鼠单B细胞单抗制备服务技术问答-20240109

鼠单抗制备过程中的常见问题及解决措施提供单B细胞筛选技术制备鼠单抗过程中遇到的问题及如何解决？B细胞培养在多大的孔板中培养？在96孔板进行培养[1]。孔板中每个孔有多少个B细胞？根据每个细胞生长情况不同，细胞个数在几百到上千个不等。动物如果对抗原产生过度免疫反应怎么办？调整抗原的剂量和免疫频率，使用合适的免疫佐剂，并监测动物的免疫反应以确保其健康。杂交瘤细胞融合效率低。优化融合条件，考虑使用不同的杂交瘤细胞系，或尝试其他融合方法。单个B细胞筛选后，抗体是如何组装的，如何设计它的重链和轻链引物？分别从单个B细胞中扩出抗体的重轻链基因，共表达转染细胞。引物可以通过germline基因序列来设计[2]。单克隆细胞稳定性差怎么办？定期检测单克隆细胞的稳定性，选择稳定的单克隆细胞进行扩增和抗体生产。抗体样品可能受到污染或包含杂质。使用适当的纯化技术，例如亲和层析或凝胶过滤，以提高抗体样品的纯度。B细胞大概培养多久可以用于ELISA检测，抗体量会达到多少？B细胞培养10-12天可用于ELISA检测，抗体量在0.2μg/mL~>10μg/mL。单个B细胞技术会成为治疗性抗体开发的金标准吗？虽然单个B细胞技术逐渐成为抗体开发的主流技术之一，但是抗体开发的技术路线仍然有很多种，如杂交瘤和噬菌体展示等，这些方法各有优缺点，相互之间是互补关系[3]。单个B细胞直接裂解后与培养后的PCR成功率哪个更高？单个B细胞培养后的PCR成功率更高。培养后的B细胞经过扩增，细胞数增加，模板量更高。卡梅德生物拥有丰富的经验积累、严格的质控体系，提供的单B细胞单抗制备服务的周期短、不限种属、可获得抗体序列，得到的抗体具有更高的特异性和亲和力。为了满足客户的不同需求，卡梅德生物能够提供从抗原设计，合成与修饰，到动物免疫，噬菌体文库构建与筛选，下游抗体修饰与应用鉴定等一站式技术服务。参考文献[1]TanSH,YoungD,ElsamanoudiS,etal.Abstract2565:DetectionofETV1expressioninhumanprostatetissuespecimensusinganovelandhighlyspecificrabbitmonoclonalantibody[C]//Proceedings:AACRAnnualMeeting2021;April10-15,2021andMay17-21,2021;Philadelphia,PA.2021.DOI:10.1158/1538-7445.AM2021-2565.[2]WallaceJL,ArforsKE,McknightGW.AmonoclonalantibodyagainsttheCD18leukocyteadhesionmoleculepreventsindomethacin-inducedgastricdamageintherabbit[J].Gastroenterology,1991,100(4):878-883.DOI:10.1016/0016-5085(91)90259-N.[3]Powell,WilliamC,Hicks,etal.Anewrabbitmonoclonalantibody(4B5)fortheimmunohistochemical(IHC)determinationoftheHER2statusinbreastcancer:comparisonwithCB11,fluorescenceinsituhybridization(FISH),andinterlaboratoryreproducibility.[J].