瑶药地不同提取部位降血糖活性研究

瑶药地不同提取部位降血糖活性研究

李树是广西瑶族人民的特产。这是野生牡丹科的一种植物。为了干燥的完整草，在瑶族中被称为“莫翁样”，主要用于治疗“口渴”和“虚弱”等疾病。地菍中所含的主要成分有黄酮类、多糖类、酚类等。本课题组首次对地菍开展了一系列抗糖尿病药效学研究,发现地菍的水提取物可降低高血糖模型小鼠的血糖,具有降血脂作用;地菍的乙醇提取物可显著提高正常小鼠的葡萄糖耐量,但对其空腹血糖无影响。为探寻地菍降血糖作用的主要药效物质基础,本实验采用系统溶剂法分离地菍的不同提取部位,观察各部位对多种高血糖动物模型的降血糖作用,筛选其降血糖有效部位,为进一步研究与开发提供实验依据。1材料表面2方法3结果3.1影响四氧嘧啶致糖尿病小鼠血糖的影响4降血糖活性筛选四氧嘧啶和链脲佐菌素是胰岛β细胞毒剂,常作为建立糖尿病动物模型的造模用药,两者可选择性地使多种动物的胰岛细胞很快呈现不可逆的损坏或坏死,影响胰岛素的分泌,最终导致血糖过高和糖尿病的发生。肾上腺素具有α和β受体激动作用,能促进肝脏及肌肉糖原分解,肌肉中糖酵解生成的乳酸增多,经三羧酸循环糖异生增快,从而使血糖升高,造成急性高血糖。为深入研究地菍降血糖活性组份,本实验以不同极性溶剂依次对地菍乙醇提取物进行萃取,得到石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位。分别建立四氧嘧啶、链脲佐菌素致小鼠糖尿病模型,肾上腺素、高浓度葡萄糖致小鼠急性高血糖模型,对地菍各提取部位进行降血糖活性筛选。研究结果表明,瑶药地菍的乙酸乙酯部位和正丁醇部位均能不同程度降低上述糖尿病或高血糖模型小鼠的血糖,显示出较强的降糖活性,且乙酸乙酯部位给药组小鼠生长状况尤为良好,而石油醚部位对血糖无显著影响。提示乙酸乙酯部位和正丁醇部位为其主要降糖活性部位,尤以乙酸乙酯部位疗效较佳,可能与地菍的降血糖药效物质基础有关,值得深入地研究。1.1实验动物2.1影响四氧嘧啶致糖尿病小鼠血糖的影响健康昆明种小白鼠,体质量18~22g,雌雄各半,由广西中医药大学实验动物中心提供,许可证号:SYXK桂2010-0001。1.2c组的浸膏、口服药物和药物地菍购自广西南宁市小瑶王药店,经本校中药鉴定教研室田辉教授鉴定为野牡丹科植物地菍MelastomadodecandrumLour.的干燥全草。取地菍药材适量,切碎,加95%乙醇浸泡过夜,加热回流提取3次,每次1h,过滤,合并滤液,减压浓缩得总浸膏。总浸膏与硅胶(1∶2)拌样,依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇加热回流萃取,分别浓缩成浸膏,得石油醚部位(得膏率约0.53%)、乙酸乙酯部位(得膏率1.51%)和正丁醇部位(得膏率3.64%),备用。盐酸二甲双胍片,北京四环制药有限公司生产,批号20100414。四氧嘧啶(Alloxan),美国Sigma公司产品,批号BCBB7829。链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ),美国Sigma公司产品,批号031M1287V。盐酸肾上腺素注射液,天津药业集团新郑股份有限公司,批号1009221;口服葡萄糖,广西梧州制药(集团)股份有限公司生产,批号111005。葡萄糖氧化酶法测定试剂盒,四川省迈克科技有限责任公司生产,批号1203021。1.3糖尿病大鼠的分组和给药TU-1901双光束紫外可见光分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司);台式离心机(16K,珠海黑马医学仪器有限公司);旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)。小鼠禁食不禁水24h后,尾静脉注射新鲜配制的四氧嘧啶溶液(60mg/kg),72h后对小鼠(禁食不禁水8h)眼眶后静脉丛采血,分离血清,按试剂盒说明测血糖值,以空腹血糖≥11.0mmol/L的小鼠作为糖尿病模型小鼠,纳入实验。糖尿病小鼠随机分为8组,每组12只,另取12只正常小鼠作为正常对照组,按设计剂量(地菍各提取部位以生药量计)灌胃给药,正常对照组和模型对照组给予等容量生理盐水(20mL/kg),每日灌胃1次,连续10d。末次给药后1h(禁食不禁水8h),小鼠眼眶后静脉丛取血,按试剂盒说明测定血糖值。2.2糖尿病模型小鼠的检测小鼠腹腔注射新鲜配制的链脲佐菌素溶液(150mg/kg),72h后对小鼠(禁食不禁水8h)眼眶后静脉丛采血,分离血清,按试剂盒说明测血糖值,以空腹血糖≥8.0mmol/L的小鼠作为糖尿病模型小鼠,纳入实验。动物分组、给药及检测方法同“2.1”项。2.3照组的盐硝酶管理合格小鼠随机分成9组,每组10只。按设计剂量(地菍各提取部位以生药量计)灌胃给药,正常对照组和模型对照组给予等容量生理盐水(20mL/kg),每日灌胃1次,连续10d。末次给药后1h(禁食不禁水8h),除正常对照组给予等容量生理盐水外,其余各组均腹腔注射盐酸肾上腺素注射液(0.5mg/kg)复制小鼠急性高血糖模型,分别于注射肾上腺素前(0h血糖)和注射肾上腺素0.5h后取血测定血糖值。2.4小鼠血糖检测模型总糖设计小鼠分组与给药方法同“2.3”项。末次给药后1h(禁食不禁水8h),除正常对照组给予等容量生理盐水外,其余各组均灌胃葡萄糖溶液(2.5g/kg)复制小鼠高血糖模型,分别于灌糖前(即0h血糖),灌糖后0.5h、1h和2h,取血测定血糖值。2.5平均血糖含量的测定实验数据均以ue0af±s表示,采用SPSS13.0统计学软件,组间比较用单因素方差分析,P<0.05表示差异有统计学意义。结果如表1所示,与正常对照组比较,四氧嘧啶造模后,各组小鼠血糖值明显升高(P<0.01)。给药10d后,与模型对照组比较,地菍石油醚部位给药组小鼠血糖值无显著差异(P>0.05),地菍乙酸乙酯部位和正丁醇部位给药组小鼠血糖值显著降低(P<0.05或P<0.01),且给予乙酸乙酯部位的小鼠生长状况好于正丁醇部位给药组小鼠。3.2不同强度下p>0.0.1评分比较结果如表2所示,与正常对照组比较,链脲佐菌素造模后,各组小鼠血糖值显著升高(P<0.01)。给药10d后,与模型对照组比较,地菍石油醚部位给药组小鼠血糖值无显著差异(P>0.05),地菍乙酸乙酯部位和正丁醇部位给药组小鼠血糖值降低非常显著(P<0.01)。3.3鼠血糖的变化结果如表3所示,与正常对照组比较,腹腔注射盐酸肾上腺素0.5h后各组小鼠血糖显著升高(P<0.01)。与模型对照组比较,地菍石油醚部位给药组小鼠血糖值无显著差异(P>0.05),地菍乙酸乙酯部位和正丁醇部位则显著抑制盐酸肾上腺素引起的小鼠急性血糖升高(P<0.05或P<0.01)。3.4降糖作用的比较结果如表4所示,与正常对照组比较,模型组小鼠灌胃给予葡萄糖后血糖逐渐升高,到0.5h达到最高峰(P<0.01)。与模型对照组比较,灌胃给予葡萄