鞭毛染色实验报告

鞭毛染色实验报告一．实验目的学习并掌握鞭毛染色法并了解鞭毛的形态特征巩固显微镜操作技术及无菌操作技术学习压滴法观察细菌运动性（活细胞）二．实验原理细菌鞭毛染色法的基本原理简单染色法适用于一般的微生物菌体的染色，而某些微生物具有一些特殊结构，如鞭毛，对它们进行观察之前需要进行有针对性的染色。鞭毛是细菌的纤细丝状的运动器。鞭毛的有无、数量及着生方式也是细菌分类的重要指标。鞭毛直径一般为10~30nm，只有用电镜才可以直接观察到。若要用普通光学显微镜观察，必须使用鞭毛染色法。首先用媒染剂处理，使媒染剂附着在鞭毛上使其加粗，然后用碱性复红（gray氏染色法）、碱性复品红（leifson氏染色法）、硝酸银（west氏染色法）或结晶紫（difco氏染色法）进行染色。压滴法观察活菌运动的基本原理鞭毛的功能相当于船的螺浆，在水中可以高速旋转从而推动菌体前行，因此水体环境才是鞭毛细菌自由驰骋的天地。鞭毛的旋转速度是非常快的，每秒钟旋转两百到一千多转，比一般的电动机要快得多。鞭毛的高速旋转是由其附着于菌体上的基体旋转带动的，基体实际上就是鞭毛的基部，它由一个中轴套上两个或四个环构成，镶嵌固定在细菌的体表（细胞膜和细胞壁）中，在科学家的眼中，基体简直就是一台精巧的纳米机械-分子马达，但这个马达并不是靠电流驱动，而是用伴随着细胞膜两侧质子梯度的消失产生的生物能量atp来驱动，鞭毛马达还可以转向（从反时针旋转变为顺时针旋转）从而使菌体发生翻滚进而改变细菌的运动方向，事实上细菌在游动时也并不是单纯地一直朝前游，而是伴随着不时的随机翻滚转向，但从表观上看仍表现为细菌的前行。细菌未染色时无色透明，在显微镜下主要靠细菌的折光率与周围环境的不同来进行观察。若想观察的更加清晰，可以滴加稀释美兰等染液进行染色，注意不要染色过重，以免影响观察，有鞭毛的细菌运动活泼，且不同时向一个方向运动，而无鞭毛的细菌则呈不规则布朗运动。这样便可以在光学显微镜下观察到细菌的运动。三．实验器材菌种枯草芽孢杆菌（周生鞭毛）1~2d牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物，铜绿假单胞菌（端生鞭毛）1~2d牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物等溶液和试剂稀释美兰溶液，质量分数为95%的乙醇--水溶液，蒸馏水，硝酸银染液a液和b液等?仪器和其它用品酒精灯，载玻片，盖玻片，显微镜，双层瓶（内装香柏油和二甲苯），擦镜纸，接种环，小试管，烧杯，试管架，载玻片夹子，滴管和滤纸等四．实验内容压滴法观察活菌运动（实验步骤流程）：详细步骤：洗片用自来水和去污粉将载玻片清洗干净，然后用蒸馏水冲洗涂片在载玻片的一端滴加一滴或半滴蒸馏水，采用无菌操作将所要观察的菌种移动到水滴中少许（稍显浑浊即可），涂片完成滴加稀释美兰将稀释美兰滴加到涂片上，滴加均匀，注意不要滴加过多，否则影响活菌运动的观察?加盖玻片加盖玻片时首先使盖玻片的一端接触载玻片上的液滴的一端，然后再将另一端缓缓放下，目的是防止气泡的产生，以免影响观察迅速镜检（暗光）由于菌体是放在蒸馏水中的，而且滴加的稀释美兰对其也有一定的影响，所以装片做好后要迅速镜检，以取得最佳的观察效果详细步骤：洗片用自来水和去污粉将载玻片清洗干净，然后用蒸馏水冲洗95%乙醇溶液浸泡将洗好的载玻片放入盛有95%乙醇--水溶液的培养皿中，浸泡3~5min后取出晾干，目的是将载玻片上的油污等洗掉?涂片在载玻片的一端滴加一滴或半滴蒸馏水，采用无菌操作将所要观察的菌种移动到水滴中少许（稍显浑浊即可），将载玻片倾斜使液滴从载玻片的一端流到另一端，然后用吸水纸吸取多余的液滴，涂片完成自然干燥滴加硝酸银a液向涂片上滴加适量的硝酸银a液，保持3~5分钟水洗将上一步中所滴加的硝酸银a液洗掉，注意防止将涂片中的菌种冲掉硝酸银b液冲洗用硝酸银b液冲洗涂片，覆盖45'左右，宜稍稍加热水洗自然干燥（室温下）镜检将做好的涂片放到显微镜下，由多到少观察两种菌，以方便找到鞭毛（注：枯草杆菌的菌体较大，为周生鞭毛，也可能会出现侧生鞭毛的现象，这是因为鞭毛断掉；铜绿假单胞菌菌体较小，为端生鞭毛）五．实验结果与分析1、实验照片鞭毛染色（枯燥芽孢杆菌）形态：着色均匀，单个细胞0.7-0.8*2微米，无荚膜，周围鞭毛，能运动。革兰氏阳性菌（铜绿假单细胞菌）形态特征：呈球杆状，成对成锻炼状排列，菌体的一段有单鞭毛，用电子显微镜能观察得到它的运动方式（枯燥的运动方式）2．实验结果分析通过本次鞭毛染色实验，我认识到，以下几个方面决定了鞭毛染色是否成功。染色用玻片干净无油污是鞭毛染色成功的先决条件。菌种的菌龄。老龄的菌种的鞭毛极易脱落，因此染色后很难看见有鞭毛。可以选择菌落边缘的幼龄菌落。在盖玻片上接种的时候，只需要在水中轻轻地沾几下即可，不要用里过猛，更不能用接种环大幅涂开。若动作太重太大，菌种的鞭毛就会被刮落。银染剂的使用方式和时间很重要。若时间过短或方式不当，就很难在媒染剂上着色，那么，我们也就没有办法在显微镜下观察到鞭毛了。鞭毛染色的玻片最好是自然晾干。加热后菌种易变形，鞭毛易脱落，影响观察。六、思考题1）出鞭毛染色之外，有什么办法能观察到鞭毛？答案：用电子显微镜直接观察就行。2)你对你所做的染色法发结果满意吗？如果不满意，有哪些方面需要改进？如果满意，说说你的成功经验。答案：满意。染色时间要充足，制备载玻片时要保证载玻片已洗净，涂片时要注意不要过于用力涂抹，以免鞭毛脱落，作过程中注意动作要