第一章 微生物技术 复习课件

第一章微生物技术

复习课件第1节

培养基对微生物的选择作用1.能说出培养基的类型、用途和基本成分。2.比较消毒和灭菌的区别。3.举例说明常用的消毒与灭菌的方法。4.能记住培养基的配制方法。5.研究培养基对微生物的选择作用。一二一、培养基的制备1.培养基（1）概念

培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴定和保存各种微生物。（2）成分

一般包括水分、碳源、氮源、微量元素和无机盐等。（3）种类

培养基按物理状态可分为液体培养基和固体培养基。后者常用琼脂做凝固剂。一二2.培养基的配制和灭菌（1）培养基的制备包括配制和灭菌两大步骤。（2）配制关键：准确称量、调准pH、规范制作棉塞、彻底灭菌。（3）主要制作流程：称量→溶化→调pH→分装→加塞和包扎→灭菌→摆斜面及倒平板。（4）由于配制培养基的各类营养物质和容器等含有多种不同的微生物，配制好的培养基必须立即灭菌，及时杀灭培养基中的微生物，同时防止微生物大量繁殖造成的培养基营养成分的改变。（5）常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌法。通过高压、高温蒸汽使菌体蛋白质凝固变性以达到灭菌的目的。一二思考：

日常生活中的牛奶在进入市场销售前要进行消毒，可采用哪种消毒方法呢?

提示：用巴氏消毒法对牛奶进行消毒，可以杀死牛奶中的微生物，同时使牛奶的营养成分不会被破坏。一二二、培养基对微生物的选择作用1.菌落

微生物通过某种方法接种到适于生长的固体培养基表面上，在适宜的温度下培养一段时间后，单个的菌体或孢子就可以生长繁殖成一个个肉眼可见的细胞群体，称为菌落。2.培养基对微生物的选择作用的原理

不同种微生物对营养要求不一样，通过选择不同的培养基，人为控制培养基的pH、碳源、氮源、渗透压等条件，使选择的培养基利于某类或某种微生物的生长，而不利于其他微生物的生存，可以达到分离、培养不同微生物的目的。

例如，细菌生长需要的氮源高，pH中性或微碱性，因此培养细菌常采用牛肉膏蛋白胨培养基。酵母菌和霉菌生长所需的碳源含量高，pH偏酸性，因此分离真菌常采用马铃薯葡萄糖琼脂培养基。一二3.培养基对微生物的选择作用的意义

在科研和生产实践中具有重要意义，它是分离和纯化不同类型微生物的基础。1.培养基的成分与微生物生长所需的营养2.培养基的类型及其应用3.配制培养基的原则（1）目的要明确（2）营养要协调（3）pH要适宜4.消毒与灭菌的比较

二者的区别：前者去除的是部分微生物，后者去除的是所有微生物。5.三种常用灭菌方法的比较。6.倒平板的注意事项（1）培养基灭菌后，需要冷却到50~60℃后，才能用来倒平板。可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。（2）倒平板前，要将装有培养基的锥形瓶瓶口通过火焰灼烧，以防止瓶口的微生物污染培养基。（3）平板冷凝后，需将平板倒置。平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。（4）倒平板过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，空气中的微生物可能会在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此不要再继续使用这个平板培养微生物。题型一题型二题型三题型四微生物的营养【例题1】下列关于微生物的营养的说法，正确的是（

）A.同一种物质不可能既作碳源又作氮源B.凡是碳源都能提供能量C.除水以外的无机物仅提供无机盐D.无机氮源也可能提供能量

解析：对某些微生物来说，含C、H、O、N的化合物既可以作为碳源，又可以作为氮源。CO2可以作为光能自养微生物的碳源，但不能提供能量。CO2和N2是无机物，也可以分别作为微生物的碳源和氮源。硝化细菌所利用的氮源是无机氮源氨，同时氨也为硝化细菌提供用以化能合成作用的能量。

答案：D题型一题型二题型三题型四易错警示：含C、H、O、N的化合物既可以作为一部分微生物的碳源，又可以作为氮源；有机碳源能提供能量，无机碳源不能提供能量。题型一题型二题型三题型四无菌操作相关技术【例题2】细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理方法，这些方法依次用于杀灭哪些部位的杂菌?（

）A.接种针、手、培养基 B.高压锅、手、接种针C.培养基、手、接种针 D.接种针、手、高压锅

解析：高压蒸汽灭菌锅通常用于培养基的灭菌。用酒精擦拭双手可以进行消毒。火焰灼烧可以迅速彻底地灭菌，适用于微生物的接种工具，如接种针。

答案：C题型一题型二题型三题型四反思领悟：微生物培养过程中的无菌操作包括消毒和灭菌两大类，各自具有不同的方法。应对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒；对用于培养微生物的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。题型一题型二题型三题型四培养基的制备【例题3】下列关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述，错误的是（

）A.操作顺序为称量、溶化、分装、调pH、加塞和包扎、灭菌、摆斜面及倒平板B.将配制的培养基分装入试管或锥形瓶内C.待培养基冷却至50~60℃后，制成斜面或平板后备用D.配制好的培养基必须立即灭菌

解析：制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的操作顺序是称量、溶化、调pH、分装、加塞和包扎、灭菌、摆斜面及倒平板。

答案：A题型一题型二题型三题型四选择培养基的特点与应用【例题4】氯苯化合物是重要的有机化工原料，不易降解，会污染环境。某研究小组依照下列实验方案（图甲）筛选出能高效降解氯苯化合物的微生物SP1菌。培养基配方如下表。题型一题型二题型三题型四（1）配制Ⅱ号固体培养基时，除添加Ⅱ号液体培养基成分外，还应添加1%的

。（2）培养基配制时，灭菌与调pH的先后顺序是

。（3）从用途上来说，Ⅰ号培养基和Ⅱ号培养基分别属于

培养基和

培养基。在Ⅱ号培养基中，为SP1菌提供氮源的成分是

。（4）在营养缺乏或环境恶劣时，SP1的菌体会变成一个圆形的休眠体，这种休眠体被称为

。题型一题型二题型三题型四（5）将SP1菌接种在含不同浓度氯苯的Ⅲ号培养液中培养，得到生长曲线（图乙）。从图乙可知，SP1菌在

的培养条件下最早停止生长，其原因是_______________________________________________________。题型一题型二题型三题型四

解析：（1）固体培养基必须含有适量的琼脂。（2）配制培养基时应先调pH，后灭菌。（3）Ⅰ号培养基是为了获得更多的菌株，属于通用培养基，Ⅱ号培养基是为了选择出SP1菌株，属于选择培养基，Ⅱ号培养基成分中含N物质为硝酸铵，则应由它为SP1菌株提供氮源。（4）在恶劣环境下，一些菌体会形成芽孢休眠体，以抵抗不良环境的影响。（5）SP1菌株以氯苯为碳源，当氯苯耗尽时，菌株因缺少碳源而不能继续生存，故氯苯含量越少，SP1菌株越早停止生长。

答案：（1）琼脂（2）先调pH，后灭菌（3）通用选择硝酸铵（4）芽孢（5）20mg/L氯苯碳源最早耗尽123451.下列叙述错误的是（

）A.微生物学实验一般都要求在无菌条件下进行B.细菌生长只需要氮源C.培养基的配制包括配制和灭菌两大步骤D.不同培养基对微生物的选择作用是分离和纯化不同类型微生物的基础答案：B123452.在微生物培养过程中，需要对培养基等进行灭菌，其标准是（

）A.杀死所有的病原微生物B.杀死所有的微生物C.杀死所有微生物的细胞、芽孢和孢子D.使病原菌不生长答案：C123453.下列有关培养基配制的叙述，正确的是（

）A.任何培养基都必须含有碳源、氮源、矿质元素、水B.碳源和氮源必须具有一定比例，碳元素的含量最多，其次为氮元素C.微生物的生长除受营养因素影响外，还受到温度、pH、氧、渗透压等的影响D.营养物质的浓度越高越好答案：C解析：自养微生物的培养基不需要加碳源，自生固氮菌的培养基不需要加氮源。培养基中碳源和氮源必须具有一定比例，但含量最多的元素是氧。营养物质的浓度并不是越多越好，浓度过高会导致培养物细胞失水。123454.无菌技术常围绕着如何避免杂菌的污染展开，下列常见的无菌技术中，属于灭菌处理的是（

）A.操作者的双手用酒精擦拭B.实验室用紫外线照射C.对接种环进行灼烧处理D.水源用氯气处理答案：C解析：灭菌是用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌法。123455.微生物培养过程中，肉眼鉴别金黄色葡萄球菌和枯草杆菌的重要依据是（

）A.细菌的大小、形状、颜色

B.菌落的大小、形状、颜色C.有无鞭毛

D.培养基的不同答案：B解析：金黄色葡萄球菌的菌落呈黄色，菌落较小，圆形、光滑凸起，而枯草杆菌的菌落表面不光滑，菌落较大，呈白色或略带一些暗黄色，所以可依据菌落的大小、形状、颜色，肉眼鉴别两种细菌，B项正确。由于单个细菌很小，其形状、颜色以及有无鞭毛都无法用肉眼看到，A、C两项错误。培养基也不是鉴别两者的依据，D项错误。第2节微生物的纯培养1.阐明接种方法。2.进行微生物的分离和培养。一二一、纯培养

人们要研究某种微生物的特性，就要从混杂的样品中取得所需的纯种，或者把受污染的菌种重新分离出来，使该微生物处于纯培养状态。也就是说，培养物中所有细胞只是微生物的某一个种或株，它们有着共同的来源，是同一细胞的后代。一二二、微生物的分离与纯化1.基本思路

一般根据微生物对营养物质、pH、氧气等条件的要求不同，供给它们适宜的生活条件，或加入某种抑制剂，造成只利于要分离的微生物生长、不利于其他微生物生长的环境，从而淘汰不需要的微生物，分离得到需要的微生物纯种。2.原理

将待检测微生物样品通过划线或涂布接种在固体培养基上，样品中的每一个细胞或孢子都可以生长繁殖形成单个菌落。将单个菌落接种到斜面培养基上，经培养后，即可得到一个微生物的纯种。3.分离步骤

微生物的分离包括样品稀释、划线或涂布及培养三个步骤。一二4.接种方法

划线或涂布过程包括平板划线分离法和涂布分离法。常用的划线方法有平行划线和连续划线两种。1.平板划线分离法的操作要点（1）在操作第一步、每次划线之前及划线操作结束时都要灼烧接种环。操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到单个菌落；划线结束后灼烧接种环能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境或感染操作者。（2）在灼烧接种环之后，要等其冷却后再进行划线，以免接种环温度太高，杀死菌种。（3）在进行第二次以及其后的划线操作时，要从上一次划线的末端开始划线。划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。2.涂布分离法的操作要点（1）稀释操作时，注意每次都要使菌液与水充分混匀。操作时，试管口和移液管应在距离火焰1~2cm处。（2）涂布平板时的所有操作都应在火焰附近进行，同时酒精灯与培养皿的距离要合适，吸管头不要接触任何其他物体等。（3）涂布时可转动培养皿，使涂布均匀。（4）无菌玻璃涂棒末端浸在盛有体积分数为70%酒精的烧杯中，取出时，要让多余的酒精在烧杯中滴尽，然后将沾有少量酒精的玻璃涂棒在酒精灯火焰上引燃以灭菌，同时要注意防火。

平板划线分离法与涂布分离法各有优点，二者的目的都是分离得到单个菌落。平板划线分离法方法简单，涂布分离法单菌落更易分开，但操作复杂些。3.对分离纯化效果的判断方法（1）培养时，要将接种后的培养基和一个未接种的培养基一同培养。未接种的培养基的作用是对照，若其表面有菌落形成，说明培养基灭菌不彻底，需要重新进行实验。（2）如果对照培养基上无菌落形成，可观察接种后的培养基。如果培养基上大肠杆菌菌落呈白色，为圆形，光滑且有光泽，边缘整齐，则说明接种成功；如果出现了其他颜色、形状的菌落，说明有杂菌，需要重新进行分离纯化。

规律总结：培养时间不同，菌落大小会不同，因为时间越长，菌落中细菌繁殖越多，菌落体积越大；培养时间越长，菌落数可能会增多，但已有的菌落分布位置应相同。题型一题型二接种操作的注意事项【例题1】下列有关平板划线操作的叙述，不正确的是（

）A.第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物B.每次划线前，灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后接种环上的菌种C.在第二区域内划线时，接种环上的菌种直接来源于菌液D.划线结束后，灼烧接种环，能及时杀死接种环上的菌种，避免细菌污染环境或感染操作者解析：在第二区域内划线时，接种环上的菌种来源于第一次划线的末端。答案：C题型一题型二对特定微生物的分离纯化【例题2】有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。请回答下列问题。（1）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以

为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于

培养基。（2）纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即

和

。（3）为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力

。题型一题型二（4）通常情况下，在微生物培养过程中，实验室常用的灭菌方法有火焰灭菌、

和

。无菌技术要求实验操作应在酒精灯

附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。题型一题型二

解析：（1）要获得分解原油的细菌，应选择以原油为唯一碳源的培养基，以保证这种细菌可以大量繁殖，而其他细菌不能生存。此种培养基属于选择培养基。（2）纯化菌种常用平板划线分离法和涂布分离法。（3）在以原油为唯一碳源的培养基上，菌落周围的原油被分解而形成分解圈，分解圈越大，说明该菌株降解能力越强。（4）实验室灭菌的方法有火焰灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌法，实验操作要在酒精灯火焰附近的无菌区进行。

答案：（1）原油选择（2）平板划线分离法涂布分离法（3）强（4）干热灭菌高压蒸汽灭菌法火焰1231.涂布分离法是微生物培养中的一种常用的接种方法。下列相关叙述错误的是（

）A.操作中需要将菌液进行一系列的浓度梯度稀释B.需将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养基表面C.不同浓度的菌液均可在培养基表面形成单个的菌落D.操作过程中，培养基和涂布器等均需进行严格灭菌处理答案：C解析：涂布分离法是将菌液进行一系列的浓度梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养基的表面，在适宜条件下培养。只有用稀释度足够高的菌液涂布，聚集在一起的微生物才能在固体培养基表面分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。1232.为了获得纯度高的大肠杆菌，需要对大肠杆菌进行培养和分离。培养大肠杆菌一般用牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。（1）培养大肠杆菌时，配制固体培养基的基本流程是称量→________→

→

→加塞和包扎→

→摆斜面及倒平板。（2）称量时，由于牛肉膏比较黏稠，可以用玻璃棒挑取，放在称量纸上称量。由于牛肉膏和蛋白胨

，称量时动作要迅速，称后要及时盖上瓶盖。（3）在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上大肠杆菌能生长，说明培养基含有

等大肠杆菌生长所需的营养要素。（4）微生物纯化培养可以通过多种接种方法，如

和

等，使大肠杆菌在固体培养基上形成单个

，从而获得纯菌株。123答案：（1）溶化调pH分装灭菌（2）容易吸潮（3）碳源、氮源、无机盐、水（4）平板划线分离法涂布分离法菌落1233.分析下表所示培养基的配方，回答下面的问题。123（1）在该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是

和

。（2）按物理状态划分该培养基属于

培养基，理由是培养基中含有

。（3）由于培养基中只有尿素一种

源，所以该培养基只能用于能够合成脲酶（可催化尿素分解）的微生物的培养。将土壤浸出液涂布在此培养基平板上能够从土壤中筛选出

的细菌。（4）在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，并能抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称作

培养基。123答案：（1）葡萄糖尿素（2）固体琼脂（凝固剂）

（3）氮分解尿素（4）选择解析：（1）碳源是为微生物的生长提供碳元素的物质，氮源是提供氮元素的物质，所以该培养基的碳源是葡萄糖，氮源是尿素。（2）根据物理状态可以将培养基分为固体培养基和液体培养基，固体培养基中添加了琼脂做凝固剂。（3）（4）绝大多数生物都能利用葡萄糖，但是，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，所以此培养基对微生物有选择作用，选择对象是能够利用尿素的微生物。第3节微生物数量的测定1.记住统计菌落数目、土壤取样及稀释的方法。2.能运用从土壤中分离特定微生物及进行平板计数的方法。

微生物的数量是一个非常重要的卫生指标，在做食品和饮用水的卫生学检查时，必须测定其中的细菌总数和大肠菌群数。测定土壤中微生物的数量1.原理

平板菌落计数法是将待测定的微生物样品按比例作一系列稀释后，将其中的微生物充分分散成单个细胞，吸取一定量某几个稀释度的菌液接种到平板上，培养一段时间后，每个单细胞生长繁殖形成单个菌落，根据稀释倍数、取样接种量和菌落数即可换算出样品的含菌数。2.方法步骤（1）制备尿素固体培养基（2）制备土壤样品稀释液（3）加样（4）倒平板（5）培养（6）统计菌落数（7）计算样品中的菌数3.注意事项

统计菌落时，一般选择在同一稀释度的3个培养皿中的菌落数目相近者，并且要求菌落数目在一定的范围内。若测定细菌和放线菌，要求每皿以30~300个菌落为宜，若是霉菌则以每皿10~100个菌落为宜。1.显微镜直接计数法与平板菌落计数法的比较（1）显微镜直接计数法

①原理：利用血球计数板在显微镜下直接计数，是一种常用的微生物计数方法。

②过程：将经过适当稀释的菌悬液渗入血球计数板的计数室中，在显微镜下进行计数。由于计数室的容积是一定的，所以可以根据在显微镜下观察到的微生物数目来换算成单位体积内的微生物总数目。由于此法计得的是活菌和死菌的总和，故又称为总菌计数法。

③优点：直观、快速。

④缺点：需要与血球计数板配套使用，且计数随机性大，所以不能作出较为宏观、全面地反映菌体数量的结果。不能区分活菌和死菌。（2）平板菌落计数法（间接计数法）

①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落只来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在30~300的平板进行计数。

②计算公式：每克样品中的菌数C：代表某一稀释度下平板上生长菌落的平均数；V：代表加入每一平板的稀释菌液体积；m：代表稀释倍数。

③优点：能测出样品中的活菌数，因此又称活菌计数法。

④缺点：操作过程较烦琐，时间较长，测定值常受各种因素影响。2.平板菌落计数法注意事项（1）设置对照

①目的：排除实验中非实验因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。

②方法：取一个未接种的培养基与接种好的培养基在相同条件下培养。（2）注意无菌操作

①建立无菌观念，严格控制实验器材、实验室、实验操作者的消毒和灭菌。

②整个实验过程必须保证无菌操作。

③取样、稀释都要在酒精灯火焰附近的无菌环境中进行。

④规范操作，防止其他微生物污染，实验结束后洗手消毒。（3）准确计数

①统计结果时，按照不同微生物选择不同的稀释倍数。

②要设置3个或3个以上的重复组，然后求其平均值。题型一题型二测定细菌数量的原理与方法【例题1】用平板菌落计数法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释度为10-6的培养皿中，得到以下几种统计结果。正确的是（

）A.接种了1个平板，统计的菌落数是230B.接种了2个平板，统计的菌落数是216和260，取平均值238C.接种了3个平板，统计的菌落数分别是21，212和256，取平均值163D.接种了3个平板，统计的菌落数分别是210，240和250，取平均值233题型一题型二解析：在设计实验时，一定要接种至少3个平板作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性，所以A、B两项不正确。C项虽接种了3个平板，但是，其中一个平板的计数结果与另两个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地用3个平板的计数值求平均值。答案：D反思领悟在设计实验时，一定要接种至少3个平板作为重复组；在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组的结果是否一致，如果结果差别过大，则意味着操作有误，需重新进行实验。题型一题型二平板菌落计数法的注意事项【例题2】用平板菌落计数法来统计样品中活菌的数目。在某稀释浓度下，某同学做了若干个平板并统计每个平板的菌落数，最接近样品中菌体数真实值的是（

）A.菌落数量最多的平板B.菌落数量最少的平板C.菌落数量适中的平板D.取若干个平板菌落数量的平均值解析：用平板菌落计数法对样品中活菌数目进行统计，只是一种估测。根据此方法的实验过程可知，在某一稀释度下平板上生长的菌落数具有一定的偶然性，并不是绝对均匀，所以取若干个平板菌落数量的平均值比较接近样品中菌体数的真实值。答案：D题型一题型二

反思领悟：由于有的菌落不止是由一个细菌生长而成，可能是由两个或多个细菌繁殖形成，所以计数出的样品的菌数会与样品的实际菌数有偏差，即计算出的样品的菌数往往比活菌的实际数目低。12341.下列关于从土壤中分离细菌的操作步骤，正确的顺序是（

）①土壤取样②称取10g土壤，加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中③吸取0.1mL待测样进行平板涂布④制成10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7不同稀释度的稀释液A.①→②→③→④ B.①→③→②→④C.①→②→④→③ D.①→④→②→③答案：C12342.用平板菌落计数法来统计样品中的活菌数时，通过统计平板上的菌落数就能推测出样品中的活菌数。原因是（

）A.平板上的一个菌落就是一个细菌B.菌落中的细菌数是固定的C.此时的一个菌落一般来源于样品稀释液中的一个活菌D.此方法统计的菌落数一定与活菌的实际数相同答案：C解析：用平板菌落计数法来统计样品中的活菌数时，平板上的一个菌落一般来源于样品稀释液中的一个活菌，但偶尔也能来自两个或多个细菌，所以此方法统计的菌落数可能与活菌的实际数不相同。12343.下列关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，错误的是（

）A.用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后待用B.取10-4、10-5、10-6稀释度的土壤稀释液和无菌水各0.1mL，分别接种于各组平板上C.将实验组和对照组平板倒置，37℃恒温培养48hD.确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数答案：D解析：检测土壤中细菌总数时，用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后待用，取10-4、10-5、10-6稀释度的土壤稀释液和无菌水各0.1mL，分别接种于各组平板上，倒入冷却好的培养基并混匀，凝固后将实验组和对照组平板倒置，37℃恒温培养48h，在确认对照组无菌后，选择菌落数在30~300的一组平板为代表进行计数。12344.用平板菌落计数法来统计样品中活菌的数目，其结果与实际值相比（

）A.比实际值高 B.比实际值低C.和实际值一致 D.比实际值可能高也可能低答案：B解析：培养基上的一个菌落可能由相连的两个或多个菌体繁殖而来，因此统计的活菌数可能少于菌体实际值。第4节微生物的利用1.能记住纤维素酶的种类及分布。2.会运用从土壤中分离出分解纤维素的微生物的方法。3.能说出微生物在食品制作等方面的应用。一二一、从土壤中分离纤维素分解菌1.纤维素分解菌

土壤中存在大量纤维素分解菌，包括真菌、细菌和放线菌等，它们可以产生纤维素酶，分解和利用纤维素和半纤维素。2.分离纤维素分解菌的原理

在用纤维素作为唯一碳源的培养基中，纤维素分解菌能很好地生长，并产生黄色或棕绿色色素，其他微生物则不能生长。3.分离纤维素分解菌的意义

目前对纤维素的降解利用主要采用生物手段，即利用纤维素分解菌或其产生的酶来分解纤维素。这项技术在碳素循环、提高土壤肥力及解决人类食物问题等方面有重大意义。三一二4.实验步骤（1）纸条法

①制备培养基；②分装；③制配土壤稀释液；④接种培养；⑤观察。（2）固体培养法

①制备培养基；②接种培养；③观察。思考：

从土壤中分离纤维素分解菌的实验中，为什么对土壤溶液进行梯度稀释?

提示：通过梯度稀释使聚集在一起的微生物分散成单个细菌，在培养基表面形成单个菌落。三一二二、微生物对有机物质的分解1.不同培养基中，同一菌株或菌群表现出的活力不一致，这可能是由于测定的时间不一致以及培养基中所含酶的浓度、活力不同而造成的。另外，不同的培养基中，底物不同，诱导产物也可能有差异。2.纤维素的分解比较困难，木质素的分解比纤维素更难，淀粉和果胶的分解比纤维素容易。纤维素分解菌之所以还能分解其他物质是因为它们还能分泌淀粉酶、蛋白酶、果胶酶和木质素酶等。三一二三三、利用微生物制作食品1.利用微生物制作豆豉的原理

豆豉是用煮熟的大豆经过纳豆菌（一种带芽孢的枯草杆菌）发酵制成的。纳豆菌分泌的蛋白酶能够分解大豆中的蛋白质，产生小分子多肽及多种氨基酸，制成风味独特的发酵食品。在制备过程中，根据纳豆菌的芽孢对热不敏感的特性，可采用高温控制杂菌污染。2.利用微生物制作豆豉的实验步骤（1）制备豆豉菌悬液；（2）浸泡；（3）煮豆；（4）接种；（5）发酵。一二三3.发酵食品是微生物技术最早开发应用的领域

目前，微生物技术应用已深入到工农业生产、医疗保健、环境保护等领域。1.利用刚果红筛选纤维素分解菌的两种方法

刚果红是一种染料，它可以与纤维素等多糖物质形成红色复合物，但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。当纤维素被纤维素酶分解后，培养基中出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。2.筛选纤维素分解菌时在土壤中取样的要点

要在富含纤维素的环境中取样，以提高获得目的微生物的概率。生物适应一定环境，环境对生物具有选择作用，只有在富含纤维素的环境中，纤维素分解菌的含量才会高于其他普通环境。

也可人工设置适宜纤维素分解菌生存的环境。将滤纸埋在土壤中，这样能使纤维素分解菌相对聚集。一般应将纸埋于深约10cm的腐殖土壤中。3.关于微生物对有机物质的分解的实验应用（1）“探究纤维素分解菌是否只能分解纤维素”的实验设计思路——分组设计实验方案。

①用同一种分解纤维素的微生物分解不同的物质，如淀粉、果胶和木质素等。或用不同分解纤维素的微生物分解同一种物质。

②还需注意在实验设计时设计对照实验和重复实验等。（2）选择培养的“浓缩”作用。

在选择培养的条件下，能够使适应这种营养条件的微生物得到迅速繁殖，而不适应这种营养条件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到“浓缩”的作用。4.对尿素分解菌和纤维素分解菌的分离实验的比较。题型一题型二题型三从土壤中分离纤维素分解菌【例题1】某同学为了从土壤中分离得到纤维素分解菌，进行以下操作。（1）土壤取样：用小铁铲和普通信封将土取回，然后倒入烧瓶中，加蒸馏水稀释，塞好棉塞。（2）制备培养基。题型一题型二题型三（3）分装：按每试管5mL分装，然后加滤纸条，滤纸条紧贴内壁，且一半浸入培养基中。（4）制备土壤稀释液：制备10-1、10-2、10-3、10-4和10-5的土壤稀释液。（5）接种培养：分别吸取各稀释度的土壤稀释液1mL接种到滤纸上，每个稀释度重复4次。（6）培养观察：把接种好的培养皿放到28℃的培养箱中培养14d，观察滤纸条上出现的菌落和滤纸颜色变化情况。找出该同学明显的操作错误。题型一题型二题型三

解析：从土壤中分离微生物的一般流程是土壤取样→制备培养基→分装→制备土壤稀释液→接种培养→观察。该实验步骤没有问题，但在前五步操作中都没有进行无菌操作，因而无法说明分解纤维素的微生物一定来自于土壤。

答案：（1）取样工具应提前灭菌；不能用蒸馏水，应用无菌水；该操作应在火焰旁进行。（3）培养基分装并加滤纸条后应灭菌。（4）在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁。（5）接种应在无菌条件下进行。题型一题型二题型三对微生物分解有机物效力的测定【例题2】在纤维素分解菌的鉴定实验中，纤维素酶的测定方法一般是（

）A.对纤维素进行定量测定B.对纤维素酶分解纤维素后所产生的葡萄糖进行定量测定C.对纤维素酶分解纤维素后所产生的纤维二糖进行定量测定D.对纤维素分解菌进行定量测定

解析：纤维素酶的测定方法一般是对纤维素酶分解纤维素后所产生的葡萄糖进行定量测定。

答案：B题型一题型二题型三对