8第八章-体液蛋白质检验

第八章体液蛋白质检验乐山市中医医院吴林军

人类白蛋白分子

学习目标掌握血浆主要蛋白质的基本特征和功能；急性时相反应蛋白的概念、种类及其主要临床意义；血浆蛋白质的测定原理及其临床意义熟悉

血浆蛋白质功能与分类；常见相关疾病时血浆蛋白质水平的典型变化特征了解

尿液及脑脊液蛋白的检测体液蛋白质检验1血浆蛋白质概述22体液蛋白质检验4第一节概述机体蛋白质：体液蛋白质的检测：机体主要的生物大分子含量：人体固体成分的45%种类：10万，3000~5000种/单细胞功能：生长，代谢、血凝、运动、免疫、信息传递等疾病发生体液蛋白质异常5功能：①营养作用，修补组织蛋白;②维持血浆胶体渗透压：白蛋白维持75%~80%的血浆渗透压；③维持血浆的酸碱平衡，作为PH缓冲系统的一部分：酸性或碱性蛋白质；④运输功能，作为激素、维生素、脂类、代谢产物、离子、药物等的载体；⑤体液免疫防御系统：作为免疫球蛋白与补体等免疫分子；⑥催化作用：酶的本质；⑦代谢调控作用；作为底物，酶或中间产物抑制或激活组织蛋白酶；⑧参与凝血与纤维蛋白溶解；：除Ⅳ因子外均可6分类：依据来源、分离方法和生理功能来源肝生成：绝大多数血浆蛋白质其他组织细胞生成：免疫球蛋白和蛋白类激素7分离方法盐析法：白蛋白/球蛋白（pH7.0半饱和的硫酸铵溶液）电泳法：醋酸纤维素薄膜电泳：6种琼脂糖凝胶电泳：13种聚丙烯酰胺凝胶电泳：30种SDS聚丙烯酰胺凝胶等电双向电泳：300种分辨率增高---+纤维蛋白原醋酸纤维素薄膜8功能分类:蛋白质结合珠蛋白前清蛋白C-反应蛋白α1-抗胰蛋白酶清蛋白纤维蛋白原血浆中几种主要的蛋白质铜蓝蛋白转铁蛋白α1-酸性糖蛋白α2-巨球蛋白癌胚抗原甲胎蛋白血浆蛋白质概述

前清蛋白(prealbumin，PA)由肝细胞合成，因电泳时位于清蛋白前面而得名。PA是由4个亚基形成的四聚体，分子量

54kD，pI=4.7，在血浆中半寿期约12小时PA除可作为组织的修补材料外，还有运载功能。用分辨率高的电泳技术可将PA分成2～3条区带，其中包括两种运载蛋白：①甲状腺素转运蛋白：有调节甲状激腺素代谢的功能，可结合约10%的三碘甲状腺原氨酸（T3）和甲状腺素（T4），对T3亲和力较大，但运输甲状腺激素的作用较甲状腺素结合球蛋白弱；②视黄醇结合蛋白(retinol-bindingprotein，RBP)：可转运视黄醇（维生素A）前清蛋白急性时相反应蛋白测定方法：免疫比浊法／免疫扩散技术。【临床意义】

1.PA分子量小，半寿期短，在营养不良或肝炎早期时，其含量降低往往早于其他血清蛋白质，因此作为早期肝功能损伤的指标，比清蛋白、转铁蛋白具有更高的敏感性2.PA可用来评估营养状况，PA水平在100～150mg/L为轻度缺乏，50～100mg/L为中度缺乏，＜50mg/L为严重缺乏3.PA是负性急性时相反应蛋白，在急性炎症、恶性肿瘤、肝硬化、创伤、肾炎等时，血浆中PA水平均迅速下降。参考值：200—400mg/L。前清蛋白

清蛋白(albumin，Alb)是由585个氨基酸残基构成的单链多肽，分子量66.5kD，

含17个二硫键。pI4～5.8，半寿期15～19天，是血浆中含量最多的蛋白质，约占血浆蛋白总量的57％～68％。在pH7.4的环境中，每分子可带200个以上的负电荷，可作为许多物质的运输载体。Alb由肝细胞合成，但不储存，合成速度受蛋白质摄入量及血浆胶体渗透压的共同调节。正常情况下每天约有360mg的Alb通过肾小球滤过，但大部分（约95%）被肾小管重吸收，在小管细胞中被降解。清蛋白急性时相反应蛋白

测定方法：色素结合法:溴甲酚绿（BCG），溴甲酚紫（BCP）,盐析等。【生理功能】

1.维持血浆胶体渗透压2.营养作用3.维持血液酸碱平衡4.运输和解毒作用

Alb生理功能很广泛，因此肝脏对Alb合成有很强的代偿能力，如肾病综合症时合成量可以增加到正常时的3倍以上。参考值：35-50g/Ｌ清蛋白

铜蓝蛋白(ceruloplasmin，CER或CP)，又称铜氧化酶，位于α2-球蛋白区带，由于含铜而呈蓝色，故名铜蓝蛋白，血浆中铜蓝蛋白携带90%的铜离子。MW=12-16万,1046个aa残基构成的单链多肽，含糖约１０％，每分子铜蓝蛋白可结合６～８个铜原子。主要由肝脏合成，巨噬细胞和淋巴细胞合成少量；pI值为4.4，具遗传基因多态性。

CER是铜的运输形式，同时还具有铁氧化酶活性，可使血液中的Fe2+氧化成Fe3+，只有Fe3+才能结合到转铁蛋白上使铁不具毒性且利于运输，故又称亚铁氧化酶。CER还具有抗氧化的作用，如能催化多酚和多胺类底物氧化CER的稳定性较差，血液离体后，CER可丢失其分子中的铜而发生自行氧化，蛋白质肽链容易被酶水解，因此采集血液标本后应尽快测定，不能立即测定时需置3～4℃下储存，长期储存应置－70℃铜蓝蛋白急性时相反应蛋白测定方法：免疫化学（扩散或比浊）等【临床意义】1.升高

CER属于急性时相反应蛋白，在感染、创伤和肿瘤时血浆含量上升，在急性损伤4～20天达到高峰。在妊娠、口服雌激素类药物时其含量亦有明显增加2.降低

多见于Wilson病，是本病最有价值的诊断指标。此外，重度营养不良、严重肝病及肾病综合征时CER亦多下降参考值：0.21-0.53g/L铜蓝蛋白

转铁蛋白(transferrin，TRF或Tf)又名运铁蛋白，为血浆中主要的含铁蛋白质，由肝及单核吞噬细胞系统合成，分子量约76.5kD，为单链糖蛋白，含糖约6％，pI5.5～5.9，电泳位置在β-区带,半寿期约为7天TRF主要运输由消化道吸收的铁和Hb降解释放的铁，将其运输至骨髓等造血器官，一部分铁以含铁血黄素和铁蛋白的形式储存起来，一部分参与血红蛋白、肌红蛋白等的合成。可逆结合多价离子如Fe,Cu,Zn,Co等，每分子TRF能结合2个Fe3+，相当于每毫克TRF能运输1.25μg铁。机体缺铁时血浆中TRF含量上升，经铁剂有效治疗后可恢复到正常水平。转铁蛋白急性时相反应蛋白测定方法：免疫扩散法，放免法和免疫比浊法等。【临床意义】1.缺铁性贫血时TRF升高，而由于铁利用障碍引起的贫血时TRF正常或降低，血清TRF测定可用于贫血的诊断及贫血类型的鉴别2.TRF是负性急性时相反应蛋白，在急性时相反应时降低；在慢性肝脏疾病、营养不良等疾病时血清TRF含量亦降低3.妊娠、口服避孕药、注射雌激素类药物等可使TRF含量升高参考值：

2.5--4.3g/L(成人)

1.30--2.75g/L(新生儿)转铁蛋白

结合珠蛋白(haptoglobin，Hp)又名触珠蛋白、血红素结合蛋白，两对肽链形成四聚体，有变异体。为一种能与血红蛋白（Hb）进行不可逆结合的糖蛋白，含糖量12%，

电泳时位于α2球蛋白区带，MW85kD，pI4.1，是一种急性时相反应蛋白。Hp在肝脏合成，降解也在肝脏进行，半寿期为3.5～4天Hp的主要功能是在血浆中与红细胞中释放出的游离血红蛋白不可逆结合，形成稳定的Hp-Hb复合物，每分子Hp可结合两分子Hb。Hp-Hb复合物半寿期约90分钟，肝细胞能迅速将复合物从血浆中摄取并分解，分解释出的铁可以再利用，这一作用可以防止Hb从肾丢失，从而为机体有效地保留铁。急性溶血后一周再生恢复。Hp和Hb结合后不能重新被利用。Hp-Hb复合物是一种高效的过氧化物酶，能防止脂类的超氧化作用。需铁细菌的天然抑菌剂。结合珠蛋白急性时相反应蛋白测定方法：电泳法，免疫化学法（扩散,浊度）,化学法等【临床意义】1.升高

Hp为正性急性时相反应蛋白，另外肾病综合征及某些肠道疾病时常常伴有血浆蛋白质的丢失，此时肝脏Hp的合成增加，可使血浆Hp含量升高。某些激素如皮质激素和雄性激素刺激后，也可使Hp合成增加而使血浆含量增高2.降低

主要见于各种血管内溶血性疾病，其降低的程度常与病情轻重相一致。Hp降低是诊断轻度溶血的一项敏感指标。此外，严重肝病患者由于蛋白质合成能力下降，血浆Hp含量亦下降；雌激素可减少Hp的合成，妊娠、口服避孕药等会使血浆Hp含量降低参考值：0.5-2.2g/L结合珠蛋白

α1-抗胰蛋白酶(α1-antitrypsin，α1-AT或AAT)主要由肝脏合成，为一条含394个氨基酸残基的单链多肽，含糖10％～12％，MW51kD，pI4.8,占α1-球蛋白区带显色的90％。AAT是一种具有蛋白酶抑制作用的急性时相反应蛋白，也称丝氨酸蛋白酶抑制物，是血清中最主要的蛋白酶抑制物，其作用占血清中抑制蛋白酶活力的90％以上

AAT对蛋白酶的抑制作用有明显的pH依赖性，在中性和弱碱性环境活性最大，而当pH<4.5时活性基本丧失α1-抗胰蛋白酶急性时相反应蛋白测定方法：免疫化学法，电泳（酸性凝胶电泳或等电聚焦电泳），利用蛋白酶抑制能力测定等。【临床意义】1.升高

AAT作为正性急性时相反应蛋白，在急性炎症、恶性肿瘤、肝硬化、创伤、手术等情况下含量上升，一般24小时后开始升高，3～4天达到峰值。妊娠、长期服用可的松、雌激素类药物也可使血浆AAT含量升高2.降低

血清低AAT可发生于胎儿呼吸窘迫症。AAT缺陷的一些遗传表型常伴有早年(20～30岁)出现的肺气肿。而某些遗传表型还可引起肝细胞损害，有可能引起肝硬化α1-抗胰蛋白酶

α1-酸性糖蛋白(α1-acidglycoprotein，α1-AG或AAG)主要由肝细胞合成，某些肿瘤细胞或脓毒血症时的粒细胞和单核细胞亦可合成。位于α1-球蛋白区带。MW约40kD，含糖约45％，包括等分子的己糖、己糖胺和唾液酸，其中唾液酸占11%－12%。pI2.7～3.5，半寿期为1～3天。AAG分解代谢首先是唾液酸分子的降解，然后蛋白质部分在肝中很快降解消失，与免疫防御功能有关，机制不详；抑制血小板凝集影响胶原纤维形成；参与脂类运输。AAG是主要的急性时相反应蛋白，急性炎症时上升α1-酸性糖蛋白急性时相反应蛋白测定方法：免疫化学法（扩散,浊度）,化学法（间接法），ELISA法等【临床意义】1.升高

急性炎症、恶性肿瘤、肝硬化、创伤、急性心肌梗死等情况下大部分伴有AAG增高，且升高迅速。溃疡性结肠炎时，AAG血浆含量升高是临床诊断最可靠的指标之一。Cushing病或用肾上腺皮质激素治疗等情况使糖皮质激素水平升高也可使血浆中AAG含量增高2.降低

在肝实质病变、营养不良时，由于合成减少而致血中AAG降低；通过尿液丢失，或粪便丢失，也可导致血液中AAG的含量降低；妊娠、口服避孕药等雌激素水平升高的情况亦可导致AAG的合成减少参考值：０.25－2.0g/L。α1-酸性糖蛋白

α2-巨球蛋白(α2-macroglobulin,α2-MG或AMG)由肝细胞及单核吞噬细胞系统合成，是血浆中分子量最大的蛋白质，MW625～800kD，由4个相同的亚基组成，含糖量约8％，pI5.4，半寿期约5天，但与蛋白水解酶结合为复合物后清除速率加快AMG最突出的特性是能与多种分子和离子结合，尤其是能与不少蛋白水解酶（如胰蛋白酶、α-胰蛋白酶、凝血酶、纤维蛋白溶酶等）结合抑制这些酶的活性，起到有选择性的保持某些蛋白酶活性的作用α2-巨球蛋白测定方法：免疫化学等【临床意义】1.升高

肝硬化、糖尿病、自身免疫性疾病、慢性肾炎等疾病时AMG升高；在低清蛋白血症时，为了维持血浆胶体渗透压，AMG也会代偿性的升高；妊娠、口服避孕药亦会引起AMG升高，机制不明另外，婴幼儿及儿童AMG含量约为成年人的2～3倍，可能是一种保护机制2.降低

见于肺气肿、弥散性血管内凝血、甲状腺功能亢进、急性胰腺炎及前列腺癌等疾病参考值：1.31-2.93g/Lα2-巨球蛋白

C-反应蛋白(C-reactiveprotein，CRP)是第一个被认定为急性时相反应的蛋白质。主要由肝细胞合成，分子含５个相同的亚基，亚基间靠非共价键连接成圆盘状多聚体，MW115～140kD，pI6.2，电泳位于r区带。

CRP广泛分布于各部分体液中，如血液、胸腹水、心包液、关节液等处，具有类似抗体的功能，能激活补体，促进粒细胞、巨噬细胞的运动和吞噬，有免疫调理作用，表现炎症反应。对血小板凝聚和血块收缩有抑制作用

CRP不受红细胞、血红蛋白、脂质和年龄等因素影响，是反映炎症、感染及疗效的良好指标

C-反应蛋白急性时相反应蛋白测定方法：半定量沉淀法（早），免疫化学法。【临床意义】CRP升高有临床意义。CRP反应非常灵敏，在疾病发生6～12小时内迅速上升，甚至可达正常时的2000倍。因此，血液中CRP的水平可以及时反映病情变化

但CRP特异性差，不适用于单一疾病的诊断。它的临床价值主要是在组织损伤的筛查和监测，以及判断病人是否感染、评估消炎药物的疗效、诊断疾病复发的可能性测定CRP结合病史有助于某些疾病的随访参考值：＜8.0mg/L（血浆）

C-反应蛋白

纤维蛋白原(Fibrinogen，Fib）由肝脏合成，是纤维蛋白的前体，分子量340kD，pI5.5,半寿期为4～6天

Fib与血浆凝固有关，测定方法一般分三类：①功能测定法；②物理化学法；③免疫测定法。三类方法各有优缺点，因此目前临床还无法对测定方法进行统一纤维蛋白原急性时相反应蛋白【临床意义】1.血浆Fib升高

Fib是一种正性急性时相反应蛋白，很多情况可引起其浓度升高。生理情况下，月经期及妊娠时Fib也可轻度升高2.血浆Fib降低

原发的血浆Fib减少的情况很少见，是罕见的遗传性疾病；继发性Fib减少多是由于纤维蛋白溶解酶溶解纤维蛋白，从而消耗体内原有的Fib所致，如胎盘早剥，分娩时羊水栓塞引起弥漫性血管内凝血；严重的肝实质损伤，导致Fib的合成障碍也会引起血浆Fib降低纤维蛋白原30四、血浆纤维蛋白原测定血浆纤维蛋白原：结构特点：凝血因子Ⅰ，肝合成，MW=3.4万，大分子糖蛋白，pI5.3，α2β2γ2功能特点：参与凝血血凝过程中的作用：

纤维蛋白原纤维蛋白网血凝块纤维蛋白细丝血液凝块构造（红色为红血球，兰色为血小板，黄色为纤维蛋白）31测定方法及特点：1.纤维蛋白原凝块测定法：凝血酶或钙离子原理：纤维蛋白原不溶的纤维蛋白凝块含有NaCl的双缩脲试剂反应

分离2.比浊法：MW纤维蛋白原＞MW球蛋白方法一：pH7.0时，用13.3%的硫酸胺沉淀纤维蛋白原，产生浊度方法二：热比浊法，缓冲盐水稀释后置56℃15min，沉淀纤维蛋白原，450nm下比浊应用：影响因素较多，测定结果不够准确。原理：应用：特异性不高,常使结果偏高.32

3.盐析法：12.5%的亚硫酸钠溶液沉淀纤维蛋白原，分离洗涤加双缩脲显色。4.免疫化学法：免疫电泳、扩散、ELISA应用：较准确,但操作繁杂,费时,影响因素多.应用：特异性不高,常使结果偏高.33临床意义：急性时相反应蛋白，出血性疾病的诊断参考范围:2.0－4.0g/L降低：营养不良、严重肝功损伤、ＤＩＣ、胎盘早期剥离，先天性缺乏等。升高：感染、组织损伤、休克、外科手术后、肾炎、风湿病、恶性肿瘤；放射治疗等

癌胚抗原(carcinoembryonicantigen,CEA)一般情况下是由胚胎胃肠道上皮组织、胰腺和肝合成。是一种多糖蛋白复合物，45％为蛋白质，MW180kD，通常在妊娠6个月内CEA含量增高，出生后血清含量已非常低。正常分泌CEA的组织有：支气管、唾液腺、胆管、胰管、小肠、尿道、前列腺。成人CEA主要是由结肠黏膜细胞分泌到粪便中，每天大约70mg，少量吸收入血癌胚抗原测定方法：免疫化学法（扩散,火箭电泳）,ELISA等【临床意义】1.CEA属于非器官特异性肿瘤相关抗原，分泌CEA的肿瘤大多存在于空腔脏器，如呼吸道、胃肠道、泌尿道等。当CEA＞60μg/L时，可见于结肠癌、直肠癌、胃癌和肺癌。但有些良性疾病(肺气肿、直肠息肉、良性乳腺疾病、溃疡性结肠炎等)CEA也会升高，需要相互鉴别2.CEA值持续升高，表明有肿瘤残存或疾病有进展；肿瘤治疗有效时，CEA会逐渐降低；

CEA水平再次升高往往意味肿瘤的复发3.除血液之外，检测其它体液也可对肿瘤有一定的诊断、辅助诊断、疗效观察及预后判断等作用，如尿液CEA含量测定可作为判断膀胱癌及预后的参考，胆汁和胰液内CEA含量可用于诊断胆道癌和胰腺癌参考值：0-5μg/L(成人)

癌胚抗原

甲胎蛋白(α-fetoprotein，AFP)为甲种胎儿球蛋白的简称。主要来自胚胎的肝细胞和卵黄囊，为一条含有590个氨基酸残基的单链多肽糖蛋白，MW65～70kD，平均为68kD，pI4.7～4.8，半寿期5天。电泳位于清蛋白和α1-球蛋白之间

AFP是胎儿血液中的主要蛋白质，妊娠16周时达到高峰，以后逐渐降低，出生时血液中的浓度仅为高峰期的1%左右，出生后6个月至1年，逐渐降至健康成人水平甲胎蛋白测定方法：免疫化学法（扩散,火箭电泳）,ELISA等【临床意义】1.诊断肝癌

AFP被认为是原发性肝癌的特异性的肿瘤标志物。80％以上原发性肝癌患者血清中AFP含量明显增高，目前在中国、非洲等许多国家都将AFP作为肝癌的筛查指标2.其它肿瘤

AFP含量升高还见于胃癌、肺癌、胰腺癌等肿瘤3.其他疾病

病毒性肝炎、肝硬化等情况下，血清AFP水平也可升高，但95％以上肝硬化患者血清AFP＜200μg/L4.肝癌预后判断

AFP＞500μg/L，胆红素＞34μmol/L的病人预后差，存活期时间短；血清AFP急剧升高提示肝癌转移；术后AFP＞200μg/L提示有残存癌体或有转移5.产前诊断羊水AFP含量测定可用于胎儿产前监测，当羊水AFP高于正常时，提示胎儿畸形或死胎；85％脊柱裂及无脑儿的母体在妊娠16～18周时血液AFP升高，测定母体的AFP有诊断价值，但要和临床信息相结合，以免出现假阳性的错误参考值：20-100μg/L(成人)

<5g/L(新生儿)甲胎蛋白急性时相反应与急性时相反应蛋白在急性炎症、组织损伤、心肌梗死、烧伤等急性疾病时，血浆中许多蛋白质浓度会发生明显改变，有些蛋白质浓度升高，有些蛋白质浓度降低，随着病情的好转，这些蛋白质又逐渐恢复至正常。这种现象称为急性时相反应(acutephasereaction，APR)，而这些浓度发生变化的蛋白质则称为急性时相反应蛋白(acutephaseprotein，APP)。APR是机体防御功能的一部分，APP浓度变化的幅度与以上病理状态的严重程度以及时间进程有关，但缺乏特异性疾病时血浆蛋白质的变化血浆蛋白质概述39急性时相反应蛋白分类：升高：其他６种蛋白质。降低：前白蛋白、白蛋白、转铁蛋白前述除了甲胎蛋白、癌胚抗原、β2－微球蛋白和α2-巨球蛋白以外蛋白质疾病时血浆蛋白质的变化血浆蛋白质急性肝炎肝硬化选择性蛋白质丢失风湿病妊娠期及高雌激素血症前清蛋白（PA）↓↓↓N稍↓清蛋白（Alb）N或↓↓↓N稍↓铜蓝蛋白（CER）—N或↑——↑↑转铁蛋白

(TRF)—↓↓—↑↑结合珠蛋白（Hp）↓N或↓—↑—α1-酸性糖蛋白（α1-AG）N↓↓↑稍↓α1-抗胰蛋白酶（α1-AT）↑↑↑↓—↑↑α2-巨球蛋白（α2-MG）—↑↑↑——α-脂蛋白(α-LP)—↓——↑β-脂蛋白（β-LP）——↑↑——C3—N或↓—↑—纤维蛋白原（Fib）—N——↑↑IgG—↑↓↑稍↓IgA—↑↑↓↑—IgM↑N或↑↑↑—C-反应蛋白（CRP）—N———

几种疾病时血浆蛋白质的变化注：↑为升高，↑↑为明显升高，↓为降低，↓↓为明显降低，

N为正常，—为缺失血浆蛋白质概述血清蛋白质测定脑脊液蛋白质测定体液蛋白质电泳分析尿液蛋白质测定体液蛋白质检验42测定依据：蛋白质测定一般利用蛋白质以下的结构或性质1、元素组成测定：含N稳定；2、重复的肽链结构：具有多个肽键；3、酪氨酸和色氨酸与Folin-酚试剂反应显色或UV吸收；4、与色素结合的能力：与染料以离子键或共价键连接；5、沉淀后借浊度测定：光度计测定；6、光折射测定：折射仪测定。血清蛋白质的测定血清总蛋白测定1.凯氏定氮法

1883年由Kjeldahl首创，根据蛋白质含氮量比较恒定（约占16%）这一元素组成特点，通过测定样品中氮量来换算蛋白质的含量。该法结果准确，精密度高，是TP测定的参考方法，但由于操作复杂、用时长，影响因素较多，目前多用于蛋白质标准物的定值和常规方法的校准2.双缩脲法

是目前实验室测定血清TP的首选方法。测定原理是蛋白质分子的两个肽键(-CO-NH-)在碱性条件下能与Cu2+作用生成紫红色络合物，在540nm波长处有明显吸收峰，吸光度在一定范围内与血清蛋白质的含量成正比，由此计算TP的含量。由于此反应与两分子尿素缩合形成的产物——双缩脲(H2N-CO-NH-CO-NH2)在碱性环境下与Cu2+作用形成紫红色的反应类似，故称为双缩脲反应体液蛋白质检验441.凯氏定氮法－参考标准方法(0.05mgN0.3gpro)消化用浓硫酸将蛋白质消化为硫酸铵；（耗时）

蒸馏用碱性溶液碱化消化液并蒸馏挥发；

吸收用酸性溶液（硼酸）吸收气态氨（使[H+]

）滴定用已标定的无机酸滴（使[H+]恢复），计算总氮量定蛋白（总氮量-非蛋白氮）×6.25=蛋白含量纳氏试剂：碘化汞和碘化钾的碱性溶液与氨反应生成淡黄棕色胶态化合物，其色度与氨氮含量成正比。

原理：452.双缩脲法原理：蛋白质中的肽键（-CONH-）在碱性溶液中能与Cu2+作用而产生紫红色络合物，其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比，而与蛋白质的分子量及氨基酸成分无关。条件：至少含两个肽键（-CONH-）基团才能和Cu2+形成络合物,氨基酸及二肽无反应,三肽以上才能反应。双缩脲生成

加热＋NH322H－180022222N端C端463.酚试剂法原理：蛋白质分子中的酪氨酸残基和色氨酸残基能够和酚试剂中的磷钨酸-磷钼酸反应生成蓝色化合物，

Lowry改良法：在酚试剂中加入Cu2+（75%呈色），提高了呈色的灵敏度，为双缩脲法的100倍左右。474.比浊法原理：

评价及应用：优点：简便不需特殊仪器。缺点：浊度形成的干扰因素多（加试剂方法，反应温度，蛋白絮状沉淀等）

某些酸类（磺基水杨酸等）和血清蛋白质结合产生沉淀，测其浊度，与标准对比，可求蛋白含量。485.染料结合法在酸性环境下，带正电的蛋白质（-NH3+)与染料的阴离子产生颜色反应，使染料的吸收峰改变，可既而用分光光度法比色测定。原理：常用染料：氨基黑，考马斯亮蓝等评价及应用：优点：操作简便，重复性好，灵敏度高，且干扰因素少。缺点：特异性不高；不同蛋白质和染料的结合力不一致，标准物不易确定。

496.紫外分光光度法

蛋白质分子中的酪氨酸和色氨酸等芳香族氨基酸可使蛋白质溶液在280nm处有一吸收峰。可用于测定蛋白质但需避免核酸干扰。（1）Lowry-Kalcker公式蛋白质浓度（mg/ml）=1.45A280-0.74A260

（2）Warburg-Christian公式蛋白质浓度（mg/ml）=1.55A280-0.76A260

原理：50评价及应用：优点：敏感而简便，可保留蛋白生物活性，常用与较纯的酶和免疫球蛋白。需紫外分光光度计及石英比色皿。缺点：各种蛋白质中芳香族氨基酸含量和比例不同；在280nm测定易受游离色aa和酪aa以及尿酸和胆红素的干扰；导致准确性和特异性受影响。措施：在220-225nm波长区域，用0.15mol/l的NaCl稀释1000-2000倍可消除干扰。517.折光测定法

溶解在溶液中的固体可增加溶液的光折射率，在固定波长和温度下，光折射率和血清中蛋白质含量成正比。原理：评价及应用：优点：简便、快速，易掌握，重复性较好，适合临床急诊，体检筛查和胸腹水蛋白质测定。缺点：准确性较差，易受高血脂症，高胆红素血症以及溶血等因素影响，会由于A/G比值变化而产生误差。

血清总蛋白测定【参考区间】健康成年人65～85g/L【临床意义】1.血清TP升高①血液浓缩

严重呕吐、腹泻、高热、大量出汗、休克及慢性肾上腺皮质功能减退等疾病时由于水分丢失而使血液浓缩，TP浓度可明显升高②合成增加

多见于球蛋白合成增加2.血清TP降低①营养不良②合成障碍③血液稀释④丢失过多⑤其它

机体代谢加快、结核、肿瘤等情况时也可能引起TP降低血清蛋白质的测定体液蛋白质检验血清蛋白质的测定血清清蛋白测定测定Alb的方法中，目前实验室应用最广的是染料结合法【原理】在酸性环境下，清蛋白解离带有正电荷，能与带有负电荷的染料结合产生颜色反应，而球蛋白则结合外源性染料很少，因此可以在不分离清蛋白、球蛋白的情况下直接测定血清Alb的含量与Alb结合的染料有多种，其中溴甲酚绿(bromcresolgreen,BCG)和溴甲酚紫(bromcresolpurple,BCP)是最常用的两种，其中溴甲酚绿(BCG)法是测定血清Alb的推荐方法BCG结合法BCP结合法优点灵敏度高，与人及动物标本中的Alb结合力差异不大与Alb以外的血浆蛋白质结合少，干扰小缺点除了与Alb结合外，还可与血清中其他多种蛋白质也可结合灵敏度较低，与动物标本中的Alb结合力相当弱，质控血清多采用动物血清制备，因此应用受限

两种染料结合法测定血清Alb含量的优缺点比较体液蛋白质检验溴甲酚绿541.染料结合法(推荐)原理:血清ALB可通过离子键或疏水键与包括染料在内的各种有机离子结合,而GLB很少结合外源性染料,可在不分离ALB与GLB的情况下直接测定ALB。染料BCGBCP优点缺点易于和非人源性白蛋白结合与白蛋白结合特异性较差与非人源性白蛋白结合力弱与白蛋白结合特异性好在30秒内测可提高特异性55原理:

盐析是由于加入大量的中性盐破坏了蛋白质的水化膜、中和其所带的电荷从而使蛋白质分子聚集而沉淀析出。各种蛋白质的亲水性和带电荷不同，故盐析时所需盐浓度与pH不同。GLB在生理pH下带电荷及水化膜比ALB少，可被较低浓度中性盐沉淀。2.盐析法中性盐：硫酸铵、硫酸钠等563.电泳法操作：醋纤膜电泳染色晾干透明光密度仪扫描洗脱比色染色分离测得蛋白组分百分比计算得出各种蛋白质含量半定量定量574.免疫化学法原理及特点:应用：特异性高,但成本较高,费时,生化检验用的不多.血清蛋白质的测定血清清蛋白测定【参考区间】成人：35～50g/L；4～14岁儿童：38～54g/L【临床意义】1.血清Alb升高

主要见于严重腹泻、呕吐、出汗造成的脱水及休克等原因引起血浆浓缩而导致的假性Alb增高（Alb的绝对值并没有升高）；或者一次性静脉输入过量清蛋白，迄今为止尚未见到真性单纯Alb升高的疾病2.血清Alb降低

临床意义同TP，但许多时候血清Alb与TP降低的程度不一致体液蛋白质检验血清蛋白质的测定血清球蛋白测定目前临床实验室血清球蛋白(globulin，G)的结果多采用计算法，即血清总蛋白与血清清蛋白的差值即为血清球蛋白的含量，并可同时计算出清蛋白与球蛋白的比值，即A/G值，公式如下：球蛋白(g/L)=总蛋白(g/L)－清蛋白(g/L)A/G=清蛋白(g/L)/球蛋白(g/L)【参考区间】20～30g/L；A/G=1.5～2.5/1【临床意义】

血清球蛋白浓度升高可见于：1.自身免疫性疾病，如系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、风湿热等2.炎症或急慢性感染，如病毒性肝炎、结核病、疟疾、麻风病、黑热病、血吸虫病等3.恶性M蛋白血症，如多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、淋巴瘤等球蛋白降低：合