background）③敬业能力④操作能力⑤勤快、不耻下问本节首页退出本章四、管理制度①样品管理②试剂管理③仪器管理④数据管理⑤检验报告管理本节首页退出本章第二节农药标准物质StandardsampleStandardmaterialStandardreferencematerialCertifiedreferencematerial本节首页退出本章一、分级一级：均匀性、稳定性、朔源性二级：满足一般测量需要（日常）共同点：有证标准物质本节首页退出本章一、分级农药纯品：反映化合物特性的高纯度物质。与标准物质的关系：农药标准物质的原材料。本节首页退出本章二、基本要求①含量②物力常数③溶液④GC/HPLC鉴定本节首页退出本章三、标签名称：BHC中文名：六六六用途：杀虫剂别名：Hexakor分子量：288分子式：本节首页退出本章第三节分析方法的可靠性的确认选择检测标准的原则国家标准地方标准行业标准企业标准本节首页退出本章一、方法的灵敏度灵敏度：单位浓度（质量）/相应量最小检出量：3×空白的背景信号最低测定浓度：10×空白的背景信号未检出：＜LOD本节首页退出本章准确度：测定值与真值（假定）之间符合程度的度量二、方法的准确度本节首页退出本章

回收率实验准确度评价方法100801ug/g？本节首页退出本章精密度：测定值之间的一致程度三、方法的精密度平行性重复性再现性准确度和精密度1.准确度和精密度——分析结果的衡量指标。

(

1)准确度──分析结果与真实值的接近程度准确度的高低用误差的大小来衡量；误差一般用绝对误差和相对误差来表示。(2)精密度──几次平衡测定结果相互接近程度精密度的高低用偏差来衡量，偏差是指个别测定值与平均值之间的差值。(3)两者的关系精密度是保证准确度的先决条件；精密度高不一定准确度高；两者的差别主要是由于系统误差的存在。本节首页退出本章第四节农残分析质量控制1、接受日期和有效日期2、污染和干扰3、前处理过程中的损失4、回收率测定和校准本节首页退出本章第五节

结果的表达和数据处理π=3.1415926…….？本节首页退出本章1、结果的记录和取舍(1)有效数据(2)有效数据运用法则

①记录测量数字时：②有效数位确定后：③当被舍弃的第一位等于5时：④当第一位有效数字≥时⑤表示测定结果的精确度时：本节首页退出本章2、真值和平均值①算数平均值②均方根平均值③几何平均值④中位值⑤加权平均值本节首页退出本章3、异常数据的取舍①4σ法

|可疑值–不包括可疑值在内的平均值|≥4σ②2.5σ法

|可疑值–不包括可疑值在内的平均值|≥2.5σ③Q检验法本节首页退出本章4、测定结果的整理①一般处理②可靠性区间的计算③界值判断结果④平均值的实验本节首页退出本章4、测定结果的整理成绩百分比第一节气相色谱仪一、气路系统（一）、气源与载气种类本节首页退出本章1、惰性（不与样品或固定相反应）2、容易得到并易纯化3、满足检测器要求常用载气：N2

H2

He

Ar辅助气：氧气或空气（二）、气体的净化本节首页退出本章1、气体不纯的不良影响①样品失真或消失②柱失效③对固定液保留特性的影响④对检测器的影响（二）、气体的净化本节首页退出本章氧气捕集器：氧气破坏色谱柱，降低ECD

检测器的功能。（三）、气体管路本节首页退出本章①专用铜管或不锈钢管。②塑料管会渗透O2和其它污染物。③管子使用前先用溶剂冲洗，载气吹干。④每用完3瓶气，应更换过滤器。⑤每隔一定时间，对所有外加接头检漏。二、样品的进样系统与进样技术本节首页退出本章作用:使样品以一种可重复可再现的方式契入到气相色谱柱中。被引入的样品应具有代表性，除特殊要求外样品引入过程不应发生任何化学反应。（一）、进样方式本节首页退出本章针进样：手动进样；自动进样阀进样：气体进样阀；液体进样阀其它进样装置：吹扫捕集；顶空1、针进样应使样品象一个塞子一样地被进样。为了得到重复性好的，尖锐的峰形，进样动作应迅速且稳定。2、针进样技术比较3、进样垫颜色耐高温性使用次数灰色

耐高温，低流失

400℃/250次白色

耐高温，低流失350℃/250次绿色

耐高温、耐用

350℃/150次红色

耐高温，易老化400℃/150次注：以岛津公司产品为例知识窗色谱柱进样垫通用技术使用轻触点--不能过紧。保持清洁。避免污染--指纹、油脂等。检查使用的密封垫是否有裂纹、碎片、或其它的损坏。知识窗进样垫相关问题应在推荐温度范围内避免：泄漏、降解、样品丢失、出现鬼峰减少或者避免鬼峰的出现：进样口带有隔垫吹扫功能。应使用耐高温的相应进样垫。作用：可重复，可再现的方式契入色谱柱中。被引入的样品应具有代表性，除特殊要求外样品引入过程不应发生任何化学反应。本节首页退出本章（二）、进样口类型进样口类型气路控制本节首页退出本章分流/不分流进样口EPC与non-EPC隔垫吹扫填充进样口EPC与non-EPC冷柱头进样口只有EPC程序升温汽化进样口只有EPC挥发进样口只有EPC分流/不分流进样口

本节首页退出本章分流方式是特为毛细管柱GC设计的样品引入方式1、分流进样①进样前

防止样品歧视现象②进样时刻

③样品与载气混合为了保证分流比的概念真实有效，样品（溶剂+分析物）必须与载气充分混合，形成一个均匀的混合物。这一混合物的一小部分将会从进样口的底部进入色谱柱，而大部分的混合物则会从分流出口流出。④衬管过载如果进样量过大，溶剂会膨胀为很大的体积，致使进样口衬管过载。其结果必将导致样品从吹扫出口流出而造成样品损失，同时也会造成载气输入管路的污染。知识窗本节首页退出本章1、衬管过载的后果其结果必将导致样品从吹扫出口流出而造成样品损失，同时也会造成载气输入管路的污染。知识窗本节首页退出本章2、溶剂膨胀计算公式微升=22400×A×B×CA=密度/分子量B=15/(15+柱前压psi）C=（进样口温度+273）/273知识窗本节首页退出本章3、溶剂膨胀计算例子知识窗4、常用溶剂的膨胀率进样口温度为250℃，柱前压为13psi本节首页退出本章⑤分流比计算分流出口流量=？⑥总流量本节首页退出本章隔垫：1～3ml或3～

6ml分流流量：分流流量/柱流量如100：1或50：1柱流量：受柱前压控制，流量与压力在一定范围内呈正相关关系⑦如何实现分流2、不分流进样系统

①进样前

进样阀关闭关闭分流阀使气流不能从衬管外逃出。由于柱前压并未改变，所以柱流量将会保持恒定。原来吹过衬管的气流现在必为通过隔垫吹扫管路流出。②

进样时刻

分流阀关闭样品会扩展到进样口的底部。使用250uL的衬管以及柱流量，很容易使衬管过载，特别是当进样体积大于1uL且使用非烃类溶剂时。③

样品的汽化

分流阀关闭由于样品组分与溶剂的扩散率的不同（更小体积/低分子量），组分在衬管中分层。与载气混合成为低临界状态，这是因为保存时间长且几乎所有的样品都经过衬管而进入到色谱柱中了。通过使用某一种“捕集”技术可将样品聚集在柱头。④

样品的注入

分流阀关闭到此被分析物转移入柱已经完成。仍有一些溶剂留在衬管之中。如果依然保持分流阀关闭，则余下的所有溶剂都转移入柱子中，那么溶剂色谱峰将会严重拖尾。④

样品的注入

分流阀关闭将分流阀从关闭位置转为开启状态以将留在衬管中的剩余溶剂吹出衬管。这个过程将会有效地减小溶剂峰的拖尾，以保证先流出峰的定量更加真实可信。⑤

样品注完

分流阀开启衬管的体积太小以及通过衬管的流量太低可能会导致使用非烃类溶剂的样品进样量过大。对于不分流进样来说，进样量过大会造成定量结果的准确性与精确性双方面的明显误差。⑥

样品过载

分流阀关闭⑦溶剂效应：设定柱温的初始温度低于溶剂的沸点，致使溶剂在柱关上冷凝，相当于膨胀了固定相并捕集分析物。本节首页退出本章样品进入色谱柱后，减少分流出口的载气流量以节约载气。柱前压和柱流速仍保持不变，只有分流出口的流量减少。可用于分流和不分流方式。节省载气启动的时间应选在样品进入色谱柱后。（三）、节省载气装置知识窗本节首页退出本章尾吹毛细管柱内流动相流速低，流量小，组分会因柱后死体积突然增加而发生严重的纵向扩散，从而导致峰形展宽，有可能使在柱中以分离的组分在柱后再次重叠，影响分离。也可在使用FID时受阻于引入的H2压力而出柱困难。增加尾吹气将改善这一状况。（四）、分流平板此部件须非常清洁1、在溶剂中超声处理-常用样品或清洗剂2、使用金属纱布擦磨清洁-高光洁度可提高其功效-不要干擦3、用溶剂清洗

-避开氯化溶剂

-先惰性洗涤-甲苯

-再用醇类清洗-甲醇（五）、毛细管衬管未去活性的衬管的清洗1)移去玻璃毛2)在溶剂或酸液中超声振荡3)清洗且干燥4)更换去活性的玻璃毛5)去活性-硅烷化6)干燥7)精心维护衬管的内表面避免划伤

毛细管衬管结构图@此部件须非常清洁本节首页退出本章（六）、进样口系统中注意点1、进样口常见问题非代表性样品、堵塞、温度不正确、污染、泄漏2、操作条件的选择1)汽化室温度的选择2)进样垫的材料与处理3)进样量本节首页退出本章3、进样口的日常维护更换隔垫清洗或更换进样针进行泄漏测试和维修清洗或更换衬管/内插件清洗或更换分流平板和金属垫片(SSI)本节首页退出本章4、自动进样器日常维护

清洗/更换进样针清洗掉针引导器和附近表面上的灰尘和污染物确保样品盘安装螺丝固定好了保证所有的电缆线都连接良好三、分离系统分离的过程示意图（一）、色谱柱的类型本节首页退出本章1、色谱柱类型的比较本节首页退出本章a、柱效和柱长是10倍b、理论塔板数是填充柱的100倍c、柱负荷量低于填充柱①柱的性能本节首页退出本章②工作压力本节首页退出本章③常用的柱选择方法a、欲分离样品b、首先试用手边现有的柱子c、向同事请教d、从文献中查到相近应用的方法e、如果不是太清楚，先使用一个非极性柱,如HP-1或HP-52、柱分离指标柱效:

色谱柱形成尖锐峰的能力分离度:

色谱柱将两个峰彼此分开的能力（1）、如何提高柱效本节首页退出本章①使用内径更小的柱子。②减小进样量。③选用更长的柱子。④使用程序升温。（2）分离度计算及提高方法本节首页退出本章3、色谱柱概论①柱子切勿划伤。高温加热→从划痕处断裂。②长期不用→堵上柱子两端→不被污染。*当使用毛细管柱时，一定注意保护眼睛。

（1）、保存

本节首页退出本章（2）、色谱柱老化目的：预先老化以除去柱中残留的溶剂。①老化对象-新买的柱子。-长期没用过的柱子。-操作条件改变时。-分析对象改变时。本节首页退出本章②毛细管柱老化原则-温度足够高以去除不挥发物质。-温度足够低以保护柱子，防止柱流失。-老化温度越低老化时间应越长。本节首页退出本章③毛细管柱老化方法a、柱只接进样口，不接检测器，把检测器口堵住,检测器不在工作状态。b、并确证有载气通过柱子。c、设定老化温度、流量、时间。d、可设炉温程序升温，以使较好老化。e、需几小时或几十小时，不要通H2气。本节首页退出本章④危害色谱柱的因素a、不分流进样方式使柱前1-2米的固定相移位。b、载气或样品质量太差。c、固定相容易被载气中的氧气所氧化。d、分析高水分样品时会缩短使用寿命。（二）、柱温设置本节首页退出本章1、柱温设置（1）、恒温操作升温速率设为“0”。特点：峰展宽，保留时间延长本节首页退出本章1、操作者的耐心（保留时间长）。2、固定相的最低温度极限。A、最低操作温度决定因素本节首页退出本章1、固定相能承受的最高温度。2、样品的稳定性。3、第一流出组分的保留时间。B、最高操作温度决定因素（2）、程序升温三阶程序升温本节首页退出本章组分之间有较宽的沸点范围(>100°C)。减少分析时间并使峰变窄。增加柱流失，引起基线漂移。①程序升温特点a、升温方式b、初始温度c、终止温度d、升温速率e、载气流速本节首页退出本章②操作条件的选择本节首页退出本章③程序升温与恒温操作的比较正常运行空白运行柱补偿运行④柱补偿本节首页退出本章（三）、柱修复1、把距进样口末端的柱子割去一到二米。2、将柱子再老化过夜。3、淋洗柱子。这是一个比较极端的手段。一般，只有50%的柱可以通过淋洗来修复。固定相（交联的硅氧相）允许我们使用溶剂淋洗柱来溶掉或移走柱上的沉积物，这样可以避免峰拖尾。本节首页退出本章淋洗前后的比较（四）、柱的安装不分流正确装法不正确装法分流/不分流装法（五）、柱的安装四、检测系统本节首页退出本章已学过的检测器（一）、检测器评价指标本节首页退出本章1、噪声2、漂移3、灵敏度4、线性范围与动态范围5、最小检测量（一）、检测器评价指标本节首页退出本章1、噪声(Noise；N)：仪器、其他操作条件使基线在短时间内发生起伏的信号2、漂移(Drift；d)：使基线在一定时间内对原点产生的偏离。3、灵敏度（应答值）本节首页退出本章量变化时，该物质响应值的变化率。4、线性范围本节首页退出本章被测物质的量与检测器的信号成线形关系的范围。本节首页退出本章(二)、FID（FlameIonizationDetector)当样品和载气进入火焰（2100℃）时，发生化学电离（等碳效应）。C6H66CH·（自由基）2CH·+O2吸热2CHO++e-（极化极）1、工作原理2、对FID没有响应的物质本节首页退出本章3、响应规律4、检测器组件5、常见问题检测器关闭：火焰无法点燃；检查是否凝聚(1)不出峰检测器短路：检查检测器温度(2)不出峰火焰熄灭：检查流量；关闭辅助；气重新点火(3)进样初期出峰检测器脏：清洗收集极、喷嘴(4)出杂峰本节首页退出本章（三）、NPD（Nitrogen-PhosphorusDetector）铷盐珠。氢气/空气较低，碳氢化合物无法电离，铷珠表面的碱盐离子促进有机氮或有机磷化合物的电离。FIDNPD1、热电离源：非挥发性的硅酸铷。2、对喷嘴的极性是可变的。3、氢气：“冷氢焰”，几ml／min。本节首页退出本章工作原理：富氢火焰中燃烧时，P，S被激发而发射特征波长的光谱。1、S化合物：蓝紫色光（394nm）。2、P化合物：绿色光（526nm）（四）、FPD（FlamePhotometricDetector)滤光片光电倍增管火焰喷嘴1、火焰光度检测器本节首页退出本章2、气流比本节首页退出本章（五）、ECD（ElectronCaptureDetector)放射源使载气电离，一定的极化电压加在两极上，由阳极吸收电子，形成稳定的基流。N2β射线N2++e-阳极（基流）1、原理本节首页退出本章电负性组分→检测器→捕获电子→释放能量E→电子数减小→基流下降→产生负信号。AB+e-AB-+E

（俘获电子）1、原理1、原理2、ECD结构（六）、检测器比较（1）本节首页退出本章（六）、检测器比较（2）本节首页退出本章（八）气相色谱仪使用中的问题A.色谱柱是否与进样口和检测器正确地连接B.进样口是否漏更换进样垫检查进样衬管是否损坏C.柱是否与进样口连接？?D.FID点火了吗？FID高压静电正常吗？E.柱中是否有载气无峰或峰很小本节首页退出本章五、使用中的问题（一）、基线不好的问题1.检查气源的纯度解决：更换气源；加装气体净化2.检查气路系统是否被污染解决：清洗被污染处本节首页退出本章（二）、基线漂移正确地使用高纯度的载气色谱柱老化进样口和色谱柱的最高使用温度不能超过该柱所规定的最高温度极限本节首页退出本章（三）、基线位置突然变化偏离偏离或漂移是由于下列原因产生的温度；流速检查体系是否有漏主要检查进样口部分前次色谱过程中的残余的低挥发性流出物知识窗拖尾因子ABExcellentt=1.0-1.05Acceptablet=1.2Unacceptablet=2Awfult=4拖尾因子（1）拖尾因子＞1.2拖尾正常前伸前伸峰拖尾因子＜0.9拖尾因子（2）本节首页退出本章（四）、峰型不好（拖尾）进样口或柱温太低试；程序升温柱过载：减少进样量或将样品稀释10倍试一下较厚液膜的其他色谱柱前伸峰和拖尾峰均说明是非线形的分配——即色谱柱与样品不匹配本节首页退出本章（五）、峰型不好减少进样量（柱过载）小体积进样；增加分流比可能是几个未分离的色谱峰将柱温降低20℃再进样本节首页退出本章（六）、峰型很差合并的峰（未分离的峰）将柱温降低20-30℃ 将进样口温度增加20-30℃检查样品与溶剂的选择是否正确峰顶分叉（双肩峰）本节首页退出本章（七）、附加峰（1）进样垫流失进样口污染残留在进样口或衬管中的物质载气不纯柱头污染本节首页退出本章（七）、附加峰（2）1、样品在进样口停留的时间太长2、样品组分稳定性差3、进样口温度过热，可以导致样品组分的降解本节首页退出本章（八）、丢失色谱峰进样口温度太低高沸点的化合物不能很快地气化进样口温度太高许多挥发性的组分在进样口降解进样口被污染本节首页退出本章（九）、色谱柱安装位置可能引起的问题色谱柱到检测器安装位置不正确;使其不能到达FID喷嘴（针头到柱保留1-2厘米）色谱柱到进样口安装位置不正确.使其不能到达进样口色谱柱到进样口及检测器的位置安装正确淋洗液色谱柱检测器数据处理第二节液相色谱仪本节首页退出本章一、GC与HPLC的比较本节首页退出本章二、流动相的基本要求保持色谱柱的稳定性，因而与固定相不互溶（延长柱寿命）不发生不可逆吸附有合适的pH值化学惰性—不与样品及固定相发生反应。本节首页退出本章UV：在紫外线区“透明”

示差：折射率与溶剂有较大差异电化学检测器：电惰性。对样品有很强的溶解力。清洗与更换方便低价、毒性小、纯度高。1、适用于所选的检测器本节首页退出本章2.流动相的选择有合适的理化性质（沸点、粘度等，尽可能小一些）合适的强度（分配系数要合适，简单样品可大，复杂样品要小）混合溶剂（有等度和梯度之分）极性合适（需根据溶剂的性质而定）本节首页退出本章3、流动相的物理参数溶解度参数（溶剂极性的量度）：与样品分配比有关，要适中。沸点：要低些，便于回收分离样品。粘度：柱效与粘度成反比，要求早在0.4～0.5cP。混合溶剂一般能降低粘度。本节首页退出本章4、混合溶剂可靠改变溶剂组成来调节溶剂的强度等，以适合不容的样品。等度淋洗：淋洗过程中溶剂组成不变，强度恒定，k值在10以内可得较好的分离。梯度淋洗：淋洗过程中溶剂组成随时间而变，一般使强度按程序增加，使组分在最合适的k值处洗出。本节首页退出本章5、梯度淋洗使用于极性范围宽的混合物的分离。优点：提供限单位时间内的最大分离度。提高出峰的对称性减小峰宽降低检测本节首页退出本章问题：要用高纯试剂（贵）。可能在固定相上产生杂质富集，需再生处理（尤其是极性柱），可用10～

30倍柱体积的溶剂淋洗。5、梯度淋洗本节首页退出本章三、液相色谱柱的保养柱的稳定性与固定相类型及使用情况有关。为了保持柱效、柱容量及渗透性，必须进行仔细地保养。是否会由于柱外效应，使分析柱的柱效明显下降？本节首页退出本章（一）、防止堵塞1、必须将流动相仔细地蒸馏、过滤。在流动相贮槽与柱之间，使用0.5μm孔径的过滤器。水往往是一个重要的污染源。在水溶液流动相（如缓冲液）中，细菌容易生长，可能堵塞筛板。防止细菌生长的办法是加入抑制剂，如0.01%NaNO3。显然，抑制剂不能干扰分离和测定。本节首页退出本章（一）、防止堵塞2、在恒定压力下，发现流量减少，柱子可能部分堵塞。堵塞最容易发生在极窄的入口接头处以及入口、出口筛板处。堵塞后需要仔细拆洗，清除堵塞物，但必须防止较强的机械震动，防止用热手接触柱子，以扰动柱内的固定相层，使柱效发生变化。本节首页退出本章5．要防止反冲（流动相逆向流动），否则使固定相层位移，柱效下降。6．柱子两端用金属螺帽封闭，保存在纯净的有机溶剂中。应该将柱子保存在以下pH范围内的水溶液流动相中：2<pH<8.5。为了长期保存，最好用纯有机溶剂（如甲醇）清洗柱子。7．一定要防止柱子干涸，特别是硬胶柱。（一）、防止堵塞本节首页退出本章二、液相色谱柱的保养8．使用卫柱(GuardColumn,亦称预柱)。连续注射含有强滞留(不被洗脱)组分的样品，将使柱效下降，保留值改变，选择性变坏，柱寿命缩短。为了延长柱寿命，在进样阀和分析柱之间加上卫柱。本节首页退出本章二、液相色谱柱的保养卫柱较短(5~10cm)，固定相与分析柱类似。其作用是吸着强滞留的组分，防止对分析柱的污染，保持分析柱性能稳定。实验表明，只要卫柱与高效、小粒度分析柱联用，除了使k’为零的组分的塔板数大大减少外，对k’值较大的组分，其柱效下降很少。本节首页退出本章三、检测器本节首页退出本章三、检测器紫外检测器UV-DETECTOR本节首页退出本章

二极管阵列检测器DIODEARRAYDETECTOR本节首页退出本章四、液相色谱仪的使用1、流动相（2）溶剂要与检测器匹配。对于紫外吸收检测器，应注意选用检测器波长比溶剂的紫外截止波长要长。所谓溶剂的紫外截止波长指当小