实验柱色谱分离植物色素

实验2---柱色谱分离植物色素“

理论是系统化、体系化的认识，凡是认识都来源于实践，实践是认识的来源，所以理论不可能脱离实践。我们既要坚持实践第一的观点，在实践中认识和发现真理，在实践中检验和发展真理，又要重视科学理论的指导作用，坚持理论与实践相结合的原则。”01—色谱法▲色谱法起源

当样品随着流动相经过固定相时，因样品中不同组分在两相间的分配不同而实现分离，这样一类分离分析方法被称为色谱法。目前常用的固定相有硅胶、氧化铝等。1903年，俄国植物生理学家和化学茨韦特（M.C.Цвет，1872~1919）发表了第一篇关于色谱法的论文。他在玻璃管的一端塞上一团棉花，在管中填充碳酸钙粉末，再把溶有绿色植物色素的溶液自上而下注入玻璃管中。结果植物色素被碳酸钙粉末吸附，形成不同颜色的色带。他将吸附不同色素的碳酸钙分层取出，再用乙醇作溶剂，从植物色素中提取出叶绿素、叶黄素和胡萝卜素等较纯的组分。茨韦特的柱色谱实验当时并未引起人们的注意。25年后，德国化学家库恩（R.Kuhn，1900~1967）在分离、提纯胡萝卜素异构体和确定维生素的结构时应用了色谱法，并在1938年获得了诺贝尔化学奖。此后，色谱法成为化学家分离、提纯有机化合物的重要方法之一。人们还开发了纸色谱、薄层色谱、气相色谱和高效液相色谱等多种色谱方法。02—高中化学课本实验：粉笔分离菠菜叶中的色素1.

实验用品：无水乙醇或95%乙醇、白粉笔、新鲜菠菜若干；烧杯、量筒、漏斗、滤纸、研钵、玻璃棒、载玻片、天平、铁架台及附件、剪刀。2.

实验原理：菠菜叶绿体中含有胡萝卜素（橙黄色）、叶黄素（黄色）、叶绿素a（蓝绿色）、叶绿素b（黄绿色）等色素，利用色素能溶于有机溶剂的特性，用乙醇来提取叶绿体中的色素，并用粉笔对菠菜中的色素进行柱层析分离。▲柱色谱实验装置3.

实验步骤：称取5g新鲜菠菜叶，去中脉剪碎，置于研钵中，加入10mL无水乙醇，研磨至糊状，继续研磨至溶液呈墨绿色时过滤，滤出杂质，将滤液置于50mL烧杯中，取一支干燥、洁净的白色粉笔，大头朝下置于烧杯底部，约10min后观察并记录实验现象。4.

实验现象：粉笔颜色分段，上段呈黄色，中段呈绿色，下段呈墨绿色。5.

实验结论：菠菜叶中的不同色素在粉笔上的溶解性或吸附能力不同，几分钟后，色素就会随着乙醇在粉笔上的扩散而分离开。【课本出处】2019年人教版新教材2019年鲁科版新教材选择性必修3

第一章第二节研究有机物的一般方法（P14~15）无03—大学化学实践性实验：薄层色谱法分离胡萝卜素▲看起来很高级的厨具和一块被它鱼肉的胡萝卜

1.

实验目的：（1）了解薄层色谱法的原理。（2）学习薄层色谱分离有机化合物的方法和比移值的计算方法。2.

实验用品：（1）仪器：载玻片、层析缸（2）试剂：丙酮、石油醚（30~60℃、60~90℃）、硅胶g（或硅胶GF254）、新鲜胡萝卜、无水Na2SO4、三份柱色谱洗脱液3.

实验原理：胡萝卜素存在于胡萝卜根、南瓜、橘属植物的果皮中，也广泛分布在一般绿叶中。胡萝卜素有α、β、γ三种异构体共存，但β-胡萝卜素含量最高。β-胡萝卜素可被转化为2分子的维生素A，故称为维生素A源。

▲β-胡萝卜素

4.

实验步骤：（1）薄层板的制备：倾注法制备5块薄层板（2.5cm×7.5cm），活化备用。（2）样品的制备：称取5g捣烂的胡萝卜置于50mL三角瓶中，再用10mL丙酮萃取2次，最后用10mL石油醚（30~60℃）萃取2次。合并萃取液转入分液漏斗中，并将混合物与50mL饱和NaCl溶液振荡，分出有机层，再用50mL蒸馏水洗涤2次，分水后用无水Na2SO4干燥（约1h）。滤出溶液，水浴蒸馏除去溶剂，得到固体。固体用少量石油醚（60~90℃）溶解，拌硅胶约1g，备用。▲实验装置▲醚煮胡萝卜▲干燥粗产物▲被煮干的胡萝卜丝和干燥后滞留在瓶中的Na2SO4粉末▲蒸发溶剂，得到较纯的胡萝卜素（3）点样：取3块薄层板，分别在距一端1cm处用铅笔轻轻画一条横线作为起始线，并在线上点两个点作为点样记号。取管口平整的毛细管插入样品溶液中，在三块板起始线左侧分别点实验10所得的三个色带的溶液（毛细管不能混用），同时在右侧点未分离的混合样品。如果样点的颜色较浅，可重复点样，重复点样前必须待前次样点挥发干后进行。样点的直径最好不要超过2mm。▲将薄层板放在广口瓶中展开

（4）展开：待样点干燥后，小心地放入已加入1:9的丙酮-石油醚（60~90℃）溶液的广口瓶中，展开剂的高度约0.5mm即可，不可超过起始线，也不可过少。盖好瓶塞，观察展开剂前沿上升到离薄层板上端约1cm处取出，尽快用铅笔标记展开剂前沿位置。晾干后，测量展开剂前沿和样点距起始线的距离l0和l1，计算Rf值。鉴定混合样中各组分与柱层析所得组分是否相同。分析柱色谱与薄层色谱之间的联系。▲薄层板上的现象5.实验数据：本人实验所得，展开剂前沿距起始线的距