种苗工植物组培实验

种苗工：植物组培实验

COURSENAME编号：13043双击添加标题文字壹贰叁肆总框架伍实验原理培养基器材和药品注意事项实验步骤双击添加标题文字陆实验结果壹实验原理

植物组织培养是指植物的任何器官、组织或细胞，在人工预知的控制条件下，放在含有营养物质和植物生长调节物质等组成的培养基中，使其生长、分化并形成完整植株的过程。其理论依据是植物细胞具有全能性。

组织培养的特点是：取材少，培养材料经济；人为控制培养条件，不受自然条件影响；生长周期短，繁殖率高；管理方便，利于自动化控制。组织培养不但是进行细胞学、遗传学、育种学、生物化学和药物学等学科研究的重要手段；而且在农学、园艺、林业和次生代谢产物工程等生产领域得到广泛的应用。

培养基是植物组织培养中的主要部分，除了培养材料本身因素外，培养基的种类和成分等直接影响培养材料的生长和发育，应根据培养材料的种类和培养部位选择适宜的培养基。培养基的种类很多，不同的培养基有其不同的特点。贰培养基（3）MS基本培养基的配制：分别吸取MS贮备液30.8%的琼脂,3%的蔗糖.1mg/ml的2,4-D溶液：取25mg的2,4-D，加入少量95%的酒精和1N的NaOH溶解，再加蒸馏水定容至250ml。钙、硫、镁（2）植物激素配制：称取10mgNAA,加入少量酒精，并加水定容50ml(浓度为0.1mg/ml的2,4-D溶液：取25mg的2,4-D，加入少量95%的酒精和1N的NaOH溶解，再加蒸馏水定容至250ml。混合已溶解的各种矿质盐时还应该注意加样顺序。（1）打开灭菌锅盖，向锅内加水。2％氯化汞（升汞）液中消毒灭菌10min后,再用无菌水冲洗3—4次。（1）打开灭菌锅盖，向锅内加水。0ml)，然后加入MS基本培养190ml，搅拌均匀后，用10%的NaOH调节pH至5.玉米素应该溶于95%的乙醇中再定容。1N盐酸,1NNaOH,0.培养基的主要成分：水无机成分：无机大量元素氮：铵态氮、硝态氮混合磷：磷酸盐钾：钾盐钙、硫、镁无机微量元素主要有：铁、硼、锰、锌、铜、钼、钴、氯有机成分：糖、维生素、肌醇、氨基酸及有机附加物。植物生长调节物质：生长素类：NAA、IAA、IBA、2,4-D细胞分裂素类：BAP,KT，TDz，ZT其他类：GA3,ABA，PP333琼脂pH值

配制培养基最方便的方法是预先配制不同组分的培养基母液，贮藏在冰箱，待配制培养基时取出，按比例稀释。配制母液时为了减少工作量可以把几种药品配在同一母液中，但是应该注意各种化合物的组合以及加入的前后顺序，应该把钙离子、锰离子、钡离子和硫酸根和磷酸根例子错开，以免发生沉淀。把每种试剂单独溶解后再加入后一种化合物。混合已溶解的各种矿质盐时还应该注意加样顺序。2O）和7.45g乙二胺四乙酸二钠（Na2-EDTA）溶于1L水中，用时每配1L培养基，取该溶液5ml。IAA、IBA、NAA等可用少量的乙醇溶解，然后在加水定容。2,4-D可用1N的NaOH溶解然后再定容；KT和6-BA应先定容于少量的1mol/L的HCl中，再加水定容。玉米素应该溶于95%的乙醇中再定容。pH值对培养基的凝固情况和植物材料的生长有很大的影响，因此，等培养基配好后，应该立即调整培养基的pH,最好用酸度计，既快又准。培养基配好后应该立即分装，体积一般为容器的1/4或者1/3为好。pH值对培养基的凝固情况和植物材料的生长有很大的影响，因此，等培养基配好后，应该立即调整培养基的pH,最好用酸度计，既快又准。细胞分裂素类：BAP,KT，TDz，ZT玉米素应该溶于95%的乙醇中再定容。0ml)，然后加入MS基本培养190ml，搅拌均匀后，用10%的NaOH调节pH至5.5mg/L,1mg/L,2mg/L所需要的体积为：1.1mg/ml的2,4-D溶液：取25mg的2,4-D，加入少量95%的酒精和1N的NaOH溶解，再加蒸馏水定容至250ml。管理方便，利于自动化控制。物品不要近靠锅壁，以免冷凝水顺壁流入物品中。2mg/ml),用同样的方法配制2，4-D母液。1MS培养基储备液的配制组织培养不但是进行细胞学、遗传学、育种学、生物化学和药物学等学科研究的重要手段；IAA、IBA、NAA等可用少量的乙醇溶解，然后在加水定容。钾：钾盐其理论依据是植物细胞具有全能性。1mg/ml的2,4-D溶液：取25mg的2,4-D，加入少量95%的酒精和1N的NaOH溶解，再加蒸馏水定容至250ml。（5）用解剖刀将胡萝卜切去表皮和中柱，取皮层，切成0.叁器材和药品高压蒸汽灭菌锅、洁净工作台、循环水式真空泵、电子天平、酸度测定仪、光照培养箱,搪瓷杯、搪瓷盘、100ml三角烧瓶（12个/组）、250ml三角瓶（2个/组）、试剂瓶、解剖刀柄与刀片、单面刀片、剪刀、长镊子、培养皿、移液管、漏斗、量筒、烧杯（50、100、500、1000m1），酒精灯、火柴、玻璃棒、吸耳球、封口薄膜、牛皮纸、线绳、牛皮筋、脱脂棉、滤纸、pH试纸（5.4-7.0）、标签纸、称量纸、药勺等。1N盐酸,1NNaOH,0.生长周期短，繁殖率高；培养基的种类很多，不同的培养基有其不同的特点。玉米素应该溶于95%的乙醇中再定容。5mg/L,1mg/L,2mg/L所需要的体积为：1.（1）打开灭菌锅盖，向锅内加水。8%的琼脂,3%的蔗糖.（4）不同激素浓度培养基的配制：取200ml烧杯3个，分别吸取所需要的2,4-D溶液(0.（3）MS基本培养基的配制：分别吸取MS贮备液30.034×105Pa）,灭菌20分钟。管理方便，利于自动化控制。培养基的种类很多，不同的培养基有其不同的特点。（4）将灭菌材料放在灭菌的滤纸上,吸干水分。（4）将灭菌材料放在灭菌的滤纸上,吸干水分。COURSENAME（5）将配制好的培养基分装于50ml三角瓶中，盖上封口膜，并用牛皮纸包扎。1mg/ml的6-BA溶液：取25mg的6-BA，用少量1N的盐酸溶解，再加蒸馏水定容至250ml。次氯酸钠消毒液,75%的酒精,0.2％的升汞溶液.1N盐酸,1NNaOH,0.8%的琼脂,3%的蔗糖.

0.1mg/ml的2,4-D溶液：取25mg的2,4-D，加入少量95%的酒精和1N的NaOH溶解，再加蒸馏水定容至250ml。0.1mg/ml的6-BA溶液：取25mg的6-BA，用少量1N的盐酸溶解，再加蒸馏水定容至250ml。表.1MS培养基储备液的配制肆实验步骤1培养基的配制（1）母液配制：按照表1分别配制，并在4℃冰箱中保存。（2）植物激素配制：称取10mgNAA,加入少量酒精，并加水定容50ml(浓度为0.2mg/ml),用同样的方法配制2，4-D母液。称取50mg6-BA,加少量的1mol/LHCl，使其充分溶解，然后加水至50ml(浓度为1mg/ml)。4

（3）MS基本培养基的配制：分别吸取MS贮备液30.0ml（大量元素）、3.0ml微量元素、3.0ml铁盐、3.0ml有机,加入1L的搪瓷缸中，然后称取蔗糖18.0g,加入琼脂4.8g，加蒸馏水约550ml，在电炉上加热，煮沸，融化琼脂，然后加水至560ml。（4）不同激素浓度培养基的配制：取200ml烧杯3个，分别吸取所需要的2,4-D溶液(0.5mg/L,1mg/L,2mg/L所需要的体积为：1.0，2.0,4.0ml)，然后加入MS基本培养190ml，搅拌均匀后，用10%的NaOH调节pH至5.8。

加水定容至200ml。（5）将配制好的培养基分装于50ml三角瓶中，盖上封口膜，并用牛皮纸包扎。5

2培养基灭菌（1）打开灭菌锅盖，向锅内加水。（2）加水后，将待灭菌的物品放入锅内，不要放的太多，以免影响灭菌效果。物品不要近靠锅壁，以免冷凝水顺壁流入物品中。（3）加盖旋紧螺旋。（4）打开放汽阀，加热，自开始产生蒸汽后5分钟，再关紧放汽阀，此时锅内的冷空气已由排气孔排尽，让温度随蒸汽压力的增高而上升。（5）待压力逐渐上升到所需压力时（一般为15磅/时，1.034×105Pa）,灭菌20分钟。（6）灭菌后，待压力降至0时，开盖，取出灭菌物品。（在压力未完全下降前，切勿打开锅盖）。3胡萝卜组织培养（1）取两个50ml的小烧杯,分别倒入25ml的70%的酒精和0.2%的升汞。（2）取胡萝卜贮藏根，洗净，然后将胡萝卜根于70％酒精中浸泡数秒钟。（3）浸于0.2％氯化汞（升汞）液中消毒灭菌10min后,再用无菌水冲洗3—4次。（4）将灭菌材料放在灭菌的滤纸上,吸干水分。（5）用解剖刀将胡萝卜切去表皮和中柱，取皮层，切成0.5cm见方的小块，接种于MS附加2.0mg/L2，4-D培养基内,于25℃，黑暗或漫射光下培养,14—21天后继代一次。4水稻成熟胚组织培养（1）取成熟种子，用70％乙醇浸l