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基因扩增纠错后浓度很低的原因基因扩增纠错后浓度很低可能由多种原因引起。下面将介绍几种可能的原因,并提供相关的参考内容。
1.PCR抑制物质:PCR(聚合酶链反应)是一种常用的基因扩增技术,但可能会受到抑制物质的影响,导致扩增后的浓度低。常见的PCR抑制物质包括血液中的抗凝剂、血红蛋白、酶抑制剂和PCR反应体系中的残余污染物等。这些物质可能会抑制PCR反应过程中的酶活性,从而影响扩增产物的浓度。
参考文献:
-Edwards,D.,etal.(1991)."AninhibitorofTaqDNApolymerasefromPyrococcusfuriosus."NucleicAcidsRes.19(18):4783.
-Gong,Q.,etal.(2000)."Anevaluationoffactorsaffectingtheperformanceofreversetranscriptionpolymerasechainreaction."J.ForensicSci.45(1):24-34.
2.DNA质量问题:DNA质量可能会影响扩增的产物浓度。低质量的DNA可能被酶降解或包含抑制剂,使PCR反应产物的浓度降低。DNA质量可以通过比色法、比浓度法、紫外吸收光谱等方法检测。
参考文献:
-Klein,D.,etal.(2019)."AssessmentofDNAqualityandquantityintheusabilityofforensicDNAmethylationassays."Epigenetics14(5):474-485.
-Lindahl,T.(1993)."InstabilityanddecayoftheprimarystructureofDNA."Nature362(6422):709-715.
3.扩增条件不合适:PCR扩增的条件包括温度、酶的浓度、引物的浓度和PCR缓冲液中的离子浓度等。如果这些条件设置不当,可能会导致扩增后的产物浓度很低。正确设置扩增条件至关重要,可以通过优化PCR反应体系来提高扩增产物的浓度。
参考文献:
-Cronin,M.,etal.(2018)."Factorsaffectingreproducibilityofreal-timePCR."BiomolDetectQuantif.14:23-35.
-Tabatabaei,M.,etal.(2020)."EvaluationofprimerconcentrationandPCRconditionsforenhancingaccuracyofmoleculardetectionofTheileriaannulata."VetParasitolRegStudReports12:100197.
4.缺乏特异性:扩增反应中引物的特异性是确保扩增产物浓度的重要因素。如果引物没有特异性,可能会导致非特异性扩增,产生多个不同大小的产物。这将使扩增产物的总浓度降低。
参考文献:
-Chen,Z.,etal.(2018)."AmultiplexPCRassayforthesimultaneousdetectionofthreeunapprovedgeneticallymodifiedriceevents:TT51-1,TT51-1andKMD1."FoodChem.248:91-96.
-Roy,S.,etal.(2019)."TaSCL14,anovelwheat(TriticumaestivumL.)geneparticipatesinreproductiveorgandevelopmentandUV-Bresponse."JBiotechnol.305:10-18.
综上
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