第十章甾体激素类药物的分析课件

PPT文档演模板第十章甾体激素类药物的分析2023/10/8第十章甾体激素类药物的分析PPT文档演模板激素（Hormone，荷尔蒙）是人体内各种内分泌腺所分泌的一种生物活性物质。激素作用于特定的称为靶器官的组织、细胞上而发挥作用。如果激素分泌出现平衡失调，可使人体发生病变，如甲亢、糖尿病等。第十章甾体激素类药物的分析•A第十章甾体激素类药物的分析•B•1•2•3•4•5•6•9101112•C•8

•14•7•D151618•13

•1719基本结构概述甾体激素类药物均具有环戊烷骈多

氢菲母核。甾体激素分类肾上腺皮质激素性激素雌激素雄性激素蛋白同化激素孕激素第十章甾体激素类药物的分析（一）肾上腺皮质激素天然皮质激素：氢化可的松母核有21个碳原子△4–3–酮基（紫外吸收）C17–醇酮基（还原性）第十章甾体激素类药物的分析PPT文档演模板醋酸地塞米松结构修饰曲安息龙地塞米松磷酸钠第十章甾体激素类药物的分析PPT文档演模板提高结构稳定 性增强抗炎作用△4–3–酮基（二）雄性激素和蛋白同化激素4位引入卤素或19位去甲基或将A环结构改造均明显降低雄性作用，增加蛋白同化作用

天然雄性激素：睾酮母核有19个碳原子A环中有△4–3–酮基结构第十章甾体激素类药物的分析PPT文档演模板结构修饰丙酸睾酮增加脂溶性，制成油注射剂可口服、延效第十章甾体激素类药物的分析PPT文档演模板甲睾酮增加位阻，难代谢氧化，稳定性增强可口服蛋白同化激素苯丙酸诺龙4-氯醋酸睾丸素母核有18或19个碳原子第十章甾体激素类药物的分析PPT文档演模板（三）孕激素C17-α-甲酮基天然孕激素：黄体酮母核有21个碳原子口服被迅速破坏失效，只能肌注△4–3–酮基第十章甾体激素类药物的分析PPT文档演模板结构修饰醋酸甲地孕酮（孕酮类孕激素）炔诺酮（睾酮类孕激素）

•炔诺孕酮（睾酮类孕激素）口服、长效口服、长效，17-OH作成庚酸酯，注射一次可维持3个月第十章甾体激素类药物的分析PPT文档演模板（四）雌激素天然的雌性激素：雌二醇母核有18个碳原子A环为苯环，C3位上有酚羟基，C17位上有β-羟基结构不稳定，口服无效第十章甾体激素类药物的分析PPT文档演模板结构修饰苯甲酸雌二醇乙炔基引入，使仲醇变叔醇，增加空间位阻，阻碍酶对药物的氧化代谢，可口服炔雌醇17位羟基酯化，酯在体内缓慢水解，延效戊酸雌二醇3位羟基酯化，酯在体内缓慢

水解，延效可口服高效长效第十章甾体激素类药物的分析PPT文档演模板人工合成代用品：非甾体化合物己烯雌二酚高效、长效第十章甾体激素类药物的分析PPT文档演模板第十章甾体激素类药物的分析PPT文档演模板△4–3–酮C17–α–醇酮基C17–β–羟基C17–甲酮基A环为3–

OH苯环肾上腺皮质激素++雄性与蛋白同化激素++雌性激素++孕激素++鉴别反应UV、羰基试剂、氨基脲反应还原性（碱性酒石酸酮、氨制AgNO3）可成酯与亚硝基铁氰化钠、间二硝基苯反应UV、与重氮苯磺酸盐反应二、特殊官能团与分析方法第二节 鉴别试验一、物理常数的测定二、化学鉴别法三、制备衍生物测定熔点四、紫外分光光度法五、红外分光光度六、薄层色谱法七、高效液相色谱法第十章甾体激素类药物的分析PPT文档演模板第二节 鉴别试验二、化学鉴别法（一）呈色反应（1）与强酸的呈色反应强酸：

H2SO4、H3PO4、HClO4、HCl原理：酮基先质子化，形成正碳离子，再与

HSO4-作用呈色。第十章甾体激素类药物的分析PPT文档演模板显

色荧光加水稀释氢化可的松棕黄色至红色绿色黄色至橙黄色炔雌醇橙红黄绿玫红絮状↓炔雌醚橙红黄绿红色↓泼尼松黄→橙—黄色渐变蓝绿色泼尼松龙深红—灰色絮状↓地塞米松淡红棕色—颜色消失苯甲酸雌二醇黄绿色蓝色淡橙色第十章甾体激素类药物的分析PPT文档演模板与硫酸显色反应(2)官能团的呈色反应1、C3–酮基和C20–酮基（1）与羰基试剂2,4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼反应生成腙。（2）与羟胺或氨基脲分别生成具有一定熔点的肟或缩氨脲。第十章甾体激素类药物的分析•+HCl黄色3，20-双腙室温下长时间加热第十章甾体激素类药物的分析PPT文档演模板结论：成腙反应中C20–酮基受C18甲基的空间位阻影响，反应较慢，需加热或较长时间放置，才完成反应。C11–酮基受C18、C19位甲基甲基的阻碍，不发生反应。C3–酮基空间位阻最小，最易起反应，室温下先生成单腙。第十章甾体激素类药物的分析PPT文档演模板2、C17–α–醇酮基的呈色反应（还原性）适用：肾上腺皮质激素。能与碱性酒石酸铜试液（斐林试液）、氨制

AgNO3试液（多伦试液）、四氮唑盐反应呈色。其中以四氮唑盐的显色反应最为常用，不但可用作层析法的显色剂，还可用于含量测定.第十章甾体激素类药物的分析＋

2Cu2++

4OH-•+

Cu2O +

H2O橙红色＋

2Ag++

2OH-+2Ag

+

CH3COOH黑色醋酸去氧皮质酮第十章甾体激素类药物的分析PPT文档演模板H2O•+

CH3COOH第十章甾体激素类药物的分析PPT文档演模板•+•+•+OH-醋酸泼尼松深红色的三苯甲鐕四氮唑盐结论：反应在碱性条件下（水解）进行。三苯甲鐕于490nm处显示最大吸收，可用比色法测含量。四氮唑盐反应还用于肾上腺皮质激素类药物中杂质“有关物质”检查的显色剂。第十章甾体激素类药物的分析PPT文档演模板物。3.甲酮基的呈色反应适用：具有甲酮基或活泼亚甲基的甾体激素类药孕激素能与亚硝基铁氰化钠、间二硝基酚、芳香醛反应呈色。（1）甲酮基：黄体酮其他甾体☻黄体酮专属性反应。亚硝基铁氰化钠蓝紫色淡橙色或不显色第十章甾体激素类药物的分析结论：与亚硝基铁氰化钠反应称为碱性硝普钠反应。在碱性条件下进行。（2）亚甲基的反应：硫酸普拉睾酮乙醇间二硝基苯氢氧化钠紫红色第十章甾体激素类药物的分析PPT文档演模板4.酚羟基的呈色反应适用：雌激素类药物。能与重氮苯磺酸发生偶合反应，生成红色偶氮染料。苯甲酸雌二醇H+•+红色第十章甾体激素类药物的分析PPT文档演模板有机氟有机破坏有机氯硝酸—硝酸银5、卤元素的呈色反应呈蓝紫色茜素氟蓝—硝酸亚铈FˉClˉAgCl氯原子结合在母核环上第十章甾体激素类药物的分析6、沉淀反应（1）与碱性酒石酸铜（斐林试液）的沉淀反应（2）氨制AgNO3（多伦试液）的沉淀反应（3）与AgNO3的沉淀反应适用：含炔基的甾体激素类药物（炔雌醇、炔诺酮）。机理：•+•↓•+•HNO3NaOH滴定，电位法指示终点第十章甾体激素类药物的分析PPT文档演模板（4）与HNO3-AgNO3的沉淀反应适用：甾体激素类药物C21位上有氯原子取代，如丙酸氯倍他索。机理：有机氯原子•水解加热无机氯原子环上的氯原子•破坏结合在母核

•

氧瓶燃烧法

•

无机氯原子硝酸—硝酸银AgCl第十章甾体激素类药物的分析PPT文档演模板7、水解产物的反应适用：本类药物C3、C17或C21位上羟基的酯原理：一些甾体激素类药物具有醋酸酯、戊酸酯及已酸酯的结构，可先行水解，根据水解产物来鉴别。结果：醋酸酯水解后生成的醋酸可与乙醇反应，生成有香气醋酸乙酯。戊酸或己酸酯类水解后可生成有特臭的戊酸或己酸，进行鉴别。第十章甾体激素类药物的分析PPT文档演模板（二）酯的水解醇制KOH水解三、制备衍生物测熔点（一）酯的生成•+KOH丙酸睾丸素睾丸素m.p.为150℃~

156℃m.p.为201℃•+第十章甾体激素类药物的分析PPT文档演模板（三）缩氨基脲的生成苯丙酸诺龙缩氨脲m.p.约182℃（分解）H2NCONHNH2炔诺酮HONH2炔诺酮肟m.p.约195℃（分解）醋酸泼尼•松苯丙酸诺龙（四）酮肟的生成第十章甾体激素类药物的分析PPT文档演模板（五）UV-ViS分光光度法240nm左右280nm左右•△４-3-酮

•苯环其他共轭结构原理200-760nm有特征吸收。方法可规定最大吸收波长、A、吸收系数、A大/A小。第十章甾体激素类药物的分析示例第十章甾体激素类药物的分析曲安息龙丙酸倍氯米松•溶剂甲醇乙醇浓度20μg/ml20μg/ml结果判断在238nm处有最大吸收在239nm处有最大吸收，A为0.57～0.60，在239nm与263nm

处的吸收度比值为2.25～2.45结构特征：酚羟基C17

–OHC17

–乙炔基eg1:炔雌醇（六）IR法原料药第十章甾体激素类药物的分析-13300cm-1•ν1590cm-13610cm-1酚羟基3505cm醇羟基1615cm-第十章甾体激素类药物的分析11505cm-1苯环的骨架振动eg2：黄体酮结构特征：△４-3-酮C17-酮基第十章甾体激素类药物的分析1700cm-1νC=O20位酮基1665cm-13位酮基1615cm-1870cm-第十章甾体激素类药物的分析δ1C-H双键七、TLC法八、HPLC应用甾体激素类药物原料与制剂的鉴别甾体激素类药物原料与制剂的鉴别（如：醋酸曲安奈德软膏、醋酸氟轻松软膏）方法对照品法对照品法结果判断要求供试品溶液所显主斑点的颜色和位置与对照品溶液的主斑点相同要求在含量测定项下记录的色谱图中，供试品峰的tR与对照品峰的tR一致第十章甾体激素类药物的分析第三节第十章甾体激素类药物的分析特殊杂质检查一、有关物质的检查杂质来源：原料、中间体、异构体、降解产物以及试剂和溶剂。其他甾体：有些杂质与该甾体激素药物结构类似，也具有一定的药理作用而又互不相同，因此在甾体激素类药物的质量控制中，“其他甾体”的限度检查显得很重要。检查方法：（具有一定分离能力）1、TLC法（自身对照法）判定方法：规定杂质斑点数目规定杂质斑点颜色eg：氢化可的松中其他甾体的检查供试液：本品+氯仿-甲醇（9：1） 浓度：3.0mg/ml对照液：供试液（3.0mg/ml）+氯仿-甲醇（9：1）

60μg/ml层析：供试液对照液点样、展开、斑点检出。判断：供试液如显杂质斑点，不得多于3个，其颜色与对照液的主斑点比较，不得更深。第十章甾体激素类药物的分析≤图A中峰1面积的四分之三2、HPLC法（自身对照法）判定方法：规定杂质峰数目规定杂质峰面积第十章甾体激素类药物的分析二、游离磷酸盐的检查杂质来源：地塞米松磷酸钠生产过程中，由磷酸酯化时残存的过量磷酸盐。方法：对照品比色法第十章甾体激素类药物的分析

结果判断：供试品溶液的吸光度不得大于对照溶液的吸光度。原理：供试液+钼酸铵+1-氨基-2-萘酚-4-磺酸钼蓝740nm三、有机溶剂残留量的检查eg：地塞米松磷酸钠杂质来源：地塞米松磷酸钠生产中，使用大量甲醇和丙酮。方法：GC色谱法结果判断：不得出现甲醇峰，甲醇含量≤0.3％丙酮规定不得过≤5.0%第十章甾体激素类药物的分析氧瓶燃烧第十章甾体激素类药物的分析四、硒的检查杂质来源：地塞米松、氟轻松和曲安奈得等甾体激素类药物，在生产中使用二氧化硒(SeO2)脱氢工艺，药物可能引入杂质硒。方法：药物二氨基萘比色法测定378nm结果判断：供试品溶液的吸光度不得大于硒对照溶液的吸光度（0.005％～0.01％）

。五、雌酮六、乙炔基PPT文档演模板第四节含量测定常用方法容量法比色法荧光法紫外分光光度法气相色谱法高效液相色谱四氮唑盐比色法异烟肼比色法铁-酚试剂比色法第十章甾体激素类药物的分析一、HPLC法

•USP、BP、JP均采用测定对象：甾体激素类药物的原料和制剂。

方法：RP－HPLC（内标法）eg：黄体酮的含量测定第十章甾体激素类药物的分析色谱条件：固定相••ODS，检测波长254nm

流动相 甲醇-水（65:35）内标物 己烯雌酚系统适用性试验：n>1000，R符合规定。测定样品：黄体酮原料、注射液。定量方法：内标法 内标-1第十章甾体激素类药物的分析二、UV-ViS分光光度法（一）UV分光光度法1、△４-3-酮

240nm（±）肾上腺皮质激素雄性激素和蛋白同化激素孕激素2、苯环

280nm（±） 雌激素缺点：专属性不强第十章甾体激素类药物的分析示例：醋酸地塞米松片的含量均匀度检查（1）配制供试液，取10片分别进行测定测定：240nm计算第十章甾体激素类药物的分析有色甲瓒四氮唑盐•C•1•7

•−•α•−醇酮基OH

-（二）比色法1、四氮唑盐比色法（1）原理：肾上腺皮质激素类C17-α－醇酮基强还原性。[H]氯化三苯四氮唑（TTC）三苯甲瓒↓深红第十章甾体激素类药物的分析蓝四氮唑（BT）525nm第十章甾体激素类药物的分析氢氧化四甲基铵供试液对照液•ATTC•2•5℃40～45′•暗（2）方法：对照品法第十章甾体激素类药物的分析（3）影响因素A.

基团对反应速度的影响C11=

O＞C11－OHC21－OH未酯化＞C21-OH酯化B、溶剂和水分的影响以无水乙醇为溶剂，水含量大时，呈色减慢，不超过5％对结果没有影响。C、O2与光线的影响避光、隔绝空气、快速、充N2D、碱的种类及加入顺序以氢氧化四甲基铵的结果最佳加入顺序：皮质激素溶液

•四氮唑盐碱试液第十章甾体激素类药物的分析E.

温度与时间室温（25℃）反应40～45

minF.

干扰物的影响油膏、冷霜等制剂含聚乙二醇、丙二醇、羊毛脂对BT的显色反应有干扰，要先分离后

测定。第十章甾体激素类药物的分析异烟腙（黄）HCl420nm2、异烟肼比色法（1）

原理C3-酮基+异烟肼2H

O肾上腺皮质激素雄性激素蛋白同化激素孕激素第十章甾体激素类药物的分析（2）方法：对照品法异烟肼无水甲醇供试液对照液•A•60•℃暗60′第十章甾体激素类药物的分析（3）影响因素A.反应速度（反应专属性）

C3=O＞C17=O

、C20=O

C11=O

不反应B.溶剂的选择异烟肼盐酸盐→受溶解度的影响无水甲醇无水乙醇对试剂的稳定性好呈色强度较无水乙醇中高对植物油的溶解度小第十章甾体激素类药物的分析C.水分、温度、O2与光线的影响

含水量↑→腙水解↑