丙泊酚对条件恐惧大鼠的抗创伤后应激碍作用及其相关机制研究

丙泊酚对条件恐惧大鼠的抗创伤后应激碍作用及其相关机制研究创伤后应激障碍(Post-traumaticStressDisorder,PTSD)是一种经历异乎寻常的威胁性事件或情境引起的延迟或持久的应激性焦虑精神障碍。PTSD的神经生物学发生机制错综复杂,近年来研究发现NO相关通路与炎症因子、创伤性恐惧记忆的形成和神经元再生障碍关系密切,在PTSD的发生中可能发挥重要作用。丙泊酚(Propofol)作为临床最普遍的静脉麻醉药,其作用机制广泛而复杂,尚有许多非麻醉作用,如抗焦虑、脑保护、抑制脂质过氧化和抗炎调节免疫等多种效应。前期研究发现丙泊酚在大鼠时间依赖性敏化行为(Time-dependentSensitization,TDS)模型和小鼠单程短暂电击模型(Pre-Shock)模型具有抗PTSD作用。本研究旨在探究丙泊酚在经典的条件恐惧这个模型上是否存在抗PTSD效应,并且进一步探讨丙泊酚的抗炎和脑保护作用与炎前因子-iNOS-NO通路、NO-神经突触可塑性通路等PTSD相关机制的潜在关系。本研究拟采用大鼠条件恐惧模型,采用声音线索配对足底电击造成大鼠条件性恐惧应激,通过测试大鼠僵住时间评价丙泊酚抗PTSD效应;行为学测试完成后利用Griess法检测杏仁核和海马内一氧化氮(NO)含量、Western蛋白印迹法检测神经型一氧化氮合酶(nNOS)与损伤型一氧化氮合酶(iNOS)表达水平、Elisa试剂盒检测杏仁核和海马内炎症因子(IL-1β、IL-6和TNF-α)水平、高尔基染色试剂盒评价海马神经元可塑性变化,在细胞水平检验丙泊酚对胶质瘤细胞内NOS的影响及与GABAA受体潜在联系。本研究结果如下:(1)行为学结果显示,与正常对照组相比,消退对照组和消退训练组僵住时间均显著增高(P﹤0.001),与消退对照组相比消退训练组僵住不动时间无统计学差异,提示大鼠条件恐惧造模成功。大鼠恐惧消退训练后第1、4和7d,与消退训练组相比,舍曲林组僵住不动时间显著降低(P﹤0.01);而在恐惧消退训练后第4和7d,丙泊酚(0.3,1.0mg/kg)组僵住不动时间显著低于消退训练组(P﹤0.01)。(2)Griess法检测NO水平结果显示,与正常对照组相比,消退对照组和消退训练组大鼠杏仁核和海马NO水平均显著增高(P﹤0.001),与消退对照组相比消退训练组NO水平无明显差异;与消退训练组相比,舍曲林组和丙泊酚(0.3,1.0mg/kg)组明显减少NO释放(P﹤0.01)。(3)Western蛋白印迹结果显示,与正常对照组相比,消退对照组和消退训练组大鼠杏仁核和海马iNOS、nNOS水平均显著增高(P﹤0.001),与消退对照组相比消退训练组NOS水平无明显差异;与消退训练组相比,舍曲林组和丙泊酚(0.3,1.0mg/kg)组明显下调iNOS、nNOS表达(P﹤0.01)。(4)Elisa试剂盒检测结果显示,与正常对照组相比,消退对照组和消退训练组大鼠杏仁核和海马IL-1β、IL-6和TNF-α水平均显著增高(P﹤0.001),与消退对照组相比消退训练组炎症因子水平无明显差异;与消退训练组相比,舍曲林组和丙泊酚(0.3,1.0mg/kg)组明显降低杏仁核和海马内IL-1β、IL-6和TNF-α水平(P﹤0.01)。(5)海马神经元高尔基染色结果显示,与空白对照组相比较,消退对照组和消退训练组大鼠海马神经元树突长度和分支数、树突棘密度明显减少(P﹤0.001),与消退对照组相比消退训练组神经元树突无明显变化;与消退训练组相比,舍曲林组和丙泊酚(0.3,1.0mg/kg)组明显增加海马内神经元树突长度和分支数、树突棘密度(P﹤0.001)。(6)细胞水平结果显示,丙泊酚能明显抑制胶质瘤细胞内iNOS、nNOS表达水平(P﹤0.01);荷包牡丹碱(50umol/L)拮抗后,能够逆转丙泊酚抑制细胞内iNOS、nNOS的表达水平(P﹤0.05)。以上结果提示,丙泊酚能够