造血细胞检验方法：血象检查及细胞化学染色

第三章造血细胞检验方法

第一节造血细胞形态学第二节细胞化学染色第三节骨髓活体组织检验（自学）第四节血细胞超微结构检验（自学）第五节造血祖细胞培养检验（自学）第六节血细胞遗传学检验（自学）第七节分子血液学检验（自学）下一页目的要求第一节血象及骨髓象检验正常血细胞形态学

血象检验骨髓象检验二、血象检验血涂片检验步骤及内容血涂片检验的重要性（一）血涂片检验步骤及内容计数与分类

至少100个有核细胞，同时注意各种细胞的形态，并要全片观察血涂片中其他部位（尤其尾部等血膜边缘部位）计算结果

计算出各阶段细胞的百分比，并填入骨髓报告单的血涂片栏中血涂片特征描述

一般需要描述涂片中有核细胞总数情况，以何种细胞为主，血细胞形态如何，有无寄生虫及其他明显异常细胞等各系细胞观察内容粒系：NEU数量及形态，如有无原粒、幼粒、棒状小体、毒性改变等形态异常淋系：LYC数量及形态，有无原淋、幼淋及异淋等单系：MON数量及形态，有无原单、幼单、棒状小体等其他有核细胞：有无有核红细胞、浆细胞、巨核细胞、淋巴瘤细胞、吞噬细胞等无核细胞：包括红细胞、血小板。注意红细胞形态、内含物及排列方式；血小板估计数量、聚集性及形态（二）血涂片检验的重要性骨髓象相似而血象有区别

如溶贫、缺铁性贫血和急性失血等骨髓象有区别而血象相似

如传染性淋巴细胞增多症和慢，但前者骨髓中淋巴细胞稍增多，而后者骨髓中淋巴细胞却明显增多。骨髓象变化不显著而血象有显著异常

如传单骨髓象有显著异常而血象变化不显著

如骨髓瘤、脂质代谢障碍性疾病血象中细胞较骨髓中细胞成熟

较易辨认，辅助白血病细胞类型的判断第二节细胞化学染色

CytochemicalStains细胞化学染色是细胞学和化学相结合而形成的一门科学。它以细胞形态学为基础，结合运用化学反应的原理对血细胞内的各种化学物质作定性、定位、半定量分析的方法。以前称为组织化学染色（简称组化）细胞化学染色的作用辅助判断急性白血病的细胞类型辅助血液系统等疾病的诊断和鉴别诊断细胞化学染色的基本步骤固定：包括蒸汽、液体固定，如甲醛、甲醇、乙醇等显示：即有色的沉淀反应。包括偶氮偶联法（酶）、普鲁

士蓝反应（铁）、雪夫反应（糖类）、联苯胺法等复染：目的是显示各种细胞而便于辨认。选择原则：复染

液与沉淀的颜色有明显的反差。如蓝色沉淀→中性

红、核固红，红色沉淀→甲基绿、美兰细胞化学染色的种类铁染色中性粒细胞碱性磷酸酶染色过氧化物酶染色苏丹黑染色酯酶染色过碘酸-雪夫反应酸性磷酸酶染色贫血组合：铁染色NAP染色PAS染色4Fe3++3K4[Fe（CN）6]Fe4[Fe（CN）6]3+12K+骨髓中铁亚铁氰化钾亚铁氰化铁↓（普鲁士蓝）一、铁染色—原理

（ferritinstain）酸性正常人骨髓中的贮存铁主要存在于骨髓小粒（细胞外铁）和中晚红细胞（细胞内铁）中铁染色的结果判断结果判断：阳性产物为蓝色沉淀复染：中性红或核固红骨髓铁：分为细胞外铁和细胞内铁下一页细胞外铁的结果判断（-）无兰色颗粒（+）有少量铁颗粒和铁小珠（++）有多量铁颗粒和铁小珠（+++）有许多铁颗粒和铁小珠，有少量铁小块（++++）有极多铁颗粒和铁小珠，有许多铁小块细胞外铁（－）细胞外铁－颗粒细胞外铁－小珠、块细胞外铁－颗粒、小珠、块细胞外铁－阴性、4＋、污染铁细胞内铁的结果判断Ⅰ型铁颗粒1～2颗Ⅱ型铁颗粒3～5颗Ⅲ型铁颗粒6～10颗或粗颗粒1～4颗Ⅳ型铁颗粒＞10颗或粗颗粒＞5颗环形铁粒幼红细胞（ringedsideroblast）：铁颗粒在5颗以上，其中围绕核周排列1/3以上观察

100个

中幼、晚幼红细胞，计算出细胞内铁阳性率铁粒幼红细胞及铁粒红细胞吞噬细胞铁（弥散、颗粒、小珠、块状）吞噬细胞内的铁铁染色的参考范围细胞外铁（+）～（++），2/3为（++）细胞内铁:阳性率为12%～44%以Ⅰ型为主，少数为Ⅱ型铁染色的临床意义缺铁性贫血：外铁(-)、内铁为0或↓↓铁粒幼细胞贫血：外铁↑↑、内铁↑↑。环形铁粒幼红细胞↑＞15%骨髓增生异常综合征：RARS其环形铁粒幼红细胞＞15%，细胞外铁也常增加其他：溶贫、巨幼贫、再障、多次输血后和白血病等），外铁、内铁↑或N；感染、肝硬化、尿毒症等，外铁↑而内铁↓二、中性粒细胞碱性磷酸酶染色－－原理

(neutrophils)alkalinephosphatase，NAP/AKP

观察100个

中性成熟粒细胞，标本为新鲜血片磷酸萘酚钠碱性磷酸酶萘酚重氮盐PH9.6左右有色沉淀NAP的染色结果结果:出现红色颗粒，仅存在中性成熟粒细胞中结果判断标准及分级:（-）胞浆淡蓝色，无红色颗粒（+）胞浆中有少量红色颗粒，但不超过胞浆总面积的1/4（++）胞浆中有较粗的红色颗粒，占胞浆总面积的1/4～1/2（+++）胞浆中基本上充满红色颗粒，但密度较低（++++）胞浆中充满粗大红色颗粒而呈深红色，甚至掩盖核NAP的积分计算（-）0分10个0×10＝0分（+）1分20个1×20＝20分（++）2分40个2×40＝80分（+++）3分20个3×20＝60分（++++）4分10个4×10＝40分NAP阳性率为90%，积分200分阴性阳性嗜酸性粒细胞单核淋巴1+2+3+4+NAP的参考值及临床意义参考值:积分为30～130分（不需记）临床意义：NAP↑：感染、再障、淋巴瘤、急淋、MPD等NAP↓：CML、PNH、急粒等类白呈强阳性类白CML呈阴性慢粒五、过碘酸-雪夫反应(糖原染色)－－原理

（periodicacid-Schiffreaction，PAS）

过碘酸(periodicacid)乙二醇基双醛基(-CHOH-CHOH)(-CHO-CHO)

有色品红无色品红（shiff）PAS正常血细胞的染色反应-红色

粒系：分化好的原粒至中性分叶核粒细胞均呈阳性反应，并随着细胞的成熟而逐渐增强，阳性呈弥散性、细颗粒状；嗜酸性颗粒呈阴性（间质阳性），嗜碱性颗粒呈阳性单系分化差的原始单核细胞呈阴性，其他阳性，绝大多数阳性呈细颗粒状淋系：大多数呈阴性，阳性率常＜20％，呈粗颗粒或块状巨系均呈阳性，呈颗粒状或块状红系：均呈阴性PAS染色2：小淋巴细胞呈阳性，呈颗粒状（较粗）PAS染色1：1中性中幼粒细胞，呈弥散及颗粒状阳性（较弱）；2中性成熟粒细胞，呈强阳性；3幼红细胞，呈阴性；4淋巴细胞，呈阴性巨核细胞呈阳性PAS的临床意义鉴别红系良恶性疾病：红系恶性疾病中红系可阳性（包括红血病、红白血病、骨髓增生异常综合征），红系良性基本阴性辅助鉴别急性白血病类型：ALL呈粗颗粒状或块状；急粒呈弥散红色或细颗粒状；急单：呈细颗粒状其他细胞：转移性腺癌、戈谢细胞呈强阳性，尼曼-匹克细胞、Reed-Sternberg细胞阴性或弱阳性PAS染色：1和2为有核红细胞，呈阳性；其他有核红细胞呈阴性PAS染色：原始及幼稚淋巴细胞均阳性，呈粗颗粒状、、块状阳性急性淋巴细胞白血病PAS染色：淋巴瘤细胞均阳性，呈粗颗粒状、块状阳性淋巴瘤细胞白血病PAS染色：急单，细颗粒状急单：细颗粒状PAS染色：急粒急性粒细胞白血病PAS染色：M3PAS染色：M3急性早幼粒细胞白血病尼曼-皮克细胞呈弱阳性尼曼-皮克细胞通常同时做酒石酸抑制试验毛细胞的阳性不被酒石酸抑制磷酸AS-BI萘酚ACPAS-BI萘酚六偶氮付品红红色沉淀六、酸性磷酸酶和抗酒石酸酸性磷酸酶染色acidphosphatasestain,ACPACP染色的正常血细胞的染色反应粒细胞、单核细胞、巨核细胞、血小板均呈阳性淋巴细胞、浆细胞、巨噬细胞均呈阳性

ACP染色的临床意义毛细胞白血病:毛细胞呈阳性，