DB3715-T 11-2022 德州驴鲜精生产与保存技术规程

65.020.30CCS

B

433715 DB

3715/T

—2022德州驴鲜精生产与保存技术规程The

technical

protocol

of

production

and

preservation

for

fresh

semen

of

dezhoudonkey 聊城市市场监督管理局 发

布DB

3715/T

11—2022 本文件按照GB/T

—《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本文件由聊城市农业农村局提出、组织实施并归口。术推广服务中心、聊城市东昌府区畜牧兽医事业发展中心。传良、于杰、李玉华、王守山、刘文强、王涛、王延涛、仲旭琴、张云良、于学山、徐冰昕、申铜飞、侯国生。DB

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11—20221 范围备和耗材。本文件适用于德州驴鲜精生产与保存。2 规范性引用文件文件。GB/T

德州驴NY/T

1234-2018 牛冷冻精液生产技术规程NY/T

3796-2020 马和驴冷冻精液3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1原精

semen采集后未经离心、稀释的精液。3.2鲜精

fresh

semen原精经离心及稀释处理后经检测符合保存条件的精液。3.3精液稀释液

semen

保护并延长精子存活时间、增加精液容量的液体。3.4精液离心液

semen

centrifugatation保护精子在离心时不受损伤并延长存活时间的液体。3.5DB

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11—2022稀释比例

dilution

rate原精与稀释液的体积比。4 基本要求4.1 供精公驴采精训练成功的德州驴公驴。4.2 台畜台畜应选择健壮、性情温顺、无疫病的发情母驴或者仿生假台畜。4.3 采精频率每周2～3控制采精频率并查找原因。4.4 采精时间以3月上旬～7月上旬和8月下旬～11月上旬为宜。4.5 采精场所采精场所要保持宽敞安静、清洁干燥、空气流动平缓顺畅，地面防滑，有防护栏等安全保护措施。4.6 处理室设置有精液质检区、平衡稀释区、分装区、鲜精保存区，室内温度22

℃～

℃，避免光线直射。4.7 器材设备与精液等温。4.8 工作人员上岗前须经专业化培训，工作时着洁净工装，严格按照有关规章制度进行生产活动。5 器械清洗消毒按照NY/T

1234-2018的附录A执行。6 离心液、稀释液配制6.1 离心液、保存液配方参见附录

A。6.2 离心液、保存液配制方法/mL≥40/%≥80/%≥70810

/%≤20DB

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11—2022参见附录

A。7 采精7.1 将待采精公驴牵到采精室内的台驴处，阻止其爬胯

2～3

次，使其阴茎充分勃起。7.2 将公驴阴茎用

℃左右温水清洗干净，用洁净棉布或无菌纸巾擦拭干净或自然晾干。7.3 将假阴道前段

处涂抹润滑剂，并依据公驴阴茎尺寸适当调整假阴道内部压力。7.4 采精员右手持假阴道，假阴道外口端斜朝向地面，站在公驴右前侧。待公驴爬跨时，左手轻扳阴摆动即开始射精。完成射精后，公驴随即而跳下。此时，采精员右手紧握假阴道随公驴阴茎顺势而下，重复使用。8 精液处理8.1 准备接触精液的无菌器皿（包括离心、稀释用玻璃及塑料器材）应提前

2

h

℃恒温箱中，离心液提前

2

h

放在

32

℃～

B。8.2 原精品质原精液品质应符合表

1

的规定。表1 原精质量标准表1 原精质量标准精液外观、采精量、精子密度、精子活率和精子活力测定参照

NY/T

的

～7.5

执行，精子畸形率测定参照

NY/T

3796-2020。8.4 记录原精品质检测登记表参见附录

E。8.5 原精稀释DB

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11—20228.5.1 精液采集后应尽快稀释，放置时间不超过

10

min。8.5.2 向原精液中按

的比例加入离心液，高倍稀释时，先低倍稀释（1:1～1:2），30

s

后再加入余下的稀释液。8.5.3 稀释好的精液在

22

℃条件下避光放置

10

后，按

1850

g/min

表示离心参数）离心

10min～15

min。去除上清液，将各离心管中的粥状精液用保存液进行最后稀释。精液稀释按两步法进行：先加入最终稀释量的

1/4

，经初步稀释的精液先在

22

℃条件下避光放置

，然后，加入剩余的稀释液。8.5.4稀释液总量以体积

V

计，

数值以

mL

表示，

按式（1）计算：X(1)式中：V0

——

采精量

；C

——

精子密度，单位为

108个每毫升（8个）；m

——

精子快速前进活力%；0.7

精液离心后精子的回收系数；s

——

每个分装的精子数，单位为

8个/头份；V1

每头份的体积，单位为毫升（mL）9 精液分装9.1 精液分装采用瓶装或者管装。9.2 装精液用的瓶或管选用对精子无毒且灭菌的一次性塑料制品。9.3 精液分装后，应将包装瓶或管中的空气排空，然后密封。9.4 标明公驴号、生产日期、生产单位和有效保存时间。10 精液保存10.1 盛放精液的包装瓶或袋用

12

15

层纱布（或干毛巾）包严，直接放入

4℃恒温箱内保存。10.2 保存的精液应每隔

h

1

次并作记录，摇动时应轻缓均匀。10.3 稀释后的精液应在

2

d

内用完，超过保质期的精液不能使用。10.4 见附录

D。0.300g0.300g5.000g0.060g0.080gHEPES0.952g15

15

100mLDB

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11—2022

附 录 A（资料性）离心液、保存液配方及配制方法A.1 精液离心液

A

液配方成份表A.1

离心液表A.1

离心液

A

液配方（总体积为

）A.2.1 A液：用校准的电子天平依次称取所需药品，用灭菌超纯水定容至100mL，配置完成后经0.22μ

m滤器过滤除菌，4

℃保存，保存时间不超过14

d。A.2.2 B液：用电子天平称取6g脱脂奶粉，溶解定容至100

，115

℃高压灭菌

，冷却至室温，放冰箱4

℃保存备用，保存时间不超过14

d。A.2.3 A液B液1:1混合即为精液离心液。A.3 精液保存液配方及配制方法A.3.1选取新鲜无疫病鸡蛋，用

%

酒精进行表面消毒，待酒精挥发完毕后抽取内部卵黄；A.3.2 卵黄与离心液混合，

rpm/min离心1

h，去除沉淀，所得混合液为CA.3.3 C液：离心液=1:3~1:7混合，得精液保存液，4

℃保存，保存时间不超过14

d。

CASA5.0

mLDB

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11—2022

附录 B（资料性）驴精液质量检测主要仪器设备及耗材表B.1表B.1

精液处理室配置仪器和用品DB

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11—2022

附 录 C（资料性）精子畸形率检测C.1 抹片BA片呈

35°夹角，将样品均匀地涂布于载玻片上，自然风干，每样品制作二个抹片。图C.1

抹片示意图C.2 固定在已风干的抹片上滴上

mL～2.0

mL

中性福尔马林（浓度

3.2%）固定液（也可将风干后的抹片固定

后用清水缓缓冲去固定液，吹干或自然风干。C.3 染色槽并使抹片接触染液，染色

1.5

h

后用清水缓缓冲去染液，晾干待检。C.4 镜检400

X～600

X

200

20%，若超过应重新制片