《水环境中3,4-亚甲基二氧基甲基苯丙胺（MDMA）和3,4-亚甲基二氧基苯丙胺(MDA)含量的测定 液相色谱-串联质谱法》VIP

3水环境中3,4-亚甲基二氧基甲基苯丙胺(MDMA)和3,4-亚甲基二氧基苯丙胺(MDA)含量的测定液相色谱-串联质谱法本标准规定了水环境样品中3,4-亚甲基二氧基甲基苯丙胺(MDMA)和3,4-亚甲基二氧基苯丙胺(MDA)的测定方法。本标准适用于水环境样品中3,4-亚甲基二氧基甲基苯丙胺(MDMA)和3,4-亚甲基二氧基苯丙胺(MDA)含量的测定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成文本必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T603化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备GB/T6041质谱分析方法通则GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法HJ/T91.1污水监测技术规范3定义3.1水环境waterenvironment水环境是指自然界中水的形成、分布和转化所处空间的环境，是指围绕人群空间及可直接或间接影响人类生活和发展的水体，其正常功能的各种自然因素和有关的社会因素的总体。本文件中的水环境指的是生活污水、工业废水和自然水体（地表水和地下水）。4方法原理参见DB43/TXXXX-2021。5试剂和材料5.1试剂5.1.1通用要求除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂和实验一级用水。本标准中所用试剂和溶液的配制，在未注明规格和配制方法时，均应按GB/T603之规定。45.1.2MDMA和MDA标准溶液(ρ=1mg/ml）：可用标准物质配制或直接购买有证标准溶液。5.1.3MDMA和MDA混合标准储备溶液(ρ=10mg/L将MDMA和MDA的标准溶液用甲醇稀释，配制成浓度为10mg/L的混合标准储备溶液。于0~4℃避光、密封保存，使用时应恢复至室温，并摇匀。5.1.4MDMA和MDA氘代内标标准溶液(ρ=0.1mg/ml可用标准物质配制或直接购买有证标准溶5.1.5MDMA和MDA混合氘代内标储备溶液(ρ=1mg/L）：将MDMA和MDA的氘代内标标准溶液用甲醇稀释，配制成浓度为1mg/L的混合氘代内标储备溶液，于0~4℃避光、密封保存，使用时应恢复至室温，并摇匀。5.1.6MDMA和MDA混合氘代内标使用液①(ρ=40μg/L）将MDMA和MDA混合氘代内标储备溶液用甲醇稀释，配制成浓度为40μg/L的混合氘代内标使用液，于0~4℃避光、密封保存，使用时应恢复至室温，并摇匀。5.1.7MDMA和MDA混合氘代内标使用液②(ρ=400ng/L）：将MDMA和MDA混合氘代内标储备溶液用甲醇稀释，配制成浓度为400ng/L的混合氘代内标使用液，于0~4℃避光、密封保存，使用时应恢复至室温，并摇匀。5.1.8甲醇：质谱级5.1.9乙腈：质谱级5.1.10浓盐酸：优级纯5.1.11甲酸：质谱级5.1.125%氨水甲醇溶液：将浓氨水与甲醇（5.1.8）以5:95的体积比混匀。5.1.1310%甲醇溶液：将甲醇（5.1.8）与水以1:9的体积比混匀。5.1.140.1%甲酸水溶液：将甲酸（5.1.11）和水以1:999的体积比混匀。5.1.15磷酸盐缓冲溶液：称取3.024g磷酸二氢钾和4.053g磷酸氢二钾，到20ml水中，混匀，0~4℃保存。5.1.165%甲醇溶液：将甲醇（5.1.8）与水以5:95的体积比混匀。5.1.17甲酸-甲醇溶液：将500ml甲醇（5.1.8）5.1.18异丙醇+乙腈（1+1）：将异丙醇和乙腈（5.1.9）以1:1的体积比混匀。5.1.19氮气：纯度≥99.99%。5.2材料5.2.1色谱柱：C18反相高效液相色谱柱3.0mm×150mm,2.7µm或其他等效柱。5.2.2固相萃取柱：离线方法固相萃取柱参考型号为WatersMCX3cc/60mg，在线方法的参考型号为OasisHLBDirectConnectHP（2.1mmI.D.×30mmL.,20μm）。5.2.3水系滤膜：0.45μm或0.22μm。5.2.4有机系滤膜：0.22μm。6仪器和设备56.1真空抽滤装置6.2固相萃取装置6.3氮吹浓缩或者真空离心浓缩装置6.4液相色谱-三重四级杆串联质谱仪7分析步骤7.1样品前处理7.1.1离线固相萃取法将待测样品恢复至室温，充分混匀，加入浓盐酸调节pH至小于2。使用水系滤膜过滤，移取滤液50ml，加入100μL混合氘代内标使用液①（5.1.6），混匀后进行固相萃取，固相萃取参数见下表1，萃取完成后将洗脱液置于浓缩装置中40℃浓缩至尽干，用10%甲醇溶液（5.1.13）200uL复溶，过0.22μm有机滤膜，待测。以实验用水为空白样品，空白样品与样品同时、同步骤处理。表1固相萃取条件参数序号步骤溶剂体积(ml)流速(ml/min)1活化432活化水433上样/5014淋洗425洗脱5%氨水甲醇427.1.2在线固相萃取法将待测样品恢复至室温，充分混匀，加入浓盐酸调节pH至小于2。过水系滤膜，移取10ml过滤后水样，加入0.5ml磷酸缓冲盐（5.1.15），混匀，准确移取0.9ml混匀水样，加入400ng/L的混合氘代内标溶液（5.1.7）100μL，混匀后经0.22μm有机滤膜过滤，置于样品瓶中，待测。以实验用水为空白样品，空白样品与样品同时、同步骤处理。7.2仪器检测参考条件7.2.1离线固相萃取法仪器参考条件a)柱温：40℃;b)流动相A相：0.1%甲酸水溶液；c)流动相B相：乙腈；d)流速：0.4ml/min；e)进样量：5µL；6f)洗脱：梯度洗脱，梯度洗脱条件见表2；g)扫描方式：正离子扫描；h)检测方式：多重反应监测；i)MDMA和MDA及其氘代内标的定性、定量离子对和碰撞能量条件见表3。表2离线固相萃取法梯度洗脱条件时间（min）流动相A（%）流动相B（%）0.0095.05.02.0095.05.03.0085.06.0045.055.07.0085.085.00.00.0表3MDMA和MDA及其氘代内标的定性、定量离子对和碰撞能量条件序号母离子（m/z）子离子（m/z）碰撞能(V)13,4-亚甲基二氧基甲基苯丙胺3423,4-亚甲基二氧基甲基苯丙胺-D53433,4-亚甲基二氧基苯丙胺253043,4-亚甲基二氧基苯丙胺-D52530注：对于不同的质谱仪器，参数可能存在差异，测定前应将质谱参数优化至最佳。7.2.2在线固相萃取法仪器参考条件a)柱温：40℃;b)流动相A相：0.1%甲酸水溶液；c)流动相B相：乙腈；d)流速：0.4ml/min；e)洗脱：梯度洗脱，梯度洗脱条件见表4；f)进样量：400µL；g)在线固相萃取条件，萃取液A：水；萃取液B：5%甲醇溶液；萃取液C：甲酸-甲醇溶液；萃取液D：异丙醇+乙腈（1+1）；在线固相萃取程序见表5；h)扫描方式：正离子扫描；i)检测方式：多重反应监测；7j)MDMA和MDA及其氘代内标的定性、定量离子对和碰撞能量条件见表2。表4在线固相萃取法梯度洗脱条件时间（min）流动相A（%）流动相B（%）0.0095.05.05.0095.05.06.0085.09.0045.055.085.085.00.020.000.0表5在线固相萃取程序时间（min）萃取液A（%）萃取液B（%）萃取液C（%）萃取液D（%）流速（ml/min）0.010.00.00.03.02.800.00.00.03.02.840.00.00.03.02.850.00.00.02.05.000.00.00.02.05.010.00.00.02.00.00.00.02.00.00.00.02.00.00.00.02.00.00.00.00.520.000.00.00.00.57.2.3仪器调谐按照仪器使用说明书在规定时间和频次内对液相色谱-三重四级杆串联质谱仪进行仪器质量数和灵敏度校正，以确保仪器处于最佳测试条件。7.2.4标准曲线建立取与样品等量的实验用水，添加混合标准储备溶液（5.1.3），使得MDMA和MDA的浓度为1ng/L、5ng/L、10ng/L、50ng/L、100ng/L、250ng/L、500ng/L，作为标准曲线添加样品，与样品平行操作，得到标准曲线溶液，按仪器条件进样分析，记录保留时间和峰面积，建立标准曲线。7.2.5试样和空白测定试样和空白样品按照与绘制标准曲线相同的仪器分析条件进行测定。8结果计算与表示8.1计算含量8记录标准曲线和样品中目标物与相应氘代内标的保留时间和定量离子对峰面积值，以标准曲线中目标物与相应氘代内标的定量离子对峰面积比为纵坐标、标准曲线中目标物的含量为横坐标进行线性回归，得到线性方程。根据样品中目标物及相应内标的定量离子对峰面积值，按公式（1）计算出样品中目标物的含量。pi=(Y-a)/b