氯沙坦抗动脉粥样硬化作用及其机制的研究

氯沙坦抗动脉粥样硬化作用及其机制的研究

近年来，一些科学家发现了肾精-血管紧张素系统（ras），这参与了动脉硬化（as）的病理过程。然而，ras的主要成分是血管紧张素（a），它促进了单核细胞产生单核细胞趋势的形成。这提出了参与高等教育疾病的新观点。近年来,国外学者用血管紧张素Ⅱ受体Ⅰ型(angiotensinⅡonetypereceptor,AT1R)拮抗剂氯沙坦治疗AS的试验研究已引起广泛的关注。氯沙坦具有抗AS的作用,但国内外的报道结果差异较大。为进一步探讨氯沙坦对AS的疗效,我们用氯沙坦对兔的AS模型进行治疗与观察,报告如下。试验处理与检测实验动物新西兰雄性大白兔24只,体重1.5kg左右,由上海仁济医院动物房喂养。兔动脉粥样硬化模型的建立24只新西兰大白兔购自上海陈行动物实验场,对兔行动脉内膜损伤术。方法为:2%戊巴比妥钠2ml/kg,经耳缘静脉麻醉,常规消毒,分离右股动脉,结扎其远端,阻断近心端血流,切开动脉前壁,向近心端插入4F-Fogarty球囊导管,在导管的后方连接盛有0.4ml生理盐水的1ml注射器,将球囊插入左心室,然后回撤到离主动脉瓣0.5cm处,扩张球囊,拉回导管至股动脉处,回抽注射器,重复三次,取出导管,结扎动脉,缝合皮肤。24只兔随机分为高脂饮食组(Ⅰ)、高脂饮食加氯沙坦(25mg·kg-1·d-1)组(Ⅱ)及正常对照组(Ⅲ)。高脂饮食为除基础饲料喂养外,每天加胆固醇1g,猪油10g,高脂饲料喂养4个月。血管形态学检查采用德国远东蔡司公司KS400图像分析系统分别测定兔动脉内膜、中膜的厚度与面积及各种比值。巨噬细胞免疫组化兔主动脉石蜡切片经脱蜡和水化后,用1%的胰蛋白酶在37℃下消化20min,PBS洗3次,每次5min,然后用3%的过氧化物酶浸泡20min,PBS洗3次,加一抗,4℃过夜,PBS洗3次,加酶标二抗,37℃作用30min,PBS洗3次,加DAB显色3～5min,观察结果。然后用苏木素套染,常规脱水,甘油明胶封片。一抗为小鼠抗兔单核巨噬细胞抗体(RAM11),购自DAKO公司;二抗为酶联羊抗小鼠抗体。DAB显色试剂由博士德公司提供。每组选择5例,采用德国远东蔡司公司KS400图像分析系统,对巨噬细胞阳性面积进行半定量分析(巨噬细胞阳性面积表达率为巨噬细胞阳性面积/内膜面积)。血脂测定采用酶学方法,单位以mmol/L表示。血管主动脉组织AII的测定采用放免法。将主动脉组织用冰冷浴的0.9%NS冲洗,称重,剪碎,移入2ml0.1mol的醋酸中,95℃水浴10min,冷却后制成匀浆,4℃离心12000转,20min,上清液冷冻干燥后待测。试剂盒购自北京北方生物技术研究所。AII的含量以pg/g组织表示。统计学处理方差分析,t检验。对血管内皮及中膜面积的影响各组血脂水平的变化血浆甘油三酯(trigly_cerides,TG)和胆固醇(cholesterol,Ch)喂养前三组之间两两比较,无统计学差异(P>0.05);经4个月喂养,高脂组、氯沙坦组的TG及Ch均明显高于开始时的水平(P<0.05,P<0.001),而对照组无统计学差异(P>0.05)(附表)。氯沙坦对血管病理形态学的影响对照组的血管内膜光滑,光镜下可见内皮细胞呈条索状分布,未见AS改变。而高脂组的动脉内膜增厚、凸凹不平,光镜下观察可见到大量泡沫细胞,呈空泡状,内皮细胞大部分已脱落,少数残存内皮细胞分布不规则;中膜明显增厚,内弹力板断裂。氯沙坦组动脉内膜亦有不规则的增厚,并能看到分布不均匀的脂纹,但AS程度较高脂组减轻,光镜下发现内膜增厚,有泡沫细胞存在。氯沙坦对血管内膜及中膜面积等参数的影响氯沙坦组的内膜厚度(0.29±0.08mm)及内膜面积(1.97±0.55mm2)明显小于高脂组的内膜厚度(0.54±0.11mm)及内、膜面积(4.34±1.14mm2)(P<0.01);内、中膜面积之比(51.99±18.41)及内、中膜厚度之比(0.68±0.22)亦小于高脂组内、中膜面积之比(107.32±26.52)及内、中膜厚度之比(1.31±0.27)(P<0.01)。氯沙坦对巨噬细胞表达的影响对照组血管壁几乎看不到巨噬细胞;而氯沙坦组的巨噬细胞阳性面积(16.54%±4.39%)低于高脂组(22.08%±1.83%)(P<0.05)。主动脉组织AII的含量高脂组动脉壁AII的含量(63.57±7.67pg/g)明显高于氯沙坦组(42.82±10.44pg/g)及对照组的含量(34.10±2.59pg/g)(P<0.05)。抗as的作用RAS、高脂血症等许多因素均与AS的发病有关,但AS发病的详细机制仍不十分清楚。目前治疗尚无十分有效的药物。因AS的发病具有慢性、隐匿性及逐渐进行性加重等特点,而且在AS形成脂点脂纹的早期,临床上一般无任何症状,往往易被忽略;待到纤维斑块形成或复合病变形成后,病人因血管狭窄导致冠脉供血不足出现症状时,血管的硬化已十分明显,病变已很难逆转。故积极探索有效的药物并早期治疗,以逆转或阻带AS的病理过程有十分重要的意义。国外学者在高脂饲养的猴、仓鼠、兔、猪及高血压易感鼠的AS模型中应用ACEI,如开搏通等能明显降低AS的程度。但对AT1R阻滞剂的研究较少,且有些学者的结果存在较大差异。本研究结果显示,经氯沙坦治疗后TG及Ch并无明显差异,而其内膜直径及内膜面积明显低于高脂组,内膜与中膜面积之比亦低于高脂组,表明氯沙坦有明显的抗AS作用。有学者发现氯沙坦(25mg·kg-1·d-1)能减轻兔AS的程度;有学者用低剂量氯沙坦(10mg·kg-1·d-1)并未见效。我们认为氯沙坦在AS的治疗中起重要作用,氯沙坦的剂量不同可能是造成结果差异的主要原因之一,低剂量可能对AS的治疗是无效的。AS的病因异常复杂,高脂血症是一个重要因素,但不是唯一因素。近年RAS与AS发病关系的研究倍受国外关注。RAS不仅存在于循环系统中,组织中亦有AII的存在。目前认为动脉组织中的AII对AS的形成更有意义。AS血管的内皮细胞、平滑肌细胞及巨噬细胞均合成AII,AII可促进单核细胞与内皮细胞的粘附,抑制单核细胞的移动,还可促进单核细胞产生MCP-1,进而使单核细胞移行于内膜下,吞噬脂质,形成泡沫细胞,促进AS的发展。本研究发现,高脂组的主动脉组织AII明显高于氯沙坦组及对照组,而氯沙坦治疗后AII明显减少,与国外的报道基本一致。说明氯沙坦可减少组织AII的形成而起到抗AS的作用。氯沙坦减少AII的原因可能与泡沫细胞进入