交叉配血实验2023

交叉配血试验承德医学院附属医院输血科

张文铮盐水介质交叉配血试验抗人球蛋白交叉配血试验

低离子凝聚胺介质交叉配血试验微柱凝胶介质交叉配血试验4123交叉配血试验4

交叉配血实验是输血前检验的必备实验之一，用于综合性检测供、受血者血液的不相容性，防止发生溶血性不良反应。根据反应介质的不同，实验方法主要分为以下几类：盐水介质交叉配血实验

交叉配血试验亦称为血液相容性试验，受血者与供血者的交叉配血反应体系中存在针对红细胞膜上ABO血型或其他血型抗原的IgM抗体时，可直接在离心力作用和盐水介质条件下抗原抗体结合而发生肉眼可见的凝集，亦可在补体参与下进一步引起溶血效应。实验原理

生理盐水介质交叉配血试验包括主次侧实验原理

次侧：检查供血者血清中是否存在破坏受血者红细胞的完全性红细胞抗体或补体依赖性意外抗体。

主侧：检查受血者血浆中是否存在破坏供血者红细胞的IgM类红细胞抗体或补体依赖性意外抗体。6器材、试剂与标本仪器设备：滴管、洁净小试管、标记笔、离心机

显微镜、玻片等实验试剂：生理盐水标本：2~4ml抗凝或不抗凝供血者及受血者血液标本盐水介质交叉配血操作步骤1.离心供血者、受血者血液标本，使红细胞与血清分离。

用生理盐水洗涤供、受血者红细胞3次，配成3%-5%的生理盐水红细胞悬液。

（4%红细胞悬液1ml生理盐水+50μl压积红细胞）2、混匀1000*g离心15s首先观察有无溶血然后轻摇试管，观察有无凝集3、取玻片观察结果低离子聚凝胺介质交叉配血试验实验原理

聚凝胺是一种高价阳性季铵盐多聚物，溶解后产生正电荷，可以大量中和红细胞表面的负电荷，减弱红细胞之间的排斥力，使红细胞彼此间的距离缩短，在离心力的作用下，可使正常红细胞发生可逆性的非特异性凝集。低离子液降低反应体系的离子强度，增加抗体抗原间的引力，进而促进血型抗体与红细胞膜上相应抗原结合，在低离子介质、聚凝胺的联合作用及离心作用下，有利于血型抗体尤其是不完全性红细胞血型抗体（IgG类）与相应抗原红细胞发生结合而促进红细胞凝集。离心后，加入重悬液，中和聚凝胺的凝集作用，使非特异性的正常红细胞凝集解散，而特异性的抗原抗体结合引起的红细胞凝集仍然存在。器材、试剂与标本器材：滴管、洁净小试管、标记笔、离心机、显微镜、玻片等试剂:生理盐水、低离子聚凝胺试剂盒标本：2∽4ml抗凝或不抗凝供血者及受血者血液标本实验步骤

每管各加LIM液0.6ml混匀再各加Polybrene溶液2滴，并混合均匀。用离心机3400转/min(相当1000g离心力)离心10秒，然后把上清液倒掉，不要沥干，让管底残留约0.1mL液体。轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，则必须重做。最后加入Resuspending2滴，轻轻摇动试管混合并同时观察结果。抗人球蛋白介质交叉配血试验

抗人球蛋白介质交叉配血试验实验原理：悬浮于生理盐水介质中的红细胞由于细胞膜表面大量负电荷的作用，红细胞相互排斥，使细胞间距始终保持在25nm，而IgG相邻两个结合抗原的Fab片段最大距离是14nm。故在适合的温度、时间等条件下，IgG类血型抗体与红细胞膜上相应抗原结合即致敏红细胞，但不能交联而凝集红细胞。14抗人球蛋白试剂的主要成分是马或兔抗人球蛋白抗体,这种抗体(二抗)可以结合致敏在红细胞膜上的IgG类血型抗体(一抗)的Fc段,经抗人球蛋白抗体的“搭桥”作用,使原来已经致敏的红细胞发生肉眼可见的凝集。

抗人球蛋白介质交叉配血试验包括主次侧实验原理

次侧：检查供血者血清中是否存在破坏受血者红细胞的完全性红细胞抗体或补体依赖性意外抗体。

主侧：检查受血者血浆中是否存在破坏供血者红细胞的IgG类红细胞抗体或补体依赖性意外抗体。1.离心供血者、受血者血液标本，使红细胞与血清分离。用生理盐水洗涤供、受血者红细胞3次，配成3%的生理盐水红细胞悬液。2.取3人份O型红细胞并混合，经生理盐水洗涤后取压积红细胞1滴，加入IgG类抗体-D血清2滴，置于37℃水浴1小时后，离心去上清液，再用生理盐水配制成3%的阳性对照细胞。3.取洁净小试管2支，分别标记为主侧及次侧管。主侧管内加入受血者血清2滴及供血者红细胞悬液1滴；次侧管加供血者血清2滴及受血者红细胞悬液1滴。4.各试管放入轻轻混匀后，置于37℃水浴30分钟，分别取出后用生理盐水洗涤红细胞3次，倾去上清液。5.各试管内加入抗人球蛋白试剂1滴，1000×g离心15秒，取出试管，轻轻摇动用肉眼观察试验结果并记录6.取1张洁净玻片,用滴管分别从主侧管和次侧管内吸取红细胞悬液各1滴,均匀滴放在载玻片上,用显微镜观察并记录结果。7.在阴性反应管内加入3%阳性对照细胞1滴,1000xg离心15秒后,取出试管并轻轻摇动,肉眼观察应出现红细胞凝集,否则提示抗人球蛋白试剂失效,交叉配血试验无效,需更换抗人球蛋白试剂后重新检测。操作步骤微柱凝胶介质交叉配血实验实验原理

将供、受者红细胞及血浆或血清加入到含有抗人球蛋白试剂的微柱凝胶卡中进行交叉配血试验，37℃孵育后，如果血清中存在针对红细胞抗原的血型抗体(无论是IgM类或IgG类红细胞血型抗体)与对应的红细胞发生凝集，形成红细胞凝集团块。凝胶柱中的凝胶具有分子筛作用，离心时可阻止凝集的红细胞下沉，而留在微柱的上层。如果血清中不含有针对红细胞膜上血型抗原的抗体，经过孵育、离心后，红细胞仍然以单个分散形式存在，经离心力作用顺利通过凝胶分子筛，全部下沉到微柱管底部，形成红细胞扣。器材、试剂与标本器材:37℃微住凝胶血型卡专用孵育器及离心机、移液器等。试剂与标本:试剂：微住凝胶血型卡、生理盐水、专用红细胞稀释液等。标本：2-4ml抗凝或不抗凝供血者及受血者血液标本标本准备

离心供血者、受血者血液标本，使红细胞与血清分离。用生理盐水洗涤供、受者红细胞3次，再用红细胞稀释液配成1%的生理盐水红细胞悬液。（0.8~1%红细胞悬液1ml生理盐水+10μl压积红细胞）21标记，撕去铝箔，垂直放置卡槽内专用孵育器内37℃孵育15分钟专用离心机离心取出试剂卡，肉眼观察结果实验步骤微柱凝胶法实验结果4+：红细胞复合物位于胶表面3+：大部分红细胞复合物位于胶表面，小部分位于胶的中上部2+：大部分位于胶的中部，小部分位于胶的中上部1+：复合物位于胶中近底部+/-：与阴性管结果对照，如有差别，即可判断。d.p.：对某特异性抗体，同时存在阴性与阳性细胞，而发生混合反应。Hemo.：溶血反应-：离心后红细胞沉积在微柱凝胶管底部24实验结果主侧和次侧管红细胞均无凝集或无溶血，表示受血者和供血者两血配血相容，供血者血液可以输注。若主侧和（或）次侧试管内出现红细胞凝集和（或）溶血，则表明两血不相容。思考题：交叉配血实验的方法学评价交叉配血试验优点缺点盐水介质1、简单快速，不需要特殊条件2、ABO血型交叉配血最常用方法3、试用于无输血史或妊娠史的患者仅用于IgM血型抗体是否相配，不能检测IgG血型抗体抗人球蛋白介质灵敏、特异、准确可靠。检查不完全抗体最可靠办法操作复杂、费时、试剂较贵低离子聚凝胺介质应用广泛、快速灵敏、结