版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领
文档简介
11.220
41DB22 22/T
3366—2022牛中华泰勒虫病检测PCR
吉林省市场监督管理厅
DB22/T
2022前 言本文件按照
GB/T
1.1-2020
定起草。DB22/T
2022牛中华泰勒虫病检测 PCR
法
本文件规定了牛中华泰勒虫病PCR检测方法的试剂或材料、仪器设备、样品、试验步骤、结果判定
GB
19489实验室
theileria
中华泰勒虫(Theileria
sinensis)寄生于牛的红细胞和白细胞中，以发热、贫血、黄疸及体表淋巴结
dNTP（dATP、dCTP、dGTP、dTTP）。
DNA
Marker
分子量标准。
50
加样缓冲液见附录
A.2。
10
mg/mL
A.3。
1%琼脂凝胶见附录
A.4。
阳性对照见附录
A.5。DB22/T
20224.1.10
阴性对照见附录
A.6。4.1.11
质粒
DNA
B。4.1.12
4.1.13
4.2
PCR反应引物序列与浓度见表
1。
PCR
PCR
℃～100
低温高速离心机，12
000
r/min
高压灭菌器，120
电泳仪，电压
V～300
V；电流
mA～400
mA。
微量移液器，单道
L、20
L。
6.1
6.2
Taq
DB22/T
2022
反应体系见表
2。
PCR
在试样
PCR
反应的同时，以无菌双蒸水作为空白对照，并设置阴性对照和阳性对照，各对照
PCR
95
变性
延伸
60
30
7.3
将所有样品、阳性对照、阴性对照和空白对照的PCR产物按编号加入到1%琼脂糖凝胶板的各孔中，将凝胶的边孔中加入DNA
Marker
分子量标准（4.1.4），将凝胶在
150
恒定电压下电泳30
min后，
空白对照、阴性对照无扩增条带，阳性对照出现
887
bp的特异性条带，试验成立，否则应重新检
若被检样品出现
887
DB22/T
2022
0.5
TAE缓冲液（50
TAE缓冲液（50
A.2。
10
10
DB22/T
2022
10
冷却到
50
左右，加入
10
mg/mL
溴化乙锭
10
μL，摇匀，倒入电泳板上，凝固后，4
备用。1%琼脂糖凝胶的制备见表
A.5。
以未感染中华泰勒虫牛血液提取的
DNA
DB22/T
2022
a) 按血液基因组
DNA
DNA；b) 应用牛中华泰勒虫
MPSP
PCR
887
bpc)
d)
Solution
PCR
管中，充分混匀，
16
h；e)
10
50
DH5
30
min，42
70
s，冰浴冷刺激
200
无抗性
LB
37
后，涂布于含有
Amp
LB
培养
12
h；f)
质粒
DNA
DNA；g)
温馨提示
- 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
- 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
- 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
- 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
- 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
- 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
- 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。
最新文档
- Thermo赛默飞Micro17微量小型台式离心机特点
- 2024年石英玻璃纤维纱项目资金需求报告代可行性研究报告
- 低血糖危象应急预案
- 《告别不良生活习惯》课件
- 【语文课件】我们的玩具和游戏
- 【语文课件】技术年表
- 河北省保定市顺平县2024-2025学年九年级上学期期中数学试题
- 陕西省咸阳市三原县2024-2025学年六年级上学期11月期中考试数学试题
- 《母子促进项目总结》课件
- 2024年新高一物理初升高衔接《共点力的平衡》含答案解析
- 土壤板结与改良方法.ppt
- 盘县地域分异汇总
- 完整word版,高压环网柜检验记录
- 建筑工程项目施工企业总包单位考察评价表模板
- 研究35kV变电站线路建设工程技术
- FX挑战题梯形图实例
- 热水供暖设计说明
- 体育特色学校建设方案
- 服装企业生产排期、进度计划表
- 电厂固定资产目录(所有设备)
- 普通介绍信格式参考
评论
0/150
提交评论