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文档简介

实验二DNA的纯化及含量测定2013-09-22DNA的纯化方法:酚/仿抽提与硅柱吸附DNA的检测方法:电泳和紫外DNA的质量判断方法：OD230，260，280，320预备知识实验目的了解DNA纯化的原理及步骤；了解分光光度计法测DNA浓度和纯度的方法及原理。利用RNA酶去除植物组织总核酸中的RNA杂质，用有机溶剂抽提溶液中的蛋白质、多糖及酚类物质，再用95%的预冷酒精沉淀和清洗即可得到较纯的DNA。根据DNA和蛋白质分别在260nm和280nm波长的最大吸收值，即可通过计算由紫外分光光度计测定DNA溶液在260nm和280nmO.D值的比值，确定DNA溶液的纯度。O.D(260)/O.D(280)应等于1.8。若大于1.8，说明溶液中含RNA杂质，可用RNA酶重新处理。若小于1.6，说明溶液中有蛋白质及酚，可用有机溶剂再次抽提。实验原理仪器

紫外分光度计，离心机，移液枪试剂25mg/mL的RNA酶，氯仿—异戊醇（24：1），95%乙醇实验前准备DNA的纯化1.在实验一已提好的植物核酸粗提液中加RNA酶，使最终浓度为50ug/ml，放入37ºC的水浴锅中温浴30min。2.加入等体积的氯仿—异戊醇（24：1）的混合液，充分混匀并于8000转/分的条件离心5min，吸取上清液并加入2倍体积预冷的95%乙醇，轻轻混匀，使DNA析出。3.在4ºC4000转/分的条件下离心5min，去上清液，晾干沉淀，加适量1*TE或无菌水，使DNA溶解。实验步骤用紫外分光光度检测DNA纯度和浓度。1.开启紫外分光光度计预热；2.用无菌水反复冲洗比色皿,并用擦镜纸按照同一方向将比色皿外壁擦拭干净；3.吸取SSC溶液3ml(1ml)加入比色皿，再用移液枪吸取0.1%体积的DNA溶液加入比色皿，并用移液枪反复吹打混匀，注意避免产生气泡；4.将比色皿放入分光光度计进行测定；5.分别记录260nm,280nm波长下的读数。OD260OD280OD260/280DNA的浓度:1OD（260nm）=50（ug/ml）DNA浓度=OD260

×核酸稀释倍数×

50/1000（ug/ul）实验结果1.记录你检测DNA溶液在26

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