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文档简介
第十章
高效液相色谱分析法一、高效液相色谱仪HPLC二、高效液相色谱法的特点featureofHPLC三、流程及主要部件generalprocessandmainassemblyofHPLC第一节
高效液相色谱的特点与仪器highperformanceliquidchromatographfeatureandinstrumentofHPLC2024/1/12一、液相色谱仪器
highperformanceliquidchromatograph2024/1/12液相色谱仪(2)2024/1/12液相色谱仪(3)2024/1/12液相色谱仪(4)2024/1/12二、高效液相色谱法的特点
featureofHPLC
特点:高压、高效、高速高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。2024/1/12三、流程及主要部件
processandmainassemblyofHPLC1.流程2024/1/122.主要部件(1)高压输液泵主要部件之一,压力:150~350×105
Pa。为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相(<10μm),液体的流动相高速通过时,将产生很高的压力,因此高压、高速是高效液相色谱的特点之一。应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性(动画)2024/1/12(2)梯度淋洗装置外梯度:
利用两台高压输液泵,将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合室,混合后进入色谱柱。内梯度:一台高压泵,通过比例调节阀,将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入高压泵中混合。2024/1/12(3)进样装置
流路中为高压力工作状态,通常使用耐高压的六通阀进样装置,其结构如图所示:2024/1/12(4)高效分离柱
柱体为直型不锈钢管,内径1~6mm,柱长5~40cm。发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。2024/1/12(5)液相色谱检测器
a.紫外检测器应用最广,对大部分有机化合物有响应。特点:
灵敏度高;线形范围高;流通池可做的很小(1mm×10mm,容积8μL);
对流动相的流速和温度变化不敏感;波长可选,易于操作;可用于梯度洗脱。
2024/1/12b.光电二极管阵列检测器紫外检测器的重要进展;光电二极管阵列检测器:1024个二极管阵列,各检测特定波长,计算机快速处理,三维立体谱图,如图所示。2024/1/122024/1/12光电二极管阵列检测器2024/1/12c.示差折光检测器
(differentialrefractiveindexdetector)除紫外检测器之外应用最多的检测器;可连续检测参比池和样品池中流动相之间的折光指数差值。差值与浓度呈正比;通用型检测器(每种物质具有不同的折光指数);灵敏度低、对温度敏感、不能用于梯度洗脱;偏转式、反射式和干涉型三种;2024/1/12示差折光检测器2024/1/12d.荧光检测器
(fluorescencedetector)高灵敏度、高选择性;对多环芳烃,维生素B、黄曲霉素、卟啉类化合物、农药、药物、氨基酸、甾类化合物等有响应;2024/1/12请选择内容第一节高效液相色谱的特点与仪器featureandinstrumentofHPLC第二节基本原理与主要分离类型basicprincipleandmainseparatingtype第三节固定相与流动相stationaryphaseandmobilephase
第四节影响分离的因素与操作条件选择factorsinfluencedseparationandchoiceofoperation
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