病毒进入细胞的几种感染形式

病毒通过下列不同的方式进入宿主细胞：注射式侵入、细胞内吞、膜融合以及其它特殊的侵入方式。注射式侵入：普通为有尾噬菌体的侵入方式。通过尾部收缩将衣壳内的DNA基因组注入宿主细胞内。细胞内吞：动物病毒的常见侵入方式。经细胞膜内陷形成吞噬泡，使病毒粒子进入细胞质中。膜融合：有包膜病毒侵入过程中病毒包膜与细胞膜融合。直接侵入：大致可分为三种类型⑴部分病毒粒子直接侵入宿主细胞，其机理不明。⑵病毒与细胞膜表面受体结合后，由细胞表面的酶类协助病毒粒体释放核酸进入细胞质中，病毒衣壳仍然留在细胞膜外，将病毒侵入和脱壳融为一体。⑶其它特殊方式。植物病毒通过存在于植物细胞壁上的小伤口或天然的外壁孔侵入，或植物细胞之间的胞间连丝侵入细胞，也可通过介体的口器、吸器等侵入细胞。病毒的侵入噬菌体1952年证明DNA是遗传物质的一种有利的证据就是赫尔希（Hershey）等用同位素磷-32标记T噬菌体的核酸，用硫-35标记它的蛋白质，用这种被标记的病毒来感染不带任何同位素的大肠杆菌。成果证明含硫-35的蛋白完全留在细菌的外面，磷-32标记的核酸被注入细菌体内了。当T4尾部像肌肉那样收缩时，外壳里面的DNA就被挤进细胞体内。它的DNA分子相称长，约50，000纳米，粗纳米，而尾鞘中心的管子直径但是纳米。这样长的DNA要通过这样细的管子完全完全细菌体内看起来也不是件容易的事，但是T4却能在1分钟内就完毕任务。早期人们相信进入体内的只是DNA，不含任何蛋白质，但近来工作证明，有些壳内最里层的蛋白质也随着DNA一起进入细菌，这少量蛋白可能在后来的复制过程中起重要作用。动物病毒进入寄主细胞就采用另外更简便的办法了。当某种外来颗粒与动物细胞接触时，细胞的一种自然反映是把颗粒包进去，发生吞噬现象。某些动物病毒恰恰运用了这种细胞的本能进入细胞。植物细胞与动物细胞的显然不同点之一在于植物细胞有一种由纤维素构成的外壁，能够制止诸多东西进入细胞。假若细胞有了轻微的伤口，则病毒能够从伤口进入。植物的细胞壁也并非无缝可入，在坚硬的纤维素构造中分散有微小的管状突起，叫做外壁连丝，直接与外界沟通。有人认为植物病毒是经外壁连丝入侵的。在自然界，植物病毒的更重要的入侵方式是媒介昆虫在植物上取食时，把病毒直接注入植物体内。把植物细胞的外壁用果胶酶，纤维素酶解决后只剩细胞质膜，叫做原生质球。如用TMV来侵染烟的原生质球，发现细胞也是运用吞噬把病毒包进细胞内的。有外膜的病毒进入寄主细胞内的方式就更为复杂了。人们发现有些病毒如麻疹病毒，在侵染寄主细胞体外培养时，病毒能使细胞发生融合，形成所谓的多核的合胞体。又如当人的和老鼠的组织培养细胞在有仙台病毒存在时也会发生细胞融合现象，形成既含有人细胞核，也含有老鼠细胞核的多核细胞。原来这些病毒的外膜能够与寄主细胞的细胞质膜融合，从而引发细胞的融合。在细胞融合的同时也就把病毒颗粒中的核蛋白芯即核衣壳释放到寄主细胞内。综观病毒进入寄主细胞的方式不难看出，只将核酸注入细胞内的方式但是是某些噬菌体所特有的方式。对动物或植物病毒说来更普遍的方式是整个病毒粒子被细胞吞噬。显然整个粒子被吞噬是有好处的，由于病毒的遗传物质核酸，在细胞内找到适宜的复制场合前，能够被外壳蛋白质保护而不被高等生物内多个多样的核酸酶所降解破坏---------------------------------------------------------------------细胞对病毒的内吞作用细胞膜作为细胞的限制性膜，其作用在于摄入营养物质和排出代谢废物，并维持一种相对恒定的内环境。细胞膜是一种半透性膜，水、气体和小的疏水性分子例如乙醇能自由穿过脂质双层，但大多数代谢物，涉及葡萄糖、ATP、核苷酸、氨基酸和蛋白质，以及某些离子（例如Ca2+、H+、K+、Na+）都不能穿过细胞膜。这些物质通过特定的转运方式进入细胞。离子、糖类和氨基酸普通通过整合膜蛋白的转运进入细胞，而蛋白质和大颗粒（例如某些病毒和细菌）则通过胞吞作用进入细胞。细胞外液中的某些分子（配体）能够通过受体介导的胞吞作用被选择性摄入细胞。在受体介导的胞吞过程中，配体首先与集中于有被小窝中的受体结合；或先与分散在细胞膜表面上的受体结合，再以受体—配体复合体形式快速向有被小窝内集中。有被小窝内表面含有包涵素，其总面积可达细胞表面积的2%以上。随着受体—配体复合体的积累，有被小窝逐步内陷，最后脱离胞膜，形成有被小泡；随即有被小泡脱去包涵素。包涵素回到细胞膜，进行重复运用；而脱去包涵素的囊泡与早期内吞泡（endosome）融合。早期内吞泡膜中的质子泵将质子转运到内吞泡的内部，因而早期内吞泡呈酸性。在内吞泡的酸性条件下，配体与其受体解离，受体通过内吞泡以出芽的方式形成的转运囊泡向细胞膜扩散，与细胞膜融合后进行重新运用，此即受体循环。早期内吞泡的内容物随即被转运到核附近，形成晚期内吞泡。晚期内吞泡与溶酶体融合，其中的配体被酶降解或被释放而在细胞内发挥作用。有时整个配体—受体复合体都达成溶酶体而被降解。对于通过受体介导的胞吞作用这种方式侵入宿主细胞的病毒而言，尽管具体细节有所不同，但大致与普通的受体介导的胞吞过程类似。不同病毒侵入细胞的具体机制将在下文予以讨论。为了维持细胞的完整性以及细胞内的不同功效分区，其它膜性构造与细胞膜的融合必须受到严密的调控，这普通由某些特定的蛋白通过特异性的机制介导。首先，进行融合的膜性构造与细胞膜必须非常靠近。这个过程由两者的整合蛋白的互相作用介导，其中膜性构造上的整合蛋白称为靶蛋白，而细胞膜上的整合蛋白则称为锚定蛋白。随即，膜性构造需要与细胞膜变得更近，两者之间的距离应当在nm之内。为了达成这样短的距离，必须先除去膜表面的水分子，这是一种耗能过程。在哺乳动物细胞中，由一种包含多个亚单位构成的复合体为该耗能过程提供能量，这种复合体被称为融合蛋白机器，其单个亚单位缺少融合活性。靶蛋白和锚定蛋白形成复合体后，募集其它某些能造成膜融合的蛋白，从而完毕膜性构造与细胞膜的融合。在哺乳动物细胞中，这些蛋白被称为N-ethylmaleimide敏感性融合蛋白（N-ethylmaleimidesensitivefusionprotein，NSF）和可溶性NSF附着蛋白（Snaps）。因而，靶蛋白和锚定蛋白又被称为Snap受体或Snares。融合完毕后，复合体发生解离，直到下一次需要时又重新进行装配。细胞就是通过融合蛋白机器的装配和解离而对细胞膜的融合进行所调节。有包膜病毒的包膜与细胞膜的融合是病毒核酸进入宿主细胞的第一步，这种融合过程能够发生在细胞膜，也能够发生在内吞泡膜。在膜的融合过程中，融合蛋白的作用是形成一种称为融合孔的开口。在病毒感染的细胞中能产生大量病毒，病毒融合蛋白不需被回收，而细胞融合蛋白的量则少得多，必须被回收运用。大多数状况下，单个病毒融合蛋白就足以介导膜融合反映，这比细胞的融合蛋白介导的融合反映要简朴某些。病毒上的配体与细胞受体结合后，病毒包膜和细胞膜达成亲密接触。随即，病毒融合蛋白催化并在一起的病毒包膜和细胞膜进行融合。病毒介导的膜融合必须受到亲密调节，避免病毒颗粒聚集并确保膜融合发生在对的的细胞功效区。例如，有的病毒融合蛋白只有在与另某些整合膜蛋白互相作用后，才干含有融合能力；有的病毒融合蛋白需要在酸性环境下才干发生构象变化，从而暴露出融合区。另外，对某些病毒融合蛋白而言，则是通过调节对其前体的剪切来调控其活性。在这种状况下，病毒在达成适宜的细胞部位之前，其融合能力将受到克制；这是由于如果融合蛋白在此之前就被完全剪切的话，那么转运通路中存在的弱酸性条件将可能诱导产生异常的融合反映。有时，还能够通过剪切产生亚稳态的病毒糖蛋白，在条件适宜时即能进行融合活性所需的构象变化。酸催化病毒与细胞膜的融合些有包膜的病毒通过受体介导的内吞作用来完毕病毒包膜与细胞膜的融合，其中研究得最透彻的例子就是流感病毒。病毒首先通过HA糖蛋白与含唾液酸的受体结合，随即病毒—受体复合体通过包涵素（clathrin）依赖的受体介导的胞吞通路而内化。在晚期内吞泡（pH值约为）中，HA在酸性条件的催化下发生构象重排并暴露出融合肽，随即病毒和内吞泡膜融合，并将病毒核蛋白(vRNP）释放入胞质。流感病毒颗粒表面的HA是一种由三个亚单位构成的同三聚体，每个亚单位都涉及两个由双硫键连接在一起的多肽HA1和HA2。这两种多肽是在HA的前体HA0被转运到细胞膜上时，通过蛋白水解作用产生的。HA三聚体可分为杆状的基底部和球状的头部两部分，基底部由3个HA2肽链螺旋缠绕而成；头部较膨大，重要由HA1肽链构成。流感病毒的受体结合部位呈浅口袋状，位于HA三聚体的头部。融合肽位于HA2的氨基末端，埋藏在三聚体杆状构造的交界处，其序列为N-Gly-Leu-Phe-Gly-Ala-Ile-Ala-Gly-Phe-Ile-Glu-Gly-Gly-。对流感病毒天然状态的HA的和酸性条件下的HA的晶体构造的比较研究表明，低pH值能诱导HA发生明显的构象变化。在天然HA中，HA2的第76～126位氨基酸形成一种较大的a-螺旋，第56～75位氨基酸形成半环状构造，而第33-55位氨基酸则形成另外一种较小的a-螺旋。当pH值降至～时，HA2的空间构型发生变化，第40～105位氨基酸形成一种大的a-螺旋，并向前推动约100Å。这就使得原来藏在HA蛋白三维构造内部的融合肽暴露，并靠近细胞膜。移位后的融合肽可插入细胞膜内，进而介导病毒包膜与内吞泡的融合。HA0水解为HA1和HA2两条多肽链是低pH值诱导HA蛋白构象发生变化，从而暴露出融合肽进行融合的先决条件。HA0即使能识别宿主细胞表面的受体，但不能与宿主细胞膜发生融合，故而不含有感染性。将流感病毒的HA与HIV-1和Moloney鼠白血病病毒等逆转录病毒的Env蛋白进行比较时能够发现，尽管这些病毒与细胞膜的融合机制存在着差别，但它们的构造却含有明显的相似性。在这几个病毒中，融合肽都位于三个肽链缠绕而成的螺旋的末端。根据这些病毒的研究成果，能够大致得出病毒包膜中含有融合功效的蛋白的某些普遍特性：（1）含有一种大的a-螺旋，（2）含有七个疏水性的氨基酸重复序列，（3）含有通过特性性缠绕而成的肽链螺旋，且该螺旋与氨基端的融合肽相邻接。无包膜病毒侵入宿主细胞的过程（一）通过破坏内吞泡膜腺病毒感染宿主细胞时，首先通过纤维蛋白羧基端的构造域与其受体结合，继而，五邻体蛋白基座区中的RGD基团与另一种受体—整合素avb3和avb5互相作用。对大多数腺病毒血清型而言，这种作用是随即病毒通过受体介导的内吞作用完毕内化所需的。病毒借助整合素进行细胞内吞的过程需要激活磷脂酰肌醇-3-OH激酶(phosphatidylinositol-3-OHkinase,PI3K)，PI3K再通过激活Ras和Rho信号转导系统，使细胞骨架发生变化来完毕病毒的内化。在腺病毒通过内吞泡的形式从细胞表面对核膜转运的过程中，它通过一系列环节来完毕去包被。在这个过程中，构造蛋白（如纤维蛋白、蛋白IIIa和VIII等）从衣壳中依次解离出来。蛋白VI在酸性的内吞泡中被降解，这可能是由病毒蛋白酶L3/p23完毕的。该蛋白酶位于病毒颗粒的核心，在胞外的氧化性环境中没有活性。在进入内吞泡的还原性环境后，该蛋白酶被激活。并且，五邻体基座区与整合素受体的互相作用能造成五邻体蛋白构象的变化，暴露出蛋白VI上的L3/p23水解位点。在内吞泡酸化后，酸性环境促使五邻体蛋白基座区及蛋白IX也释放出来。五邻体蛋白基座区能介导内吞泡膜的溶解，并将残存的病毒释放入胞质。除了病毒DNA、核心蛋白和少量的六邻体蛋白外，已失去大部分成分的衣壳被锚定在核孔复合体上。随即核蛋白被释放入核，病毒开始转录（图3-4）。腺病毒进入细胞的整个过程，即从开始胞吞到DNA释放入核，在370C时约需30分钟。在此期间，病毒进行了一系列必须的变化。在这些变化中，某些由内吞泡的酸性环境诱导，某些由病毒蛋白酶的作用引发，而另外某些变化例如纤维蛋白的释放则可能是由于衣壳与受体的互相作用所致。腺病毒通过运用五邻体蛋白基座区这种酸激活的膜水解蛋白破坏内吞泡膜的方式来通过细胞膜。(二)通过在细胞膜上形成孔小RNA病毒运用与腺病毒不同的机制来通过细胞膜。脊髓灰质炎病毒与其免疫球蛋白样受体PVR的互相作用使该病毒颗粒失去位于病毒内部的衣壳蛋白VP4，并使衣壳蛋白VP1中普通位于病毒内部的的氨基末端外在化。变化后的脊髓灰质炎病毒颗粒含有疏水性，并且与细胞膜的亲和力增加。VP1的亲脂性氨基末端暴露后插入细胞膜，形成一种孔，将病毒RNA释放到胞质中。现在尚不清晰脊髓灰质炎病毒RNA的释放发生在细胞膜还是在内吞泡中。BafilomycinA1能够克制质子转运到囊泡中，因而能阻断内吞泡的酸化。然而，这种药品对于脊髓灰质炎病毒的感染没有影响。相反，这种药品能完全克制穿透酸化的内吞泡膜而释放到胞质中的病毒对细胞的感染，例如流感病毒、西门利克森林病毒和水疱性口炎病毒等。另外，脊髓灰质炎病毒与其抗体形成的复合体能与体现Fc受体的细胞结合，但不能感染这些细胞。Fc受体能被胞吞，因此脊髓灰质炎病毒与PVR的互相作用是诱导造成病毒去包被的构象变化所需的。(三)通过溶酶体的作用大多数通过受体介导的胞吞作用进入细胞的病毒在囊泡达成溶酶体之前就已经释放到胞质中了。这种现象并不奇怪，由于溶酶体中含有可降解病毒颗粒的蛋白酶和核酸酶。然而，呼肠病毒科家族组员却能够达成溶酶体并运用这些蛋白酶和核酸酶来脱去其衣壳。呼肠病毒是一种二十面对称的双链RNA病毒，其基因组分为10个节段。病毒衣壳是一种双层构造，由8