红白蚕石丸中柚皮苷的含量测定研究 终稿

目录[摘要] 红白蚕石丸中柚皮苷的含量测定研究[摘要]目的：对红白蚕石丸中柚皮苷的含量进行测定，为其构建质量标准提供参考。方法：HPLC法同时测定制剂中柚皮苷的含量。结果：HPLC法测定同时测定制剂中的柚皮苷的含量，该方法更为简便灵敏，具有良好的重复性。结论：该方法可以作为红白蚕石丸的含量测定方法。[关键词]红白蚕石丸；鉴别；检查；含量测定StudyonqualitystandardofHongbaicanshipellets[Abstract]Object:TodeterminethecontentofnaringininHongbaiCanshiWan,andtoprovideareferenceforitsconstructionofqualitystandards.Method:SimultaneouslydeterminethecontentofnaringininthepreparationbyHPLC.Results:TheHPLCmethodisusedtodeterminethecontentofnaringininthepreparationatthesametime.Thismethodissimpler,moresensitive,andhasgoodrepeatability.Conclusion:ThismethodcanbeusedasamethodforthedeterminationofthecontentofHongbaiCanshiWan.[Keywords]Redandwhitesilkwormstonepills;Identify;examination;Determinationofcontent

红白蚕石丸全方由生磁石粉、白矾、炒僵蚕、法半夏、天麻、化橘红等药材组成，具有熄风镇惊，平肝安神的功能，临床主要用于治疗头目眩晕，目胀耳鸣，肢麻震颤，语言不利，步履不稳等之效[1]。为建立该制剂的质量标准，有效控制成品的质量，采用HPLC法对制剂中柚皮苷的含量进行了测定，为建立其可行、可控的质量标准提供了充分的科学依据。红白蚕石丸组方中含有化橘红，其所含柚皮苷成分是该药物的主要有效成分，柚皮苷是一种二氢黄酮类物质，主要存在于柚及其变种的果皮及果实中，具有抗氧化性、抗肿瘤、抑制微生物活性和抗骨质疏松等作用，具有很高的药用价值，应用范围广泛[2]。为探讨本制剂的内在质量，制定该药物的定量质控标准，参考2015版中国药典一部及相关参考文献中的含测方法，对红白蚕石丸样品中的柚皮苷建立了高效液相色谱含测方法。本法操作简单易行，结果准确、灵敏、专属性强、重现性好，是控制红白蚕石丸制剂内在质量的较理想方法。本文建立的质量控制方法准确可靠，为控制该制剂的质量提供了依据。1仪器与试剂表1仪器型号生产厂家含量测定用高效液相色谱仪Ultimate3000二极管阵列检测器紫外检测器Ultimate3000美国Thermo公司工作站Chromeleon7美国Thermo科技公司超声波清洗机SB-5200DTS宁波新芝生物科技股份有限公司电子天平BP211D型sartorius公司色谱柱SupersilODS2（4.6mmｘ250mm，5µm，大连依利特分析仪器有限公司）试剂柚皮苷（批号110737-200415），中国食品药品检定研究院，供含量测定用。乙腈为色谱纯，纯净水（杭州娃哈哈集团公司），其余试剂均为分析纯。中药白矾、法半夏等由安徽济顺中药饮片有限公司中药厂提供。2研究的起因近年来在癫痫的各方面研究都取得了很大的进展。现如今，以通过影响离子通道为基本特征的新开发的西药类型的抗癫痫药，是借助于兴奋性神经元功能的减弱而将抗癫痫的作用予以发挥的[3]。在癫痫的中药治疗方面，相关的作用机制方面研究所取得的进展是非常大的。因此，将没有毒副反应为基本特征的光谱的抗癫痫的药予以研制出来是下一步的研究的重点所在[4]。在业界，这样将中药制剂的质量予以确切地提升起来，一直是重要的课题[5]。以化学成分特别复杂为基本特征的中药通常情况下都是复方制剂。因此，诸如有效成分之类的基础研究在难度方面显得特别大。就部分的中药质量方面的相关标准而言，其中所选择相关检测方面指标无法对中药相关治疗作用予以完全地体现[6]。而在国务院发布的关于中医药事业的意见中曾提到，推进实施中药生产质量管理方面的规范化，从而强化中药生产质量方面监管特别要予以重视[7]。所以，在对相关的问题加以客观地面对的情况下，要做到对中成药质量的整体提升的不断地推进。对于中成药的内在的质量，要通过质量的评价予以客观地反映。总而言之，中成药的质量，在诸如为人民服务和对中药发展的强力推进等精神的感召下，都能够在得力措施的采取之后不断地提升[8]。不过，红白蚕石丸全方由生磁石粉、白矾、炒僵蚕、法半夏、天麻、化橘红6味中药组成，为制订科学合理的提取制备工艺，保证产品质量，采用HPLC法对制剂中柚皮苷的含量进行了测定，为建立其可行、可控的质量标准提供了充分的科学依据。3制剂中各药材的有效成份及作用分析3.1生磁石粉：作为FeO与Fe3O4的混合物，生磁石的重要成分之中，既有C4H6O4Fe，也有Fe2O3等[9]。这样的物质有潜阳安神、镇静作用，适用于阴虚阳亢所致的烦躁不宁、睡眠不安，头晕头痛及癫痫之证。3.2白矾：以KAl(SO4)2·12H2O为重要的成分，有着诸如云母矾、羽泽、雪矾和理石以及明矾等名称的白矾实际上是硫酸盐类的矿物明矾石经在加工提炼的情况下制成的[10]。白矾有解毒杀虫之功，外用多煅成枯矾，尤能收湿止痒，主要用于痈肿疮毒、湿疹疥癣、口舌生疮、耳内流脓等证。内服多用生白矾，有较强的祛痰作用，用于风痰壅盛，或癫痫等证。3.3炒僵蚕：无论是脑炎的后遗症和癫痫，还是腮腺炎的治疗作用，都是以含有有刺激肾上腺皮质作用的蛋白质为基本特征的僵蚕所具备的[11]。诸如痰热和肝风内动所致的中风和癫痫以及惊风等痉挛抽搐之证，都是炒僵蚕能够治疗的[12]。3.4法半夏：除了亚麻仁油酸和油酸以及粘液质在外，本品所包含的既有植物笛醇，也有挥发油。而就现如今所发现的半夏具体的成分而言，在其90个化学成分之中，定性的为80个化学成分。除了别的类型的4个化合物，这之中，既有11个的酰胺类和11个的氨基酸类以及10个的醇氨类，也又12个的溶血磷脂酰胆碱类和以及5个的黄酮类，并且有12个的脂肪酸甘油脂类和8个的醇醚类以及7个的生物碱类[13]。除了能够做到对支气管痉挛的缓解和镇咳以及祛痰之外，得益于对呕吐中枢的抑制，本品还有止吐的功效。能燥湿化痰，为治湿痰、寒痰要药。以能够为白帆所消除为重要特征的半夏，不容易为热所破坏[14]。3.5天麻：天麻有镇静、抗惊厥、抗癫痫和促进胆汁分泌的作用。本品含生物碱，甙类、香草醇、维生素A、粘液质。这之中，能够做到对N-甲基-D-天冬氨酸受体（N-methyl-D-asparticAcidReceptor，NMDA）钙离子通路加以进一步地阻断，从而达到抗惊厥的作用的天麻素，作为脂溶性物质，还能够将MNDA受体活性予以降低，从而有效地避免钙离子的升高[15]。现代以本品配全蝎、僵蚕等药用于“流感”、“乙脑”引起的脑神经刺激症状如痉挛、抽搐等有一定的疗效，如天麻祛风汤。3.6化橘红为橘的外层果皮。辛、苦，温；归肺、脾经。除了对糖尿病所造成的心肌功能损伤的治疗和抗氧化之外，止咳化痰等方面的作用也是化橘红所具有的[16]。4含量测定4.1方法与结果 4.1.1样品溶液的制备[17]：表2方法供试品溶液的制备取本品，研细，精密称定0.4g，置圆底烧瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，水浴加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，以0.45µm滤膜滤过，即得。柚皮苷对照品溶液的制备精密称取柚皮苷对照品8.8mg于10ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，其浓度为88mg/ml。精密量取1ml上述对照品溶液于25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为对照品溶液，得浓度为35.2mg/ml.缺化橘红空白液的制备按处方比例，准确称取除化橘红以外的其它药材，模拟本品的制备工艺和供试品的制备方法，制成缺化橘红空白溶液。化橘红药材溶液的制备取化橘红药材0.5g，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，水浴加热回流1小时，放冷，称定重量，用甲醇补足失重。摇匀，滤过，取续滤液5ml置50ml量瓶中，加50%甲醇定容至刻度，摇匀既得。4.1.1.1在分别将乙腈-0.1%磷酸水和十八烷基硅烷键合硅胶作为流动相和填充剂的情况下，在系统和色谱条件方面适用性试验方面，理论板数和检测的波长分别为超过了1000和283nm。4.1.1.2本测定的检测波长，在最大的吸收波长选择方面是283nm。2、色谱条件与适用性试验[18]：4.2.1空白干扰试验：在283nm处，也各区进样5μl的方式，实施缺化橘红空白液和化橘红对照液以及供试液的检测。如下面的图1所表示的那样，就柚皮苷对照液而言，跟供试品溶液一样，在这样的波长之下都呈现如图1所表示的吸收峰。也就是说，本测定空白是无干扰的。ABCA柚皮苷B缺化橘红空白C供试品图1HPLC色谱图4.2.2线性关系考察[19]：配制柚皮苷对照品溶液浓度为70.4μg/ml。表3所表示的即为其峰面积积分值。在0.0704~0.4224μg范围内，通过标准曲线图的绘制，我们会发现：柚皮苷进样量的线性关系良好。就上述数据的分析所得到的回归方程为：y=2.1696X，r2=0.9997。图2所表示的，即为标准曲线。表3柚皮苷线性关系考察结果进样量（μg）0.07040.14080.21120.28160.35200.4224峰面积（A）1.9134.4456.6728.76110.81712.915图2柚皮苷的标准曲线4.2.3精密度试验[20]：在对5μl的照品溶液加以精密地吸取的前提下，将峰面积积分值予以测定，从而实施精密度的计算。结果RSD是0.142%，也就是说，精密度是良好的。具体的情况见表4。表4精密度试验结果次数123456±SDRSD（%）峰面积（A）5.2425.2505.2605.2535.2535.2635.254±0.007450.1424.2.4稳定性试验[21]：在对5μl的供试品溶液予以精密地吸取的情况下，实施供试品柚皮苷方面7次的测定。相关的结果显示：稳定性在测定时间的24h内是良好的。见表5。表5稳定性试验结果时间（h）0369121824±SDRSD（%）峰面积（A）5.6555.6475.6665.6585.6705.6755.6805.664±0.01170.2074.2.5重复性试验表6重复性试验结果次数123456±SDRSD（%）淫羊藿苷（mg/g）2.3612.3842.3612.4122.3012.3472.361±0.03721.584.2.6回收率试验：表7回收率试验结果称样量样品中的量加入量测得量回收率（%）（g）（mg）（mg）（mg）单次平均RSD0.20050.4730.4960.96398.6398.651.750.20040.4730.4960.96498.980.20090.4740.4960.96198.200.20060.4740.4960.970100.070.20020.4730.4960.971100.460.20370.4810.4960.95595.584.2.7样品的测定[18]：在将分别为5μl的三批供试的溶液和对照品溶液加以吸取的情况下，将其注入到液相色谱仪之中加以测定。这样，每一个批次的样品里面柚皮苷的含量净得以计算出来，具体的结果见表8。表83批样品含量测定结果批号含量（mg/g）平均含量12（mg/袋）2104072.3612.3842.3732104082.6142.6512.6322104092.6532.7222.688 5.讨论红白蚕石丸全方由生磁石粉、白矾、炒僵蚕、法半夏、天麻、橘红等药材组成，具有熄风镇惊，平肝安神之效，临床主要用于治疗头目眩晕，目胀耳鸣，肢麻震颤，语言不利，步履不稳等证。总结上述实验结果，本课题制定了红白蚕石丸的含量测定研究方法，为有效评价该制剂质量提供了科学依据。在止咳化痰和咳嗽治疗方面药物的制备方面，以具备的药用方面价值特别大为基本特征的柚皮苷所起到的作用是非常大的。而诸如牙周病和骨质疏松以及骨缺损等疾病，得益于其良好的诱导成骨方面的作用而能够借助于这样的药物加以治疗[2]。与此同时，这样的药物既有对心肌细胞的保护和对胃溃疡愈合的促进等方面的显著作用[2]，具有较高的药物开发价值。参考文献[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典一部[M].北京：中国医药出版社，2015：318-319.[2]刘影，庞富.化橘红有效成分柚皮苷的研究进展[J].粮食与油脂，2021，34(02)：8-10.[3]胡艳丽，周园，杨德林，吴越.抗癫痫新药研究进展[J].农垦医学，2001(06)：405-408.[4]李满，郑辑英，李光来.抗癫痫中药作用机制研究进展[J].中西医结合心脑血管病杂志，2005(11)：64-66.[5]阳长明，陈霞，赵巍，韩炜，张永文，李计萍，周思源.基于源头控制的中药制剂质量研究[J].中草药，2021，52(02)：321-326.[6]李淼.中药质量标准研究现状[J].黑龙江医药，2014，27(01)：135-137.[7]国务院.国务院关于扶持和促进中医药事业发展的若干意见[S].国发[2009]22号，2009.[8]马双成，王翀，朱炯，戴忠.中成药的整体质量状况及有关问题分析[J].中国药学杂志，2019，54(17)：1369-1373.[9]朱祥成.耳呜——中医对策[A].中华中医药学会、中华中医药学会耳鼻喉科分会、“世中联”耳鼻喉口腔科专业委员会.中华中医药学会耳鼻喉科分会第15届学术交流会论文集[C].中华中医药学会、中华中医药学会耳鼻喉科分会、“世中联”耳鼻喉口腔科专业委员会：中华中医药学会耳鼻喉科分会，2009：6.[10]马浩文，赵启苗，单国顺，鞠成国，贾天柱.白矾炮制历史沿革及现代研究概况[J].中国现代中药，2021，23(03)：562-566.[11]米红霞，刘吉平.白僵蚕应用研究进展[J].广东蚕业，2010，44(01)：46-48.米红霞，刘吉平.白僵蚕应用研