饲料中β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯的测定 高效液相色谱法 编制说明

1根据国家标准化管理委员会《国家标准化管理委员会关于下达2021年第二素酸乙酯的测定高效液相色谱法》，项目主持单位为贵州省兽药饲料检测所。β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯又叫阿朴胡萝卜素酸乙酯、天然橙7号或阿朴酯标组织中沉积率较高，着色效果显著高于β-阿朴-8′-胡萝卜素醛及万寿菊提取物[2-5]。部分文献表明，家禽日粮中添加一定量的β家禽机体免疫力，促进雏禽发育[6-9]。β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯广泛存在于自然界中，主要是青草、紫花苜蓿、-8′-胡萝卜素酸乙酯纯品通常为红紫色的结晶，分子式为C32H44O2，分子量比例会不同，自然界全反式比例为70%-90%），在正图1β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯结构式2提高产品竞争力。我国《饲料添加剂品种目录（2013）》（农业农村部公告第前期调研发现：β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯使用广泛、添加混乱、检测标准缺失、养殖者认知匮乏、不利监管等问题。一是禽饲料中使用广泛。2019年至无饲料中β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯含量检测推荐性国家标准或行业标准，各级准确测定饲料中β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯含量的标准方法，填补技术空白，有发布有农业农村部行业标准《饲料中斑蝥黄的测定高效液相色谱法》（NY/T剂）的国家推荐标准[18]，尚无饲料中β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯含量检测的强制含量。杨梅等[21]采用固相萃取技术处理样品，通过超高效液相色谱-串联质谱法（UPLC-MS/MS）对禽蛋中的斑蝥黄和进行分离和检测。章厉劼等[22]参照饲料中β-阿朴-8′-胡萝卜素醛检测方法，使用甲醇、正己烷和乙酸乙酯提取饲料中的3高效液相色谱法（HPLC）操作简便、检测准确、在实际检测中的定性和定量要求。本研究拟制定《饲料中β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯的测定高效液相色谱法》，采用水分散试样，再用无水乙醇和二氯甲烷提取饲料中的β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯，用固相萃取小柱对目标物进行净化和富集，最后采用反相HPLC法进行分析，用外标法定量试样中顺、反式β-阿朴-8′-标准起草小组，对标准起草工作进行分工，明2021年9月，起草小组系统汇总分析了以前工作过程中广泛查阅和搜集的国内外相关标准和技术资料，通过主要生产厂家的解β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯开展了标准技术要求中规定项目的实验室试验研究工作，制定了饲料中β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯含量测定方法。对试验数据进行整理、分析，撰写标准文本意见，共收到20名专家，99条意见。起草小组根据4术研究院、辽宁省农产品及兽药饲料产品检20001.4－2015《标准编写规则第4部分：试验方法标准》的要求编写。在标2.2方法试验条件研究β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯（纯度≥99.8%）购自瑞士CaroteNature公司。mL）购自美国Agilent公司。分析纯无水乙醇、二氯甲烷、三氯甲烷和光学纯高效液相色谱仪配备二极管阵列检测器（Ultimate3000，美国Thermo美国ThermoScientific公司）、超声波清洗器（KQ-250D，昆山市超声仪器有限公司）、超纯水仪（Millipore，德国EMDMillipore公司）、万分之一天平（AB104-S，瑞士MettlerToledo公司）、十万分之一天平（XSR205DU，瑞士高效液相色谱仪在检测β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯时，需分别检测顺、反式β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯的峰面积进行计算，参考欧洲饲料添加剂生产商协会5（FEFANA）标准《FEFANATaskForceAnalyticaβ-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯色谱峰面积为反式β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯峰面2.2.3色谱条件的选择和优化离度符合要求，峰型较好，但后者成本较高，毒性相对较大，因此选用乙腈-甲流动相比例出峰时间（min）峰面积（mAU*min）峰高（mAU）分离度不对称度理论塔板数来源（95：5）35.29372.871799.542.07饲料中斑蝥黄的测定高效液相色谱法（NY/T2896-2022）超高效液相色谱（90-10）未出峰/////法测定饲料中斑蝥黄和β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯含量方法的研究（95：5）（20：80）16.79313.33767.594383.5037218.74256.830.88饲料中角黄素的高效液相色谱法优化后方法67分别选用WatersSymmetry®C18色谱柱（250mm×4.6mm，粒径5μm）、89的流速，通过检测禽配合饲料阳性添加样品（80mg/kg）色谱图进行顺反β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯分离效果相对较差，因此确定本方法色谱柱柱温），2.2.4样品提取条件的选择和优化因此，试验以10%β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯饲料添加样品名称吸光度质量分数（%）平均值（%）RSD值（%）添加剂10.10020.508添加剂10.10160.509添加剂10.09910.5020.82添加剂10.10040.506添加剂10.10180.5069.94β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯与斑蝥黄理化性质相似，试验选取标准或文献中与《超高效液相色谱法测定饲料中斑蝥黄和β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯含量方法β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯与斑蝥黄等常用着色剂在禽饲料中含量总计不能超过表3不同提取方法提取β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯的情况方法来源主要提取步骤回收率（%）结果分析10%β-阿朴GB/T21516-2008饲料中斑蝥黄的测定高效液相色谱法NY/T2896-2022土鸡蛋中添加剂斑蝥黄的色谱质谱连用检（参考文献）超高效液相色谱法测定饲料中斑蝥黄和β-卜素酸乙酯含量方法的研究（参考文献）饲料中角黄素的高效液相色谱法测定（参考文献）准确称取阳性添加样品5g于250mL棕色容量瓶中，加入10mL预热至60℃的水，水浴超声处理20min。冷却后，加入100mL无水乙醇和100mL三氯甲烷，摇匀后常温水浴超声处理5min，用三氯甲烷定容。准确称取阳性添加样品5g于100mL棕色容量水浴中超声处理5min。冷却后，加入50mL无水乙醇和30mL二氯甲烷，摇匀后常温水浴超声处理20min，用二氯甲烷定容。准确称取阳性添加样品5g于100mL棕色容量瓶中，加入50mL乙腈，超声处理30min。冷却后用乙腈定容。准确称取阳性添加样品2g于50mL离心管中，分别加入水8mL，饱和氯化钠溶液4mL，0.05%乙酸溶液4ml，摇匀，加入提取剂（甲醇、乙酸乙酯、正己烷，体积比为1:1:1）10mL，涡旋2min，然后与5000r/min离心5分钟，用滴管吸取上层萃取液于另一个离心管，再加入提取剂10mL进行萃取，重复3次，合并萃取液后，加入2mL无水乙醇，于40℃下氮气吹干。用甲基叔丁基醚-乙腈(1+9)溶液5.0mL溶解残余物。准确称取阳性添加样品5g于100mL具塞离心管中，加入30mL乙腈和20mL乙腈饱和的正移入分液漏斗中，收集乙腈层，重复1次，合并萃取液后40℃氮吹至2mL，甲醇定容至10mL。88.09.369.78提取试剂比例不适配合饲料，且试剂用量过大较好木质素磺酸盐进行包被，纯乙取。繁琐较差，且操琐用二氯甲烷作为主要提取试剂，但更多文献表明：β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯易溶于三氯甲烷。使用三氯甲烷与二氯甲烷进行对比，分别提取β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯饲料阳性添加样品（80mg/k），取试剂检测结果接近，都能够有效提取饲料中的β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯，但表4二氯甲烷与三氯甲烷提取β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯的情况提取试剂回收率（%）平均回收率（%）二氯甲烷三氯甲烷98.7（2）提取试剂比例优化参照《饲料中斑蝥黄的测定高效液相色谱法》（NY/T2896-2022）中提试验调整不同提取试剂的比例，分别按步骤检测β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯饲料），表5不同比例提取试剂提取β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯的情况提取试剂比例回收率（%）平均回收率（%）水-乙醇-二氯甲烷（15:50:35）乙醇-二氯甲烷（50:50）6.916.676.886.696.906.81水-二氯甲烷（15:85）提取溶液分层，无法定容/二氯甲烷（100）7.187.047.167.02结果表明，β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯表面往往进行包被，二氯甲烷直接提法，分别添加不同温度的水并设置不同超声温度，对β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯饲料阳性添加样品（80mg/kg）进行提取试验，检测结果表7不同超声温度提取β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯的情况提取温度(℃)回收率（%）平均回收率（%）4095.795.8表8不同超声时间提取β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯的情况超声时间（min）回收率（%）平均回收率（%）082.286.292.686.0594.595.296.395.697.895.998.692.793.798.297.72096.6通过回收率比较不同称样质量对检测结果的影响，检测结果见表9，结果表明，表9不同称样质量提取β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯的情况称样质量（g）回收率（%）平均回收率（%）RSD（%）2.597.099.298.852.420.722.233.021.923.324.220.6样品粉碎细度的选择表10不同粉碎细度提取β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯的情况粉碎细度（mm）回收率（%）平均回收率（%）RSD（%）0.4252.40.25090.9104.097.8104.2103.05.7部分文献表明，β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯对光和氧不稳定，为检测提取条件下光照和氧对饲料中β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯是否存在影响，试验配制20无明显影响，不影响饲料中β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯的提取结果，因此无需针 表11β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯在光照和氧条件下稳定性的情况标准品浓度(μg/kg）检测时间（h）峰面积（mAU*min）RSD（%）20088.290220188.859220288.707720388.767520488.827620588.655920688.68300.2320788.686320888.894820988.82562088.83342089.13822089.04702.2.6净化方法的选择和优化气吹干，乙腈复溶后加水稀释，过固相萃取柱，β-阿朴-8′-胡在固相萃取柱上，经50%乙腈水溶液淋洗去除杂质，再用乙腈洗脱β-阿朴-8′-胡表12不同填料固相萃取柱对回收率的影响净化柱种类回收率（%）平均回收率（%）RSD（%）亲水亲脂平衡固相萃取柱2.4C18固相萃取柱87.094.493.998.592.692.34.5中性氧化铝固相萃取柱46.461.643.656.647.051.1取柱进行试验，结果见表13。结果表明，不同规格的净化柱对回收率无较大影净化柱种类回收率（%）平均回收率（%）RSD（%）BondElutPlexa60mg/3mL2.4BondElutPlexa200mg/6mL2.6黄净化方法，试验发现乙腈对β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯同样具有较好的洗脱效表14不同洗脱体积对回收率的影响洗脱体积回收率（%）平均回收率（%）乙腈（3mL）89.287.393.494.498.692.6乙腈（5mL）乙腈（10mL）表15不同氮吹温度对回收率的影响氮吹温度(℃)回收率（%）平均回收率（%）40难以吹干/92.389.086.293.994.391.1复溶液种类回收率（%）平均回收率（%）腈（1:9）液相色谱法》（NY/T2896－2022）一化柱净化，回收率测定结果见表17，结果表明，所选的净化柱规格能够满足检阳性样品含量（mg/kg）回收率（%）平均回收率（%）添加剂预混合饲料试样前处理优化保净化柱不过载，试验对比添加剂预混合饲料阳性添加样品（5mg/kg）净化前标准储备溶液配制标准系列溶液配制将β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯标准储备溶液用乙腈稀释，配制成浓度为0.05标准工作曲线的绘制将β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯系列标准工作溶液依次注入液相色谱仪，以β-素酸乙酯和顺式β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯峰面积之和为纵坐标，绘制标准工作配合饲料、浓缩饲料和精料补充料加入15mL水，混匀，常温超声5min。加入50mL无水乙醇和30mL二氯甲烷，取20mL上层提取液置于50mL离心管中，于8000r/min离心5min，准确吸取上清液5mL（V1）到10mL离心管中，于50℃氮气吹干，用3mL乙腈复溶，再加添加剂预混合饲料和混合型饲料添加剂平行做两份试验。称取试样2.5g（精确至0.1g），置于100mL棕色容量瓶中，加入15mL水，常温超声5min。加入50mL无水乙醇和30mL二氯甲烷，混），取部分提取液至离心管中，于8000r/min离心5min，准确吸取上清液5mL高效液相色谱参考条件b）柱温：30℃;（1）标准系列溶液和试样溶液的测定以保留时间定性，试样溶液中β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯保留时间应与标准系列中浓度相当的β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯标准溶液的保留时间一致，其相对以β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯标准系列溶液浓度为横坐标，色谱峰面积为纵注：色谱峰面积为反式β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯峰面积与1.4倍顺式β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯峰面积之和，1.4为顺式β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯对反式β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯的校正因子。w=……（1）ρ——由标准工作曲线得到的试样溶液中β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯的质量）；）；V1——用于净化的提取液体积，单位为毫）；）；）；2.3方法主要技术指标验证20.0μg/mL和40.0μg/mL标阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯标准系列溶液浓度为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，绘标准品浓度(μg/mL）（反式）峰面积（mAU*min）（顺式）峰面积（mAU*min）顺反式总峰面积（mAU*min）0.050.218700.21870.410200.41020.52.050302.050314.062604.0626520.6487020.64872082.3456082.345640162.37330162.3733开能力，试验称取0.5gβ-阿朴-8′-胡萝），提取试剂—水-乙醇-二氯甲烷（15:50:35）超声提取，稀释后上机检测，检测结表610%β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯饲料添加剂检测情况样品名称β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯含量（%）平均回收率（%）10%β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯饲料添加剂-8′-胡萝卜素酸乙酯饲料添加剂的木质素磺酸盐包被，有效提取饲料中的β-阿补充料检出限为0.15mg/kg，定量限为0.5mg/kg；添加剂预混合饲料检出限为为了验证该方法能够不受其他物质影响，准确的测定出饲料中β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯的含量。在空白样品中分别添加β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯、斑蝥序号峰面积（反式mAU*min）平均峰面积（反式）（mAU*min）RSD（%）128.4965228.4190328.4257429.479928.7528.9531628.4965法进行前处理并上机检测，查看β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯保留时间是否存在干图27配合饲料（蛋鸡）空白样品色谱图图28配合饲料（小鸡）空白样品色谱图图29配合饲料（肉鸡）空白样品色谱图图30配合饲料（蛋鸭）空白样品色谱图图31配合饲料（肉鸭）空白样品色谱图图32复合预混合饲料（蛋鸡）空白样品色谱图图33复合预混合饲料（肉鸡）空白样品色谱图图34配合饲料（猪）空白样品色谱图图35精料补充料（牛、羊）空白样品色谱图图36浓缩饲料（猪）空白样品色谱图图34配合饲料（鱼）空白样品色谱图图38浓缩饲料（蛋鸡）空白样品色谱图图39浓缩饲料（肉鸡）空白样品色谱图图40维生素预混合饲料空白样品色谱图平，确定β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯在配合饲料、浓缩饲料、精料补充料中的添加使用10%β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯饲料添加剂作图41配合饲料（蛋鸡）阳性添加（添加浓度0.5mg/kg）色谱图图42配合饲料（小鸡）阳性添加（添加浓度0.5mg/kg）色谱图图43配合饲料（肉鸡）阳性添加（添加浓度0.5mg/kg）色谱图图44配合饲料（蛋鸭）阳性添加（添加浓度0.5mg/kg）色谱图图45配合饲料（肉鸭）阳性添加（添加浓度0.5mg/kg）色谱图图46复合预混合饲料（蛋鸡）阳性添加（添加浓度5mg/kg）色谱图图47复合预混合饲料（肉鸡）阳性添加（添加浓度5mg/kg）色谱图图48配合饲料（猪）阳性添加（添加浓度0.5mg/kg）色谱图图49精料补充料（牛、羊）阳性添加（添加浓度0.5mg/kg）色谱图图50浓缩饲料（猪）阳性添加（添加浓度0.5mg/kg）色谱图图51配合饲料（鱼）阳性添加（添加浓度0.5mg/kg）色谱图图52浓缩饲料（蛋鸡）阳性添加（添加浓度0.5mg/kg）色谱图图53浓缩饲料（肉鸡）阳性添加（添加浓度0.5mg/kg）色谱图图54维生素预混合饲料阳性添加（添加浓度0.5mg/kg）色谱图添加回收率实验结果上机液浓度在标准曲线的线性范围内，试验结果见表20-33。在0.5-8000mg/kg表20配合饲料（蛋鸡）添加回收试验结果添加浓度（mg/kg）回收率（%）批内平均回收率（%）批内变异系批间平均回收率（%）批间变异系数（n=3，%）5表21配合饲料（小鸡）添加回收试验结果添加浓度（mg/kg）回收率（%）批内平均回收率（%）批内变异系批间平均回收率（%）批间变异系数（n=3，%）5表22配合饲料（肉鸡）添加回收试验结果添加浓度（mg/kg）回收率（%）批内平均回收率（%）批内变异系批间平均回收率（%）批间变异系数（n=3，%）5表23配合饲料（蛋鸭）添加回收试验结果添加浓度（mg/kg）回收率（%）批内平均回收率（%）批内变异系批间平均回收率（%）批间变异系数（n=3，%）5表24配合饲料（肉鸭）添加回收试验结果添加浓度（mg/kg）回收率（%）批内平均回收率（%）批内变异系批间平均回收率（%）批间变异系数（n=3，%）5表25复合预混合饲料（蛋鸡）添加回收试验结果添加浓度（mg/kg）回收率（%）批内平均回收率（%）批内变异系批间平均回收率（%）批间变异系数（n=3，%）5表26复合预混合饲料（肉鸡）添加回收试验结果添加浓度（mg/kg）回收率（%）批内平均回收率（%）批内变异系批间平均回收率（%）批间变异系数（n=3，%）5表27配合饲料（猪）添加回收试验结果添加浓度（mg/kg）回收率（%）批内平均回收率（%）批内变异系批间平均回收率（%）批间变异系数（n=3，%）5表28精料补充料（牛、羊）添加回收试验结果添加浓度（mg/kg）回收率（%）批内平均回收率（%）批内变异系批间平均回收率（%）批间变异系数（n=3，%）5表29浓缩饲料（猪）添加回收试验结果添加浓度（mg/kg）回收率（%）批内平均回收率（%）批内变异系批间平均回收率（%）批间变异系数（n=3，%）5表30配合饲料（鱼）添加回收试验结果（mg/kg）回收率（%）批内平均回收率（%）批内变异系数（n=5，%）批间平均回收率（%）批间变异系数（n=3，%）5表31浓缩饲料（蛋鸡）添加回收试验结果（mg/kg）回收率（%）批内平均回收率（%）批内变异系数（n=5，%）批间平均回收率（%）批间变异系数（n=3，%）5表32浓缩饲料（肉鸡）添加回收试验结果添加浓度（mg/kg）回收率（%）批内平均回收率（%）批内变异系批间平均回收率（%）批间变异系数（n=3，%）5表33维生素预混合饲料添加回收试验结果添加浓度（mg/kg）回收率（%）批内平均回收率（%）批内变异系批间平均回收率（%）批间变异系数（n=3，%）5表34方法耐用性试验结果添加含量（mg/kg）仪器型号检测结果（mg/kg）算术平均值（mg/kg）允许偏差（mg/kg）实际偏差（mg/kg）0.50.4660.5044.710.485≤0.0480.01954.9840.34.845≤0.4840.1354037.882.439.05≤3.9086.784.55≤8.462.152.4标准储备溶液有效期考察将β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯标准储备溶液定量移取分装一份定量分装的储备溶液用乙腈稀释成40μg/mL，再用HPLC测定色谱峰纯度和峰面积，以考察储备溶液在－18℃保存条件下的稳定性。连续测定1个月，检测方式7d检测时间21d28d35d平均值RSD（n=7,%）吸光度0.4970.4960.4960.4960.4960.4970.4960.496mAU*min）169.852170.705169.339171.093169.522171.063170.8730.4相对峰面积（反式，%）99.92099.92099.92099.92099.92099.92099.93099.90.0峰面积（顺式）（mAU*min）0.1290.1300.1360.1380.1360.1290.1390.1343.3相对峰面积（顺式，%）0.0800.0800.0800.0800.0800.0800.0700.0794.8编号样品名称来源结果（mg/kg）1产蛋鸡高峰期配合饲料湖南未检出2小鸡配合饲料贵州未检出3肉用仔鸡中期配合饲料安徽6.794肉中鸡配合饲料II型贵州2.965快大肉大鸡配合饲料贵州4.246肉大鸡配合饲料云南6.707128肥鸡配合饲料广西13.48蛋鸭配合饲料安徽7.379产蛋鸭配合饲料安徽未检出10肉大鸭配合饲料I型贵阳6.5611肥鸭配合饲料安徽未检出12蛋鹌鹑产蛋期配合饲料贵州未检出13蛋鸭自配料河北未检出14肉鸡自配料贵州未检出15蛋鸡产蛋期自配料贵州4.57165%蛋鸡产蛋期复合预混合饲料湖北未检出175%蛋鸡产蛋期复合预混合饲料河南8618蛋鸡产蛋后期复合预混料河北3.85191%肉用仔鸡中期预混料广西未检出20生长育肥猪配合饲料贵州未检出21牛、羊精料补充饲料贵州未检出22乳猪浓缩饲料贵州未检出23鲟鱼配合饲料广东未检出24蛋鸡浓缩饲料贵州未检出25肉鸡浓缩饲料贵州未检出26维生素预混合饲料重庆未检出27龙虾配合饲料湖北未检出28黄颡鱼膨化配合饲料四川未检出度范围时，批内平均回收率为80.4%-间平均回收率为82.2%-108.9%各项技术指标均能满足要求，方法重复性好，定量准确，果五、采标情况，以及是否合规引用或采用国际国外标准七、重大分歧意见的处理经过和依据无八、涉及专利的有关说明饲料中β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯的含量进行有效检测，帮助饲料生产企业控制品,2013(06):440-442.[2]朱基美.β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯及其研究进展[J].广东饲料,2012,21(增刊1):84-86.[3]王海威,王丽辉,粟剑,等.加丽素红、加丽素黄对黄羽肉鸡生长性能及胴体着色的影响[J].饲料博览,2014(01):1-3.[4]CastañedaMP,HirschlerEM,SamsAR.Skinpigmentationevaluationinbroilersfednaturalandsyntheticpigments.Poultryscience.2005,84(1):PP143-