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文档简介
ICS
CCS
B
DB1308
技术规程2023-02-25
发布2023-03-01
实施承德市市场监督管理局 发
布
本文件按照
第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定本文件起草单位:承德市蔬菜技术推广站、围场满族蒙古族自治县蔬菜环保站、兴隆县工商业联合I
培养用水符合
中规定的三级水，除非另有规定，在培养过程中仅使用分析纯试剂，试
萘乙酸；
g)还原型谷胱甘肽，纯度≥99%；L-谷氨酰胺，纯度≥99%； L-丝氨酸，纯度≥99%；一水吗啉乙磺酸，纯度>99%； 乙醇溶液，75%； 次氯酸钠溶液，5%；m)
硝酸钙溶液，25%；秋水仙碱溶液，0.3%；o)
g、烟酸
g、维生素
g、维生素
g、叶酸
D-生物素
g)
流式细胞仪。
大烧杯：1L；
g)
mm；
B5
g
g
L，
B5
g
L，将培养基
g
L，将培养基
μm
μm
试管、研钵、古式漏
mm～3
mm
先将冲洗干净的花蕾用乙醇表面消毒
s，期间摇动烧杯，烧杯间不要碰撞。然后使用次氯酸钠深度消毒
使用无菌水清洗
min，期间摇动烧杯，充分清洗，此步骤重复操作3次，烧杯间不要碰撞，完成清洗
将消毒过的花蕾放于研钵中，倒入B5液体培养基，液面高出花蕾即可，轻敲研钵，使所有花蕾破裂，花粉释放出即可，加入B5液体培养基定容到
将研磨好的
花蕾液倒入古式漏斗，经400目纱网过滤后，移至
离心管，使用离心机
min，倒掉上清液，倒入
B5液体培养基，将沉淀摇起，定容到10
ml，经3次反复
在纯净的花粉母细胞液中加入
改良1/2NLN培养基，将沉淀摇起垂悬，定容到
mm
改良1/2NLN培养基稀释，并添加活性炭悬浮液
在超净工作台环境下，用眼科镊子将子叶型胚接种至B5固体培养基上。接种后在25℃自然光下培
在超净工作台环境下，取出幼苗，手术刀去除叶片和根区，长柄镊子将剩余组织接种到新的B5固
cm，萌发
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