磷酸替米考星微球的制备及药物含量测定

磷酸替米考星微球的制备及药物含量测定

托米西诺是一种特殊的抗生素，由前体半合成，以合成泰乐菌素。这是英国elanco在20世纪80年代开发的。它具有很强的抗菌活性。它具有广泛的抗菌谱和较低的耐药性。对猪、支流肺炎、红景天杆菌和猪气喘病有良好疗效。兽医临床常用其磷酸盐,但因磷酸替米考星的适口性较差,影响动物的采食,从而降低药物对疾病的疗效。本试验旨在制备磷酸替米考星微球,掩盖药物的不良苦味,使药物能够更好地应用于临床。1材料和方法1.1药物、试剂和试剂戴安UltiMate3000高效液相色谱仪(美国戴安DIONEX公司)。磷酸替米考星原料药(湖北龙翔药业有限公司,含量≥75%);丙烯酸树脂(德国罗姆公司);司盘80(化学纯)、液体石蜡(化学纯)、石油醚(分析纯)、无水乙醇(分析纯)、吐温(化学纯),均为中国国药集团上海化学试剂有限公司。磷酸替米考星微球,自制。1.2氧化硅微球的制备采用乳液-溶剂蒸发法制备。将丙烯酸树脂溶于无水乙醇配成一定浓度的溶液,将上述溶液缓慢滴入含司盘80(SP80)和二氧化硅的液体石蜡中,40℃水浴搅拌,使无水乙醇挥干,形成固化的微球,离心,用石油醚洗除微球表面的液体石蜡,减压干燥即可。选定对制备微球影响较大的4个因素:搅拌速度(A)、丙烯酸树脂浓度(B)、乳化剂用量(C)以及液体石蜡用量(D),每个因素选定3个水平,按L9(34)正交设计表安排试验设计(表1),筛选出微球最佳制备工艺条件。1.3磷酸替米考星微球的制备磷酸替米考星微球是在空白微球制备工艺的基础上,在丙烯酸树脂的无水乙醇溶液中加入一定量含有植物油的磷酸替米考星作为分散相,按照空白微球制备过程,即得到磷酸替米考星微球。1.4磷酸酶微球的外观观察使用光学显微镜观察磷酸替米考星微球,并用测微尺对其粒径分布进行统计。1.5样品含量测定色谱条件:色谱柱为AgilentExtend-C18(5μm,4.6×250mm),流动相为乙腈-水-四氢呋喃-二丁胺磷酸缓冲液(130∶790∶55∶25)。二丁胺磷酸缓冲液的配置:700mL10%磷酸加入168mL二丁胺中,边加边搅拌,冷却后用85%的磷酸调节pH至2.5,纯水定容至1000mL,即得1mol/L的二丁胺磷酸缓冲液。流动相用前经0.45μm滤膜抽滤,流速为1mL/min。紫外检测,波长为280nm,柱温:30℃。标准曲线制定:精密称取磷酸替米考星原料药500mg,置100mL容量瓶中,加70%乙醇超声使其溶解,定容,摇匀。分别精密吸取适量,用70%乙醇配成浓度为156.25、312.5、625、1250、2500和5000μg/mL的溶液。样品测定进样20μL,记录色谱图,以磷酸替米考星峰面积(y)对相应的磷酸替米考星浓度(x)作线性回归。含量测定方法:称取磷酸替米考星微球0.5g,置于50mL容量瓶中,加70%乙醇超声使其溶解,定容,摇匀。过滤后进样。按外标法以峰面积计算微球中磷酸替米考星的含量。将磷酸替米考星原料样156.25、625和2500μg/mL的系列样,日内各浓度重复进样5次,日间连续测定3d,计算其日内、日间相对偏差。1.6溶出度的测定称取磷酸替米考星微球0.1g,参照中国《中国兽药典》(2010年版)第一部溶出度测定法第一法,以900mL0.02%Tween-20(g/mL)水溶液为释放介质,转速为75r/min,温度为(37±0.5)℃,分别于5min、10min、15min、30min、45min、1h、1.5h、2h、4h、5h、6h、7h、8h、9h、10h、11h和12h时取样5mL(同时补充等体积同温度新鲜溶出介质),依法测定,计算其溶出度。1.7体外释药特性考察取磷酸替米考星微球3批密封于西林瓶中,分别在冰箱(4℃)、室温(25℃)与40℃(RH75%)放置3个月,最后进行外观形态、粒径及其分布、载药量、体外释药特性的考察。2结果与分析2.1无水乙醇的制备由极差R确定主次影响因素及用量为:选取A1B3C2D2为最佳优化工艺。由此确定磷酸替米考星微球的制备工艺为:①取适量的丙烯酸树脂,溶于一定量的无水乙醇;②取适量的磷酸替米考星,加入适量的植物油中,搅拌均匀;③将①加入②中,超声1min,让其充分混匀;④将含有一定量的SP-80的液体石蜡置于40℃水浴,以800r/min的速度进行搅拌,同时缓慢滴入③,继续搅拌1.5h,让无水乙醇挥发完全;⑤搅拌停止后,用石油醚少量多次洗涤所得混悬液,充分洗去液体石蜡,真空抽滤,40℃烘干,即得所制备的磷酸替米考星微球。2.2平均粒径的测定光学显微镜下的磷酸替米考星微球见图1,粒径分布见表2。通过测微尺测定微球的平均粒径(Dav)为10.65μm,粒径7～30μm范围内的微球占总数的96.7%,形态圆整,分散性好,较少黏连。2.3平均回收率及日变化、l标准方程为:y=0.0729x+1.4071,r=0.999。表明药物在156.25～5000μg/mL浓度范围内线性关系良好。测得高、中、低不同浓度添加的平均回收率为99.86%(n=3),日内、日间变异系数分别是1.26%(n=5)和2.07%(n=5)。根据磷酸替米考星的标准曲线回归方程计算,得到磷酸替米考星微球的载药量为(28.36±1.90)%、包封率(99.25±0.50)%(n=3)。2.4融资缓慢期e按1.5法进行溶出度测定,释药曲线见图2。试验结果表明,磷酸替米考星微球12h的释药量为99.76%。药物的释放呈持续缓慢的趋势。磷酸替米考星微球的释药初期为快速释药,0.5h时突释量为10.6%。在该阶段,存在于微球表面的药物较快地释放出来;后期为缓慢释药,存在于丙烯酸树脂微球孔隙中的药物逐渐释放出来。2.5体外释放稳定性考察磷酸替米考星微球在冰箱(4℃)、室温(25℃)与37℃(RH75%)放置3个月,其外观形态、粒径及其分布、载药量、体外释药百分率与考察前均无显著变化,微球稳定性较好。3其他合成药物的包封率目前国内对替米考星进行包被时所选用的包衣主要有β环糊精、淀粉以及明胶,本试验中选用丙烯酸树脂进行包衣,